醫(yī)療器械無菌檢查操作規(guī)程

1、醫(yī)療器械無菌檢查操作規(guī)程1. 目的建立無菌檢查的標準操作規(guī)程，確保檢驗結(jié)果的準確性。2. 適用范圍本規(guī)程適用于本公司質(zhì)管部對本廠生產(chǎn)的一次性微波消融針的無菌檢測。3. 職責質(zhì)量部負責實施。4. 內(nèi)容檢驗依據(jù)產(chǎn)品注冊標準中華人民共和國藥典2015 年版 無菌檢查法儀器、設(shè)備超凈工作臺、電熱干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、集菌儀、電子天平、PH計、冰箱、恒溫水浴鍋、酒精燈、三角燒瓶，接種環(huán)、銀子，試管架，大試管若干等。培養(yǎng)基及稀釋液需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；霉菌培養(yǎng)基：大豆酪蛋白肉湯培養(yǎng)基；培養(yǎng)基的無菌性檢查 的無菌性檢查每批配制的培養(yǎng)基均應進行無菌性檢查 （可與產(chǎn)品無菌檢驗

2、同步進行） 。 檢查時，每批培養(yǎng)基隨機取不少于 5 支（瓶）培養(yǎng)14 天，應無菌生長；稀釋液氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液， 9g/L 無菌氯化鈉溶液；無菌檢驗室的環(huán)境要求（ 1） 無菌檢驗應在環(huán)境潔凈度10000級下的局部百級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。（ 2）緩沖區(qū)與外界環(huán)境、無菌檢驗室與緩沖區(qū)之間空氣應保持正壓，陽性對照室與緩沖區(qū)之間空氣應保持負壓。無菌檢驗室與室外大氣之間靜壓差應大于10Pa。無菌檢驗室白室溫應保持 1826C,相對濕度：4565%（ 3） 無菌檢驗室的單向流空氣區(qū)、 工作臺面及環(huán)境應定期按 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標準進行懸浮粒子、浮游菌

3、和沉降菌的監(jiān)測。（ 4） 無菌檢驗過程中應同時檢查超凈工作臺單向流空氣中的菌落數(shù)： 每次操作時在層流空氣所及臺面的左中右置3個TSA瓊脂平板，暴露30min,于3035c培養(yǎng)48小時，菌落數(shù)平均應不超過1CFU砰板。無菌檢驗前的準備器具滅菌、消毒可經(jīng)壓力蒸汽滅菌器內(nèi) 121蒸汽滅菌30分鐘后使用。人員、物料進入無菌檢驗室開啟紫外線燈或臭氧發(fā)生器進行空間滅菌處理，消毒時間不得少于30min。物料進入無菌檢驗室流程進入無菌操作室的所有培養(yǎng)基、 供試品等的外表都應采用適用的方法進行消毒處理，以避免將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗室。人員進入無菌檢驗室流程1） 更鞋脫衣：在一更區(qū)脫去一般區(qū)工作鞋，穿上

4、無菌檢驗室工作鞋；脫去一般區(qū)工作鞋，穿上無菌檢驗室工作鞋；脫去般區(qū)工作服。（ 2）洗手：首先用洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水連續(xù)沖洗20 秒，洗凈泡沫。（ 3）更衣：在二更區(qū)按照要求穿衣，要求褲子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽 子包裹所有頭發(fā)。（ 4）手消毒：用消毒液浸泡雙手5 秒以上或用浸過消毒液的棉球擦拭雙手。消毒液可用洗必泰、新潔爾滅、碘伏、75%酒精等。（ 5）人員進入：經(jīng)緩沖間進入無菌檢驗室。無菌檢驗操作要求（ 1）全過程必須嚴格執(zhí)行無菌操作，防止微生物污染。（ 2）使用玻璃器皿應輕取輕放，避免破損，以防培養(yǎng)物擴散。（ 3）所有操作不得有大幅度或快速動作，以免攪動空氣中的塵埃微粒。（

5、 4） 使用金屬接種器具時，用前、用后均需灼燒滅菌。（ 5） 在接種培養(yǎng)物時，動作應輕、準，防止培養(yǎng)物濺出，產(chǎn)生汽溶膠，造成污 染。（ 6） 作過程中所有的帶菌物品，用后均應作消毒、滅菌處理。在檢驗完成后經(jīng)傳遞窗傳至一般區(qū)，立即用壓力蒸汽滅菌鍋121滅菌 30分鐘。對照菌液制備無菌檢驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5 代。取金黃色葡萄球的普通瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種金黃色葡萄球至TSA瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，在3035c培養(yǎng)1824h后備用，同時制備M化鈉溶7加入在6支小試管 內(nèi)，每支試管內(nèi)加的氯化鈉溶液，在壓力鍋內(nèi)經(jīng)121c滅菌30min備用。將已 配好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)菌液取加入第一支小試管內(nèi)，稀釋成濃度

6、1:10 的菌液；取第一支試管內(nèi) l 菌液加入第二支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:100 的菌液，同法稀釋成濃度1:10-6 （每ml含菌量0 100CFU即可。采用平皿計數(shù)法測定活菌數(shù)。. 試驗方法供試液準備優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)的方法，如供試品不適宜直接投放， 可按下列方法制備供試液， 應使浸提介質(zhì)充分洗提供試品的浸提表面，供試液制備應按無菌操作法進行，在制備后 2 小時內(nèi)使用。根據(jù)供試品具體特性選擇下列方法：a） 管類器具：按管內(nèi)表面積每10cm2 流過管內(nèi)腔1ml 浸提介質(zhì)，流量約為10ml/min ，收集到無菌的容器內(nèi)。b）容器類器具：按容器內(nèi)表面積每1

7、0cm2加入浸提介質(zhì)1ml的比例，振搖數(shù)次。c）實體類器具：實體類器具按表面及每10cm加入浸提介質(zhì)1ml,振搖數(shù)次。收集上述沖洗液或浸提介質(zhì)于無菌容器中。接種薄膜過濾法：優(yōu)先采用封閉式薄膜過濾器（集菌器） ，也可使用開放式薄膜過濾器。濾膜孔經(jīng)不大于 m0a、 如采用封閉式薄膜過濾器， 取一副三聯(lián)式集菌器， 將供試液通過集菌儀過濾，使通過每只培養(yǎng)管的量基本均勻。然后通過集菌儀一只加 50ml TSB 培養(yǎng)基，另兩只分別加入 50ml 硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（其中一只做陽性對照，內(nèi)加金黃色葡萄球菌液1ml） 。另取一副二聯(lián)集菌器，用同批的沖洗液或浸提介質(zhì)50ml 通過集菌儀過濾（每只約50ml）,同法

8、一只加硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 50ml,另一只加TSB培養(yǎng) 基 120ml 分別作陰性對照。b、如用一般薄膜過濾器，將供試液過濾后取出濾膜，將其剪成3等份，分別置 于含50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及 TSB培養(yǎng)基的容器中，其中兩份作檢驗，一 份作陽性對照。直接接種法： 適用于一次性使用注射針、 一次性使用靜脈輸液針 （包括輸液器、輸血器、注射器配套使用注射針） 。a、 敷料供試品： 取規(guī)定數(shù)量， 每個包裝以無菌操作拆開， 于不同部位剪取約 120mg 或1cmx 3cm的供試品，接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。b、無菌針頭：直接投入含15ml以上硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及 TSB培養(yǎng)基的容器 中

9、。c、一次性使用的材料：拆散或切成小碎斷，接種于各管足以浸沒供試品的適量 培養(yǎng)基中。培養(yǎng)、觀察（ 1）上述含培養(yǎng)基的容器分別置規(guī)定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中，其中硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，置3035c培養(yǎng)；TSB培養(yǎng)基，置2025c培養(yǎng)。除陽性對照管 培養(yǎng)4872小時外，其余管培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應逐日觀察并記錄是否有菌生 長。（ 2）如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14 天后，不能從外觀上判斷有無微生物生產(chǎn)， 可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上， 細菌培養(yǎng) 2 天， 真菌培養(yǎng) 3 天， 觀察是否再出現(xiàn)渾濁或斜面有無菌生長。結(jié)果判斷（ 1）培養(yǎng)結(jié)束后，陽性對照管