大腸癌組織微血管密度和血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的研究

1、    大腸癌組織微血管密度和血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的研究        【摘要】目的研究大腸癌組織的微血管密度(MVD)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)鏈酶親和素-生物素-酶復(fù)合物(SABC)法對36例手術(shù)切除的大腸癌標(biāo)本的癌灶中心、癌旁、切緣進(jìn)行血管標(biāo)記和染色。結(jié)果癌灶中心MVD計(jì)數(shù)、VEGF表達(dá)分別為97.20±16.80、2.60±0.70，極顯著高于癌旁組織74.60±13.60、1.35&#

2、177;0.95和切緣組織67.20±12.60、0.92±0.90(P0.01)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MVD計(jì)數(shù)、VEGF表達(dá)分別為96.60±17.90、2.40±0.72極顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組72.05±13.60、1.30±0.90(P0.01)。 結(jié)論大腸癌癌灶中心MVD、VEGF呈高表達(dá)，MVD、VEGF表達(dá)高低可能成為判斷大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的指標(biāo)?！娟P(guān)鍵詞】微血管密度；血管內(nèi)皮生長因子；大腸；癌 Study on the microvessel density and expression of vascular endo

3、thelial growth factor in human colerectal cancerGAO Peng*, WU Aiguo, WANG Yu, et al.*Department of General Surgery, No. 177th Hospital of PLA, Guangzhou 510317, China【Abstract】 Objective To study the relationship between microvessel density (MVD) and expression of vascular endothelial growth factor

4、(VEGF) in colorectal cancer tissues and lymphatic node metastasis. Methods Using immunohistochemistry SABC method the vessels at the cancer center, proximal cancer lateral and proximal incisal margin in 36 samples cut from the patients with colorectal cancer were marked and stained. Results The MVD

5、count and VEGF expression at the cancer center 97.20±16.80, 2.60±0.70 were significantly higher than at proximal cancer lateral 74.60±13.60, 1.35±0.95 and proximal incisal margin in 67.20±12.60, 0.92±0.90 (P0.01), and in lymphatic metastatic group 96.60±17.90, 2.40

6、±0.72 were obviously higher than in non-lymphatic metastatic group 72.05±13.60, 1.30±0.90 (P0.01). Conclusions The MVD and VEGF expression were higher at the center of colorectal cancer. MVD and VEGF might be used to evaluate lymphatic metastasis and prognosis of colorectal cancer.【Ke

7、y words】 Microvessel density; Vascular endothelial growth factor; Intestine, large; Carcinoma     為了探討微血管密度(MVD)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，我們對36例大腸癌癌灶中心粘膜、近端癌旁粘膜、近端切緣粘膜的MVD和VEGF的表達(dá)進(jìn)行研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。 材料和方法1.材料：1998年8月1999年5月未經(jīng)抗腫瘤治療的手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷證實(shí)大腸癌標(biāo)本36例，其中男26例，女10例；年齡2674歲，平均年齡52.5歲

8、。Dukes分期：A期7例、B期12例、C期13例、D期4例。36例中，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者19例。2.方法：(1)標(biāo)本的收集和處理：術(shù)中分別取癌灶中心、近端癌旁和近端切緣粘膜0.5cm×0.5cm，標(biāo)本均經(jīng)福馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4m厚連續(xù)切片。(2)試劑：鼠抗人因子、鏈酶親和素-生物素-酶復(fù)合物(SABC)試劑盒、VEGF免疫組織化學(xué)試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司。采用新一代SABC法，選用即用型試劑。陽性對照：為已知的大腸癌陽性切片，陰性對照用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗。(3)步驟：用防脫片劑多聚賴氨酸涂載玻片60烤箱3h，石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，

9、體積分?jǐn)?shù)為3%H2O2滅活內(nèi)源性酶10min，微波修復(fù)抗原后，依次滴加抗原修復(fù)液室溫10min，滴加正常山羊血清封閉液室溫20min，滴加適當(dāng)?shù)囊豢?小鼠IgG)2min，滴加生物素化山羊抗小鼠IgG 20min，滴加SABC 20min，上述步驟均以0.01mol/L PBS振洗3次，2min/次，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水、透明、封片。3.MVD和VEGF表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)：MVD按照Weidner等1的評判標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算腫瘤內(nèi)著色的毛細(xì)血管和微小血管，凡呈現(xiàn)棕色單個內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞群者均作為1個血管計(jì)數(shù)，但肌層較厚及管腔面積大于8個紅細(xì)胞直徑的血管不計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)方法為，每張染

10、色切片選擇3個血管最多的癌間質(zhì)區(qū)，在200倍視野下進(jìn)行血管計(jì)數(shù)，每例標(biāo)本分別計(jì)數(shù)5個視野，取其平均值。VEGF以腫瘤細(xì)胞及其附近的血管內(nèi)皮細(xì)胞漿出現(xiàn)黃色的為陽性表達(dá)，按其染色強(qiáng)度進(jìn)行記分。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(<"30701 (84 字節(jié))" src="/med/cano/201003/20100322173109313" 11 15>±s)表示。應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。結(jié)果1.3種不同部位粘膜MVD和VEGF表達(dá)：見表1。表1大腸癌標(biāo)本不同部位的MVD和VEGF表達(dá)(<"30701 (

11、84 字節(jié))" src="/med/cano/201003/20100322173109313" 11 15>±s)部位例數(shù)MVD計(jì)數(shù)VEGF表達(dá)強(qiáng)度癌灶中心3697.20±16.80*2.60±0.70近端癌旁3674.60±13.60#1.35±0.95近端切緣3667.20±12.600.92±0.90     注：癌灶中心與近端癌旁、近端切緣計(jì)數(shù)比較，*P0.01；近端癌旁與近端切緣計(jì)數(shù)比較，#P0.01；癌灶中心與近端癌旁、近端切緣表達(dá)比較

12、，P0.01；近端癌旁與近端切緣表達(dá)比較，P0.01 2.Dukes分期的MVD和VEGF表達(dá)：A、B、C、D期MVD和VEGF分別為73.70±12.60、76.60±15.10、90.50±18.80、92.50±16.70和1.26±0.86、1.40±0.84、2.48±0.76、2.36±0.60。各組兩兩比較差異均無顯著性(P0.05)。3.MVD和VEGF表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、非轉(zhuǎn)移組MVD計(jì)數(shù)和VEGF表達(dá)強(qiáng)度分別為 96.60±17.90 、72.05±13.6

13、0 和2.40±0.72、1.30±0.90。兩組比較差異均有極顯著性(P0.01)。討論近年來，有關(guān)腫瘤組織內(nèi)微血管數(shù)量與腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系研究表明，微血管與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移、生存期等關(guān)系密切。腫瘤血管是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)，它不僅向腫瘤提供充足的營養(yǎng)，同時還不斷向宿主輸注腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤的惡性生長和轉(zhuǎn)移，影響患者的預(yù)后2。我們采用Weidner等1的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行血管計(jì)數(shù)，結(jié)果表明大腸癌癌灶中心的MVD極顯著高于近端癌旁、近端切緣(P0.01)。自大腸癌組織-近端癌旁粘膜-近端切緣粘膜，MVD計(jì)數(shù)存在梯度減少改變。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，轉(zhuǎn)移組的MVD極顯著高于

14、非轉(zhuǎn)移組，雖然MVD和VEGF表達(dá)與Dukes分期差異無顯著性，但C、D期兩者表達(dá)仍呈增高趨勢，提示MVD表達(dá)增高與癌細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)。VEGF是一種糖蛋白二聚體，其相對分子質(zhì)量為(3.44.5)×104。它能夠增加血管通透性，導(dǎo)致血漿蛋白、纖維蛋白質(zhì)及液體經(jīng)血管外滲，引起細(xì)胞外基質(zhì)改變。同時能促進(jìn)血管和新基質(zhì)形成，從而為腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)2。有作者報(bào)道，結(jié)腸癌伴肝轉(zhuǎn)移的VEGF蛋白表達(dá)比不轉(zhuǎn)移的要高3。本組中結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移VEGF表達(dá)極顯著高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P0.01)，提示VEGF有可能成為判斷腫瘤惡性程度、預(yù)后及預(yù)測轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。作者單位：高鵬(510317廣州，解放軍第177醫(yī)院普外科)吳愛國(第一軍醫(yī)大學(xué)附屬珠江醫(yī)院普外科)王宇(第一軍醫(yī)大學(xué)附屬珠江醫(yī)院普外科)楊繼震(第一軍醫(yī)大學(xué)附屬珠江醫(yī)院普外科)參考文獻(xiàn)1，Weidner N, Semple JP, Welch WR, et al. Tumor angiogenesis and meiastasis correlation in invasive breast carcinoma. N Engl J I Med, 1991,324:1-325.2，武利存，朱芳.微血管密度對乳腺癌預(yù)后的意義