肝素鈉生產(chǎn)工藝

1、一、肝素分類 肝素是哺乳動物體內(nèi)含的一種粘多糖，它與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起存在于腸粘膜、肺、肝等器官內(nèi)，肝素與蛋白質(zhì)分離提取后，具有抗凝血、抗血栓、降血脂等多種生理活性，是防止動脈粥樣硬化，心腦血管疾病的顯效藥物。(1) 普通(標(biāo)準(zhǔn))肝素是由豬或羊黏膜提取，平均分子量為15000，相當(dāng)穩(wěn)定。 (2) 通常把分子量小于6000的稱為低分子肝素。低分子肝素與普通肝素比較，其半衰期較長，抗血栓效果好，而抗凝出血傾向較弱，有取代普通肝素的趨勢。近年臨床常用的有：達(dá)肝素鈉(法安明)、依諾肝素鈉(克賽)、低分子肝素鈣(速避凝、那屈肝素鈣)。 (3) 目前正在深入研究的肝素制劑中還有低抗凝活性肝素、改構(gòu)型肝素、類

2、肝素等, 這些藥物特點是具有低抗凝、高抗栓、作用時間長和出血作用少的優(yōu)點，很有開發(fā)前途。 二、肝素鈉簡介拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium 本品系自豬的腸黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質(zhì)，通過激活抗凝血酶(AT-)而發(fā)揮抗凝作用。它對凝血過程的三個階段均有影響，在體內(nèi)外均有抗凝作用，可延長凝血時間、凝血酶原時間和凝血酶時間?？诜晃眨は?、肌肉或靜脈給藥均吸收良好。 三、肝素鈉檢測 （藥典版）拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium 本品系自豬或牛的腸黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬黏多糖類物質(zhì)，具有延長血凝時間的作用。按干燥

3、品計算，每1mg 的效價不得少于150 單位。 【性狀】 本品為白色或類白色的粉末；有引濕性。 本品在水中易溶。 【比旋度】 取本品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml 中含40mg的溶液，依 法測定（附錄 E），比旋度應(yīng)不小于35°。 【鑒別】 (1) 取本品與肝素標(biāo)準(zhǔn)品，分別加水制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，照 電泳法（附錄 F第三法）試驗，供試品和標(biāo)準(zhǔn)品所顯斑點的遷移距離之比應(yīng)為0.9 1.1 。 (2) 本品的水溶液顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)（附錄）。 【檢查】 酸堿度 取本品0.10g ，加水10ml溶解后，依法測定（附錄 H），pH 值應(yīng)為5.0 7.5 。 溶液的澄清度

4、與顏色 取本品0.50g ，加水10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清無色；如顯渾 濁，照分光光度法（附錄 A），在640nm 的波長處測定，吸收度不得大于 0.018；如 顯色，與黃色1 號標(biāo)準(zhǔn)比色液（附錄 A第一法）比較，不得更深。 吸收度 取本品，加水制成每1ml 中含4mg 的溶液，照分光光度法（附錄 A）測 定，在260nm 的波長處，其吸收度不得大于0.20；在280nm 的波長處，其吸收度不得大 于0.15。 黏度 精密稱取本品（按實際測得的單位計算相當(dāng)于40萬單位），加水適量研細(xì) ，移入干燥并稱定重量的10ml量瓶中，研缽用水沖洗并移入量瓶中，將量瓶置25水浴 內(nèi)，俟溫度平衡后，加25水至

5、刻度，搖勻，稱定重量，計算供試品溶液的密度。取溶 液，必要時用0.45m 的濾膜過濾，照黏度測定法（附錄 G第一法），用內(nèi)徑約為 1 mm的毛細(xì)管，在25±0.1 測定其動力黏度，不得大于0.030Pa.s 。 總氮量 取本品，照氮測定法（附錄 D第二法）測定，按干燥品計算，含總氮量應(yīng) 為1.3 2.5 。 硫 取本品約25mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法（附錄 C）進(jìn)行有機破壞，選用 1000ml燃燒瓶，以濃過氧化氫溶液0.1ml 與水10ml為吸收液，俟生成的煙霧完全吸收后 ，置冰浴中15分鐘后，加熱緩緩煮沸2 分鐘，冷卻，加乙醇醋酸銨緩沖液 (pH3.7)50 ml，乙醇30ml，

6、0.1 茜素紅溶液0.3ml 為指示液，用高氯酸鋇滴定液(0.05mol/L) 滴 定至淡橙紅色。每1ml高氯酸鋇滴定液(0.05mol/L) 相當(dāng)于1.603mg 的S，按干燥品計算，含 硫量不得少于10.0。 干燥失重 取本品，置五氧化二磷干燥器內(nèi)，在60減壓干燥至恒重，減失重量不得過 5.0%（附錄 L）。 熾灼殘渣 取本品0.50g ，依法檢查（附錄 N），遺留殘渣應(yīng)為28.041.0。 鉀鹽 取本品0.10g ，置100ml 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（B）；另量取標(biāo)準(zhǔn)氯化鉀溶液（精密稱取在150干燥1 小時的分析純氯化鉀 191mg ，置1000ml量瓶中，

7、加水溶解并稀釋至刻度，搖勻） 5.0ml，置50ml量瓶中，加（B）溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液（A）。照原子吸收分光光度法（附錄 D雜質(zhì)檢查法）在766.5nm 的波長處分別測定，應(yīng)符合規(guī)定。 重金屬 取本品0.50g ，依法檢查（附錄 H第二法），含重金屬不得過百萬分之 三十。 熱原 取本品，加氯化鈉注射液制成每1ml 中含1000單位的溶液，依法檢查（附錄 D），劑量按家兔體重每1kg 注射2ml ，應(yīng)符合規(guī)定。 【效價測定】 照肝素生物檢定法（附錄 D）測定，應(yīng)符合規(guī)定；測得的結(jié)果應(yīng) 為標(biāo)示量的91110 。 【類別】 抗凝血藥。 【貯藏】 密封，在涼暗處保存。 【制劑】 肝素鈉

8、注射液四、肝素鈉生產(chǎn)工藝流程1、鹽解：將刮好的新鮮腸粘膜，每100斤腸粘膜加入清水100斤，按腸粘膜和水的總重量，加入4%的工業(yè)鹽，攪拌均勻，再加燒堿液調(diào)PH值為8-9，緩慢升溫50-55度，加溫時每10-20分鐘加水?dāng)嚢枰淮?，恒?小時，注意要間隔攪拌。恒溫結(jié)束后，要快速升溫到96-98度，恒溫10分鐘，趁熱撈出上層的渣子。用100目尼龍布過濾。 注意： 加鹽過多會使下一步交換吸附含量超過規(guī)定，加鹽過少，肝素和蛋白質(zhì)分離不完全，堿性過強，會使肝素降解破壞，收率下降。同時還能使一些蛋白質(zhì)溶解度增大，造成過濾困難。堿性不足造成提取液偏酸，則在高溫的情況下，肝素迅速破壞，升溫過急會使蛋白質(zhì)早凝固，

9、影響肝素的分解和溶出。 2、吸附：待提取液溫度冷至50-55度，應(yīng)檢測鹽濃度為3。5-5%時，即可加入5%已處理號的樹脂。如樹脂上含有鹽水，需用清水將樹脂洗凈控干，方可使用。攪拌吸附6-8小時，轉(zhuǎn)速60-80轉(zhuǎn)/分鐘為宜，攪拌須使樹脂上下翻動，否則吸附效果差，收率低。吸附完畢，棄去上層吸附液，然后用100目的尼龍布過濾出樹脂。加入提取液的樹脂量：新樹脂可按提取液的5-6%加入，舊樹脂可按提取液的8-10。 3、洗滌：過濾后的樹脂用40度左右的溫水，漂洗干凈。再放入與樹脂重量相等的鹽溶液中(鹽溶液的濃度為5%左右)洗滌10-20分鐘，除去低分子肝素和一些蛋白質(zhì)，然后將樹脂過濾。 4、洗脫：第一次

10、洗脫將過濾號的樹脂放入濃度為20-22%的鹽溶液中攪拌洗脫5-6小時，樹脂和鹽水的比例為1：0。7。過濾后將樹脂控干進(jìn)行第二次洗脫，調(diào)鹽溶液濃度為16-18%，攪拌3小時以上，樹脂和鹽水的比例與第一次相同，過濾后的水即是藥液。 5、除雜：將稀堿水加入洗脫后的藥液里，要快攪慢加，調(diào)PH值為10-12攪拌2分鐘，靜止沉淀20小時后，抽出上層藥液，下沉的是雜質(zhì)，且渣子放另外桶內(nèi)過濾。過濾后的藥液和下次藥液除雜時合并待用。 6、沉淀：將抽出除雜后的藥液加入鹽酸調(diào)PH值為7-7。5，即可加入酒精進(jìn)行沉淀。向藥液里加入酒精要快攪慢加。(由于酒精的濃度不同，因此沉淀肝素的酒精用量不等)用酒精計測量酒精度為3

11、0-35%，加蓋密封，沉淀20小時。棄去廢酒精收集糊狀肝素。注意在抽出廢酒精時，不可抽動沉淀的肝素。將多次生產(chǎn)的肝素鈉漿收集在一起，以備集中脫水干燥。 7、脫水：將生產(chǎn)的肝素鈉漿，用雙層的確良布過濾后放入95%的酒精內(nèi)浸泡20小時，加蓋密封。過濾后按上述方法重復(fù)一次，使其充分的將肝素上的水分交換下來。 8、干燥：待肝素鈉漿瀝干后，放在不銹鋼盤中烘干，用鏟子來回的翻動，溫度保持在50-55度，注意溫度低于要求是不易烘干的，溫度高于60度時會使肝素鈉的生物活性下降。干燥后的肝素很易吸潮，應(yīng)及時用雙層塑料袋密封包裝，于通風(fēng)干燥處存放。五、肝素鈉精制新工藝本工藝采用酶解結(jié)合氧化法精制肝素，在該過程中采

12、用低溫離心技術(shù),解決在除酸性蛋白過程中，粗品肝素鈉中殘留雜蛋白在純化過程中很難被除去的缺點。在粗品肝素鈉中加入胰蛋白酶對這些雜蛋白進(jìn)行酶解,再結(jié)合一次氧化除雜過程,從而提高精品肝素鈉的效價和效價回收率。1、工藝流程2、溶解稱取適量肝素鈉粗品加質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%左右NaCI溶液進(jìn)行溶解。50水浴加熱，用NaOH溶液調(diào)pH至8.0靜置2小時，過濾除不溶性雜質(zhì)。3、酶解法除蛋白肝素在動物體內(nèi)是以肝素-蛋白質(zhì)復(fù)合物的形式存在，通過酶解或鹽解去除復(fù)合物的蛋白質(zhì)成分，游離肝素。但在實際生產(chǎn)過程中，復(fù)合物的解離，蛋白質(zhì)的除去是不完全的，粗品中總存在數(shù)量不等的蛋白質(zhì)。粗品肝素鈉必須經(jīng)過精制，可以進(jìn)一步去除粗品中殘存的結(jié)合蛋白質(zhì)，不僅因雜蛋白的去除而提高效價，而且因被“掩蔽”的肝素活性得到釋放而獲得較高活性。為此，利用蛋白水解酶專一水解蛋白的特點，并結(jié)合調(diào)酸除蛋白和氧化除蛋白方法,采用酶解除蛋白法，該法能在除去蛋白質(zhì)時較少影響肝素總效價。在肝素鈉溶液中加入少量的胰蛋白酶，使殘留在肝素中的少量蛋白質(zhì)降解成小分子肽,從肝素-蛋白質(zhì)復(fù)合物中解離出來，再結(jié)合調(diào)酸堿和氧化法除蛋白,制得精品肝素鈉的效價和效加回收率均有不同程度提高。酶解反應(yīng)條件：蛋白酶加入量0.05%， pH 79， 溫度40，反應(yīng)時間5h。4、調(diào)酸除蛋白在調(diào)酸除蛋白過程中，為防止肝素失活,加入亞硫酸氫鈉作保護(hù)劑。在低溫下離心脫