乳腺癌層粘連蛋白受體表達與微血管密度和轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的關(guān)系

1、    乳腺癌層粘連蛋白受體表達與微血管密度和轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的關(guān)系         摘要目的：探討乳腺癌層粘連蛋白受體(LN-R)與間質(zhì)微血管密度和腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的關(guān)系及意義。方法：應(yīng)用免疫組化LSAB法檢測73例乳腺癌LN-R、FAg的表達,并對28例病人進行隨訪分析。結(jié)果：LN-R 的表達程度與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在正相關(guān)(P<0.0001)，與病理分級無關(guān)(P>0.05)，與乳腺癌間質(zhì)微血管密度（MVD）存在正相關(guān)(P<0.0001)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組其MV

2、D值明顯高于陰性組(P<0.001)。隨訪28例病人中，復(fù)發(fā)組的LN-R表達增強比率及MVD值明顯高于未復(fù)發(fā)組(P<0.05)。結(jié)論：LN-R的表達程度及MVD值均可作為判斷乳腺癌病人轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的獨立指標。關(guān)鍵詞受體，層粘連蛋白；微血管密度；乳腺腫瘤；預(yù)后中分類號R737.9文獻標識碼A文章編號1001-7399(2000)04-0294-04The relationship between laminin-receptor expression, interstitial angiogenesis and tumor metastatic, relapse ability in

3、breast carcinomas and their meaningKou Baijun, Li Yulin, Zhu Guibin, Wu Shan, Zhang Lihong(Dept of Pathol, Norman Bethune University of Medical Sciences, Changchun130021)ABSTRACTPurposeTo study the relationship between laminin-receptor expression , interstitial angiogenesis and tumor metastatic, rel

4、apse ability in breast carcinomas and their meaning. MethodsThe expression of LN-R, FAg were detected in 73 cases of breast carcinoma with immunohistochemical technique, and 28 cases patients were followed up for three years. ResultsThe expression of LN-R showed positive relation with lymph node met

5、astasis, but it was not related with pathological grade. The positive relationship had been shown between the expression degree of LN-R and MVD. There was a significant difference of MVD between positive and negative groups of lymph node metastasis. The ratio of LN-R expression enhancment and MVD in

6、 the relapse group was significantly higher than that in the non-relapse group within the 28 cases following-up patients. ConclusionBoth LN-R expression degree and MVD were regarded as independent factors in estimating metastasis and relapse in breast carcinoma patients.KEY WORDSreceptors,laminin; m

7、icrovascular density; breast neoplasms; prognosis獲得克隆性增生的腫瘤細胞，其生長、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的異同受各種因素的影響。研究表明，當實體瘤直徑大于12 mm后，就不僅僅依靠其細胞膜與周圍組織之間的滲透作用獲得營養(yǎng)；其生長和轉(zhuǎn)移有賴于血管生成。新生血管解決了腫瘤組織的物質(zhì)交換問題，從而促進其生長和轉(zhuǎn)移。細胞外粘附分子尤其是層粘連蛋白在促進腫瘤血管生成及轉(zhuǎn)移過程中作用機制錯綜復(fù)雜。LN可促進血管內(nèi)皮細胞的形成，同時成熟的血管內(nèi)皮亦分泌LN構(gòu)成基底膜成分。而LN促進腫瘤轉(zhuǎn)移是由于與腫瘤細胞表面的特異性受體LN-R結(jié)合力的顯著提高從而促進其侵襲和轉(zhuǎn)移。

8、本研究擬通過檢測乳腺癌層粘連蛋白受體的表達特點以探討其在乳腺癌間質(zhì)血管生成中的作用以及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相互關(guān)系，以期為臨床乳腺癌病人提供治療和判斷預(yù)后的參考指標。1材料與方法收集1995年1月1998年8月白求恩醫(yī)科大學(xué)各臨床學(xué)院及吉林省腫瘤醫(yī)院手術(shù)切除乳腺癌標本73例?；颊咝g(shù)前均未經(jīng)任何抗癌治療。依據(jù)1957年和1981年WHO乳腺癌的分級、分類標準確診為乳腺癌并進行病理分型。所取材經(jīng)Carnoy's液固定，梯度脫水、透明、包埋后做4 m連續(xù)切片。備HE及免疫組織化學(xué)染色。FAg（Dako，MAb) 1400，LN-R（北京醫(yī)科大學(xué)提供，MAb) 1100，LSAB試劑盒購于Da

9、ko公司。免疫組織化學(xué)采用LSAB法。結(jié)果以在腫瘤細胞胞漿、胞膜、血管內(nèi)皮細胞出現(xiàn)棕黃色顆粒，其著色強度高于背景非特異性染色者判定為陽性。免疫組織化學(xué)染色過程中，以PBS代替一抗作陰性對照。微血管包括毛細血管和小靜脈。其計數(shù)是在200×視野下在F:Ag染色的切片上進行，單個內(nèi)皮細胞著色亦作為一個計數(shù)單位；每例選擇4個不重復(fù)視野計數(shù)，然后計算每例乳腺癌的單位視野（200×視野）平均血管數(shù)，即間質(zhì)微血管密度（microvascular density，MVD)，單位為：個200×，結(jié)果用均數(shù)±標準差（<"0 (881 bytes)"

10、 src="/med/cano/201003/20100319163655969" 12 14>±s）表示。將LN-R的免疫組織化學(xué)染色切片分為3組：即切片中完全無表達或癌細胞陽性表達率小于10者為（）；陽性物質(zhì)表達率大于10但僅表達在癌細胞的近基底膜面為（）；陽性物質(zhì)表達幾乎占整個細胞膜面或在大部分胞漿中有表達為（+）。根據(jù)數(shù)據(jù)類型分別采用t檢驗，方差分析或2檢驗。所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用spass 7.5軟件包處理。2結(jié)果2.1LN-R 的表達特點和臨床指標間的關(guān)系73例乳腺癌中，有21例可見LN-R表達于癌細胞的近基底膜面，呈黃褐色顆粒感，胞漿及胞核不著色（1）

11、。另有34例乳腺癌，可見LN-R表達廣泛，幾乎占整個細胞膜甚至累及胞漿（2）。LN-R的表達程度與臨床指標間的關(guān)系見表1。由表1可知，LN-R的表達程度與病理分級無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有顯著相關(guān)（P0.0001）。2.2乳腺癌間質(zhì)微血管密度與臨床指標間的關(guān)系73例乳腺癌的平均微血管密度為47.82個200×，乳腺癌間質(zhì)微血管密度和臨床指標間的關(guān)系見3、4。從可見，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的乳腺癌其微血管密度明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者（P0.001），級和級乳腺癌之間MVD無顯著性差異，而級、級和級之間MVD的差異有顯著性（P0.05）。表1LN-R在乳腺癌中的表達與臨床指標之間的關(guān)系項別nLN-

12、R2P值()()(?)病理分級24151095.9930.19963211615172510淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（）28332218.711<0.001（）45151812     1LN-R在乳腺癌中表達于癌細胞的基底膜面，呈黃褐色，胞漿及胞核不著色。LSAB×400    2LN-R在乳腺癌中表達廣泛，幾乎分布于整個細胞膜，有的累及胞漿。LSAB×400    3乳腺癌間質(zhì)微血管密度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系     4

13、乳腺癌間質(zhì)微血管密度與病理分級之間的關(guān)系     2.3LN-R在乳腺癌中的表達程度與腫瘤微血管密度之間的關(guān)系73例乳腺癌中，LN-R的表達程度與MVD有顯著的相關(guān)性（P0.0001），即在LN-R表達程度較強的病例中其MVD明顯增高，詳見表2。表2LN-R在乳腺癌中的表達程度與腫瘤間質(zhì)微血管密度(MVD)之間的關(guān)系組別nMVDLN-R(-)1834.47±4.65(+)2144.58±6.78(?)3456.89±8.45     F=59.87P<0.0001 2.4LN-R

14、在乳腺癌中的表達程度及間質(zhì)微血管密度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系(表3，4)以MVD的平均值47.82和LN-R表達的程度為界將73例乳腺癌病例分為4組。由表3可知，在LN-R表達增強和MVD增高組中其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)明顯高于LN-R表達減弱和MVD減少組(P<0.0001)。由表4可知，隨訪的28例病人中，有11例在3年之內(nèi)復(fù)發(fā)，其中有9例LN-R表達增強（?）；而在17例未復(fù)發(fā)組中只有6例LN-R表達增強。復(fù)發(fā)組LN-R表達增強的比率明顯高于未復(fù)發(fā)組(P<0.05)。同時兩組比較，其MVD值亦有顯著差異性，即復(fù)發(fā)組MVD值明顯高于未復(fù)發(fā)組(P<0.05)。表3乳腺癌LN-R表達

15、及MVD值與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系組別ABCDnLN-R（?）LN-R(?)LN-R(-+)LN-R(-+)MVD47.82MVD<47.82MVD47.82MVD<47.82淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(+)2718324(-)46113626     A組與D組比較，2=15.28 P<0.0001，其余組間比較差異均無顯著性 表4乳腺癌LN-R表達及MVD值與腫瘤3年復(fù)發(fā)的關(guān)系組別nLN-R（+）MVD復(fù)發(fā)組11957.52±9.066未復(fù)發(fā)組17646.35±8.671     2=4.0

16、92,P=0.0431；t=3.271,P=0.003 3討論基底膜的主要成分LN在促進腫瘤轉(zhuǎn)移的過程中與腫瘤細胞表面受體的作用密不可分。瘤細胞表面LN-R的多少直接影響LN促進腫瘤轉(zhuǎn)移能力的發(fā)揮。實驗表明1，人浸潤性乳腺癌細胞質(zhì)膜特異性結(jié)合LN的能力較正常或良性乳腺病變高50倍，而且其腫瘤細胞表面較低度惡性者有更多未結(jié)合的LN-R，這為惡性腫瘤粘著于基膜創(chuàng)造了條件。血管形成是腫瘤的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移過程的必要條件，在這一過程中，腫瘤與宿主血管的相互作用關(guān)系尤其是腫瘤細胞表面的具有高親和力的層粘連蛋白受體與其配體基底膜上的層粘連蛋白及血管內(nèi)皮細胞之間的關(guān)系尤為密切。層粘連蛋白在腫瘤的血管生成早期

17、起著關(guān)鍵性的作用，這與其形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)關(guān)系密切。作為一個成熟的血管，內(nèi)皮細胞與基底膜上的層粘連蛋白連接緊密2,3。動物實驗表明，移植瘤2天后可見基底膜層粘連蛋白和型膠原呈強陽性染色，同時內(nèi)皮細胞和周細胞增殖以及內(nèi)皮細胞從原發(fā)灶遷移4。一些體外實驗認為，層粘連蛋白A鏈上的SIKVAV肽段與內(nèi)皮細胞的關(guān)系密切。Grant等5建立了體內(nèi)模型系統(tǒng)，并認為層粘連蛋白上的SIKVAV肽段是具有新的血管生成活性的，并能促進腫瘤的血管化和腫瘤生長。本組實驗發(fā)現(xiàn)，LN-R的表達程度與腫瘤的血管密度之間存在明顯的正相關(guān)性，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移亦存在明顯相關(guān)性。依據(jù)這一實驗結(jié)果，我們認為在大多數(shù)非原位癌中，LN-R主要與血管周

18、圍的基底膜上的LN特異性的結(jié)合而發(fā)揮其促進血管內(nèi)皮細胞生長的作用。乳腺癌中LNA鏈上的SIKVAV肽段通過連接LN三條多肽鏈上的二硫鍵與其特異性受體結(jié)合，發(fā)揮其促進腫瘤新生血管形成和腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。而腫瘤的新生血管的形成又進一步促進了腫瘤的轉(zhuǎn)移。本組實驗結(jié)果還顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較，其MVD值有顯著的差異性。 Stitt等6通過鼠的動物模型觀察LN及LN-R與內(nèi)皮細胞的關(guān)系發(fā)現(xiàn)在實驗開始后的第17天血管開始新生，持續(xù)至21天后新生血管停止發(fā)育；而LN-R在實驗后的第12天開始出現(xiàn)至17天以后開始減少至21天完全消失。這一實驗結(jié)果表明，在早期階段LN及LN-R對血管形成至關(guān)重要，而

19、對于成熟的血管則作用甚微。從而不難看出，在惡性度較高的乳腺癌中LN-R對于腫瘤的血管形成以及促進腫瘤的轉(zhuǎn)移意義重大。而乳腺癌間質(zhì)微血管的形成又為其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提供了直接的通道。Angelo等7報道了在97例皮膚惡性黑色素瘤中微血管數(shù)和LN-R的表達情況，得出黑色素瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移與血管數(shù)量的增加和LN-R的表達有關(guān)。Giampietro等8報道了179例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌病人的預(yù)后與微血管數(shù)及LN-R之間的關(guān)系，指出微血管數(shù)和LN-R的表達程度均可作為判斷乳腺癌病人預(yù)后的獨立指標。本組73例乳腺癌標本相關(guān)指標的研究進一步支持了上述觀點。基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目（No 39870314）

20、作者簡介：寇伯君，33歲，女，碩士，講師。研究方向：腫瘤間質(zhì)病理寇伯君（白求恩醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理解剖教研室，長春130021）李玉林（白求恩醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理解剖教研室，長春130021）朱桂彬（白求恩醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理解剖教研室，長春130021）吳珊（白求恩醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理解剖教研室，長春130021）張麗紅（白求恩醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理解剖教研室，長春130021）參考文獻1，Liotta LA, Alan R. The role of extracellular matrix. Development, 1984；90:3573712，Kibbey MC, Yamam

21、ura K, Jun SH et al. Enhancement of tumor growth by basement membrane: modulation of growth and angiogenesis by laminin-derived synthetic peptides. Cancer Treat Res, 1994;71:2672753，Bonfil RD, Vinyals A, Bustuoabad OD et al. Stimulation of angiogenesis as an explanation of Matrigel-enhanced tumorigenicity. Int J Cancer, 1994;58(2):2332394，Paku S, Paweletz N. First steps of tumor-related angiogenesis. Lab Invest, 1991;65(3):3343465，Grant D