高中生物論文動(dòng)物細(xì)胞工程中的目的雜種細(xì)胞的兩次篩選人教版

1、動(dòng)物細(xì)胞工程中目的雜種細(xì)胞的兩次篩選在單克隆抗體的制備中，獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞是關(guān)鍵。當(dāng)已免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的過程中，將會(huì)形成多種細(xì)胞的混合體，包括B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、BB融合細(xì)胞、骨髓瘤骨髓瘤融合細(xì)胞、B骨髓瘤融合細(xì)胞（即雜交瘤細(xì)胞）和細(xì)胞多聚體（容易死亡，無需篩選），如何從混合細(xì)胞中提取到雜交瘤細(xì)胞呢？我們通過下面的例題進(jìn)行說明。下圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據(jù)圖解回答問題： （1）圖中有A、B兩次篩選過程，其中A過程目的是篩選出 ，B過程目的是篩選出 。（2）請(qǐng)根據(jù)以下信息，設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法）從培養(yǎng)液中篩選出雜交瘤細(xì)胞。已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩

2、種途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤細(xì)胞中雖然沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細(xì)胞。方法： 。原理： 。【解析】從不同種類細(xì)胞中篩選出雜交瘤細(xì)胞一般要經(jīng)過兩次篩選。第一次篩選（圖中A過程）：目前常采用HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞。其原理是：DNA的合成有D和S兩種途徑。B淋巴細(xì)胞具有D和S兩種DNA合成途徑，但一般不分裂增殖；骨髓瘤細(xì)胞只有一種DNA合成途徑，即D途徑，可無限增殖；雜交瘤細(xì)胞具有D和S兩種DNA合成途徑，它利用其中任何一個(gè)途徑都可無限增殖。由于HAT選擇培養(yǎng)基是在普通

3、培養(yǎng)液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）等物質(zhì)配制而成，由于氨基喋呤可阻斷D途徑，僅有D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞不斷增殖，而且B淋巴細(xì)胞一般不增殖，淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜交瘤細(xì)胞可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖。所以多種不同形式細(xì)胞的混合體在HAT選擇培養(yǎng)液中，只有雜交瘤細(xì)胞能存活下來并不斷增殖。第二次篩選（圖中B過程）：由于實(shí)驗(yàn)小鼠在注射目標(biāo)抗原前，其體內(nèi)已存在大量的病原體，因此小鼠體內(nèi)會(huì)存在大量的針對(duì)不同種類抗原的免疫B淋巴細(xì)胞 。所以在細(xì)胞融合時(shí)產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞才是所需要的。目前篩選出目標(biāo)抗原的最常用方法是有限稀釋法，其基本過程是：

4、將處于對(duì)數(shù)期的雜交瘤細(xì)胞用培養(yǎng)液充分稀釋后，接種在培養(yǎng)板中（B過程圖所示），然后用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，（簡(jiǎn)稱ELISA，基本原理是酶分子與抗體或抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本的中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法），利用上述方法選出針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞。答案：（1）雜交瘤細(xì)胞 能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞（2）方法：培養(yǎng)液中加入氨基喋呤，收集增殖的細(xì)胞原理：加入氨基喋呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其