中藥藥理學實驗課

1、第一組題目：延胡索提取物的鎮(zhèn)痛作用班級：成員：指導老師：延胡索提取物的鎮(zhèn)痛作用（方法的研究）一、延胡索鎮(zhèn)痛的歷史1 罌粟科紫堇屬延胡組植物延胡索的塊莖。 根據(jù)南北朝以來直到明清的醫(yī)案記載和現(xiàn)代科學研究，可把延胡索的臨床應用分為三類：1.鎮(zhèn)痛作用：延胡索中多種生物堿對胸部疼痛、胃腸疼痛、腹部疼痛、跌打扭傷等有顯著的止痛作用;2.治療心血管疾?。貉雍鲗π难芗膊∮锌隙ǖ乃幮В軘U張冠脈，治療心率失常;3.用于婦產(chǎn)科通經(jīng)、行氣：可治療痛經(jīng)和產(chǎn)婦產(chǎn)后宮縮痛?，F(xiàn)代藥理實驗證明，延胡索對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有明顯的抑制作用，能使肌肉松弛，并具有解痙作用?？诜雍骺僧a(chǎn)生類似嗎啡及可待因的效果，能緩解一般神經(jīng)痛

2、、頭痛、腰痛、關節(jié)痛、月經(jīng)痛、腫瘍疼痛等。延胡索對輕度痙攣性疼痛的有效率大致與杜冷丁相當。另外，延胡索還有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥的功效。延胡索的研究新發(fā)現(xiàn) 以中科院上海藥物研究所金國章院士為代表的藥理學家以中西醫(yī)結(jié)合的方式對延胡索進行了系統(tǒng)、深入的研究，發(fā)現(xiàn)其主要成分延胡索乙素的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜機理與傳統(tǒng)的麻醉性鎮(zhèn)痛或消炎解熱鎮(zhèn)痛機理不同，延胡索乙素是屬于植物中樞多巴胺受體抑制劑，是一種增強內(nèi)源抗痛系統(tǒng)功能的新作用機制，具有良好的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用，且安全性好，無成癮性。二、延胡索的主要功效及化學成分2功效：延胡索有活血、理氣、止痛功效和鎮(zhèn)痛、抗心肌缺血、抑制血小板聚集化學成分：延胡索甲素、延胡索乙素、延胡

3、索丙素、延胡索丁素、延胡索戊素、延胡索己素、延胡索辛素、延胡索壬素、延胡索癸素、延胡索子素、延胡索丑素、淀粉、黏液質(zhì)、揮發(fā)油及樹脂三、延胡索乙素的鎮(zhèn)痛機理3延胡索乙素生物活性最強，其左旋四氫巴馬汀對腦內(nèi)多巴胺（DA）受體有親和力起通過阻斷多巴胺DI受體增加腦內(nèi)紋狀體亮氨酸腦啡肽含量而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。 四、提取方法4、回流提取法：以延胡索乙素的提取量為考察指標，用高效液相色譜（）法測定其含量，采用正交試驗優(yōu)選提取工藝。結(jié)果優(yōu)選工藝為，以倍量乙醇回流提取次，每次提取1.5h,該提取工藝合理、轉(zhuǎn)移率高。、 動態(tài)逆流提取法：采用動態(tài)逆流提取法提取元胡中的延胡索乙素，并與滲漉法、回流法進行比較，結(jié)果在提高

4、指標成分延胡索乙素的提取率及降低提取液的含固量基礎上，減少溶劑消耗達以上。該法具有提取完全、節(jié)省能源、可實現(xiàn)連續(xù)批量生產(chǎn)、縮短生產(chǎn)周期和工藝實用性強等特點，是一種比較科學的中藥提取方法。、 超聲提取法:以氨一乙醚為溶劑，采用超聲、冷浸、熱回流種方法提取延胡索，并以提取物生物堿中延胡索乙素提取量為考察指標進行比較研究。結(jié)果表明超聲提取方法含量高、操作簡便。、 超臨界2流體萃取法：技術(shù)是利用超臨界2的高滲透性和高溶解能力來提取和分離物質(zhì)的一種新的單元提取分離技術(shù)。五、三種常用的鎮(zhèn)痛試驗方法5熱板法試驗目的與要求：1.熟悉延胡索鎮(zhèn)痛的主要成分及提取方法；2.掌握三種常用的鎮(zhèn)痛試驗方法；3.了解延胡索

5、的一些研究新進展；4掌握熱板測痛儀的使用。試驗原理及材料:將小鼠置于恒溫熱板上，熱刺激小鼠足部產(chǎn)生疼痛反應，以其舔足作為“疼痛”反應指標。當小鼠開始出現(xiàn)疼痛反應的時間作為小鼠痛閾值，比較各組間痛閾值的差異，判斷藥物有無疼痛作用。動物：14只小鼠（雌性），體重18-22克藥物：生制延胡索、醋炙延胡索、生理鹽水主要器材：熱板測痛儀，秒表，注射器等。試驗方法步驟：1、給藥前先測定每只小鼠的痛閾值(共測二次，以平均值為5-30s者為合格)2、 將9只小鼠編號分為3組：（生制延胡索組、醋炙延胡索組、生理鹽水組）3、 給生制延胡索組、醋炙延胡索組、生理鹽水組小鼠灌胃延胡索0.1ml/10g，30min后將

6、恒溫水浴調(diào)節(jié)至55±05。C，金屬盤的底部接觸水面，加熱后作為熱刺激，用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時間(s)作為該鼠的痛閾值。給藥后每隔0.51h測定一次，連續(xù)數(shù)次，如痛閾值超過60s,即停止測試而按60s計(時間過久，易燙傷足部)。試驗數(shù)據(jù)記錄與處理:實驗結(jié)束，按所測之痛閾平均值計算痛閾提高百分率。 用藥后痛反映時間-用藥前平均痛反應時間痛閾值提高百分率= ×100% 用藥前平均痛反應時間 以時間為橫座標，痛閾提高百分率為縱座標，繪出鎮(zhèn)痛作用時程曲線，以分析藥物的作用強度、作用開始時間和持續(xù)時間。藥物對小鼠熱刺激的鎮(zhèn)痛作用組別小鼠數(shù)（n）劑量（）mg/kg用藥前

7、平均痛閾值（s）用藥后痛閾值（s）痛閾提高百分率生制延胡索組醋炙延胡索組生理鹽水組注意事項: 1 小鼠不能連續(xù)進行測定 2 室溫對本實驗有一定影響，以1520為宜 3 小鼠疼痛易躁動，注意安全。思 考:影響熱板法鎮(zhèn)痛實驗準確的因素有哪些？扭體法實驗目的1 掌握鎮(zhèn)痛的實驗方法2 觀察藥物鎮(zhèn)痛作用實驗原理小鼠腹腔注射化學物質(zhì)，可刺激腹膜引起腹腔深部大面積且較持久的疼痛，并引起小鼠”扭體“反應（腹部內(nèi)凹，軀體與后退伸張等）。本實驗以藥物減少小鼠扭體反應的只數(shù)及次數(shù)作為指標，觀察藥物鎮(zhèn)痛作用。材 料動 物：小鼠，體重18-22克，雌雄各半。試 劑：生制延胡索、醋炙延胡索、生理鹽水。主要器材：秒表，注射

8、器，鼠籠等。方 法取健康小鼠，雌雄各半，隨機分為生理鹽水組（等體積生理鹽水），生制延胡索（灌胃10g/0.1ml生制延胡索水煎液）和醋炙延胡索組（灌胃10g/0.1ml醋炙延胡索水煎液）。給藥后30min各組小鼠腹腔注射0. 6%醋酸液0. 2ml/只，記錄15min內(nèi)各組小鼠扭體反應的次數(shù)，并計算藥物鎮(zhèn)痛百分率。給藥鎮(zhèn)痛百分率=（對照組平均扭體反應次數(shù)-給藥組平均扭體反應次數(shù)）/對照組平均扭體反應次數(shù)×100%藥物對小鼠扭體反應的影響組別小鼠數(shù)（n）劑量（mg/kg）扭體次數(shù)抑制率（%）生理鹽水組生制延胡索醋炙延胡索組注意事項1 醋酸有揮發(fā)性，應用時臨時配；2 每只小鼠腹腔注射部位

9、和操作技術(shù)力求一致。思 考:扭體法觀察藥物鎮(zhèn)痛作用有哪些優(yōu)點？光照甩尾法【原理】:    鼠尾光照甩尾鎮(zhèn)痛方法是通過固定強度的光束,持續(xù)照射到鼠尾產(chǎn)生集熱效應,使鼠尾局部溫度升高從而產(chǎn)生疼痛.當灼熱產(chǎn)生的疼痛超過動物能忍受的痛閾時,動物會以甩尾來回避疼痛,以甩尾作為判斷痛閾改變的指標,是鎮(zhèn)痛藥物篩選的物理性致痛方法之一.【方法與步驟】:    將大鼠或小鼠放入鼠固定器內(nèi),露出鼠尾然后緊固.待動物安靜后,將尾部擺放在測痛儀光電控制探頭中間的出光孔上,測定指示燈出現(xiàn)慢閃動,按“開始”鍵或踏下腳踏開關,計時開始,當鼠尾受熱刺激疼痛擺動時,光源自動關閉,停止計時,鎖定數(shù)據(jù)(痛閾值)并記錄給藥前后動物痛閾的變化.動物藥物處理和測定時間同痛熱板法.數(shù)據(jù)處理:給藥鎮(zhèn)痛百分率=（對照組平均扭體反應次數(shù)-給藥組平均扭體反應次數(shù)）/對照組平均扭體反應次數(shù)×100%藥物對小鼠扭體反應的影響組別小鼠數(shù)（n）劑量（mg/kg）扭體次數(shù)抑制率（%）對照組給藥組陽性藥組【注意事項】:    注意區(qū)別鼠尾自然擺動與痛刺激時甩尾的差異參考文獻1馬勝興，等，延胡索研究概況。中醫(yī)研究院西苑醫(yī)院心血管病研究室，1985；5；12