人肺炎支原體抗體IgMMP-IgM酶聯(lián)免疫分析

1、人肺炎支原體抗體 IgM （ MP-IgM ）酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍： 96T1.5 ng/L -40 ng/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、 血漿及相關液體樣本中肺炎支原體抗 體 IgM （ MP-IgM ）含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人肺炎支原體抗體 IgM （MP-IgM ）水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包 被單抗的微孔中依次加入肺炎支原體抗體IgM（MP-IgM ），再與 HRP標記的抗原結合，形成抗原 -抗體 -酶標 -抗原復合物，經(jīng)過徹底洗滌 后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉化

2、成藍色，并在 酸的作用下轉化成最終的黃色。 顏色的深淺和樣品中的肺炎支原體抗 體IgM （MP-IgM ）呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光 度（ OD 值），通過標準曲線計算樣品中人肺炎支原體抗體 IgM（MP-IgM ）濃度。試劑盒組成1 30倍濃縮洗滌液20ml X 1瓶7終止液6ml X 1瓶2酶標試劑6ml X 1瓶8標準品（80 ng/L）0.5ml X 1瓶3酶標包被板12孔X 8條9標準品稀釋液1.5mlX 1瓶4樣品稀釋液6ml x 1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml x 1瓶11封板膜2張6 顯色劑 B 液 6mlx 1/瓶 12 密封袋 1 個標本要求1 標

3、本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應 盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20 C保存，但應避免反復凍融2不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的 （HRP）活性。操作步驟1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照 下列圖表在小試管中進行稀釋。40 ng/L 5號標準品150卩I的原倍標準品加入150卩I標準品稀釋 液20 ng/L 4號標準品150卩啲5號標準品加入150卩I標準品稀 釋液10 ng/L 3號標準品150卩啲4號標準品加入150卩I標準品稀 釋液5.0 ng/L 2號標準品150卩I 的 3號標準品加入150卩

4、I標準品稀 釋液2.5 ng/L 1號標準品150卩I 的 2號標準品加入150卩I標準品稀釋液2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其 余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準 確加樣50卩,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40卩,然后再加待測樣品 10 口1（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37 C溫育30分鐘。4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液， 靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

5、6. 加酶：每孔加入酶標試劑50卩,空白孔除外。7. 溫育：操作同 3。8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50,再加入顯色劑B50,輕輕 震蕩混勻，37 C避光顯色15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50卩,終止反應（此時藍色立轉黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零， 450nm 波長依序測量各孔的吸光度（ OD 值）。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結：計算以標準物的濃度為橫坐標， OD 值為縱坐標， 在坐標紙上繪出標 準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀 釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方 程式，

6、將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使 用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶， 洗滌時不影響結果。3各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試 驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦 使用排槍加樣。4 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測 物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先 用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總 稀釋倍數(shù)（x nx 5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。 7嚴格按照說明書的