幾種花生根瘤菌菌劑保藏效果的比較

1、幾種花生根瘤菌菌劑保藏效果的比較王寶林,詹火元,陶佳喜,鄭永良(黃岡師范學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院,湖北黃岡438000摘要將土壤與農(nóng)家有機(jī)肥按64比例混合成肥土,肥土與草木灰按一定比例混合成不同的吸附劑,加入菌液后即成為不同菌劑。將菌劑密封隔絕空氣,室溫條件下保藏,定時(shí)測(cè)定其菌量。保藏150d時(shí),測(cè)得肥土1號(hào)、肥土2號(hào)、肥土3號(hào)、液體、草木灰5種菌劑的菌量依次為9.1億、7.5億、3.3億、1.1億和0.3億/g;菌體存活率依次為85%、69.4%、30.3%、10.2%和2.8%。為比較與研究的方便,引入了存活率和存活率曲線的概念,并對(duì)吸附劑的功能和質(zhì)量要求問題進(jìn)行了討論。關(guān)鍵詞花生根瘤菌;菌

2、劑保藏;存活率曲線中圖分類號(hào)Q93-336文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào)0517-6611(200619-4985-021材料與方法1.1 材料花生根瘤菌(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)提供;草木灰(無雜質(zhì),過80目篩;土壤(菜園土,曬干,去雜質(zhì),打碎,過80目篩;農(nóng)家有機(jī)肥料(完全腐熟,含土量低,過80目篩;肥土(過篩土壤與過篩有機(jī)肥按64比例混合而成1。1.2 方法1.2.1 菌種的制備。制備YM A培養(yǎng)基,接種7號(hào)花生根瘤菌;制備黃豆餅浸出液培養(yǎng)基,接種8號(hào)花生根瘤菌。菌種28振蕩培養(yǎng)84h。經(jīng)顯微直接計(jì)數(shù)法測(cè)定7號(hào)菌菌液的菌量為10.8億/m l,8號(hào)菌菌液的菌量為32.2億/m l。1.2.2 吸附材料的p

3、H值調(diào)節(jié)和持水量測(cè)定。用4%H C l調(diào)節(jié)草木灰的pH值至6.87.0,肥土不進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)。經(jīng)測(cè)定,肥土的持水量為0.5m l/g,草木灰的持水量為2.2m l/g。1.2.3 吸附材料的裝瓶與滅菌。準(zhǔn)備潔凈干燥的200m l三角瓶25個(gè),分成5組,每組5個(gè)。按表1第1欄內(nèi)容貼上標(biāo)簽。按表1第2、3欄內(nèi)容裝入吸附材料2。裝好后加棉塞,包扎好,160170干熱滅菌2h。表15種菌劑各瓶中內(nèi)容物的名稱、數(shù)量及計(jì)算所得菌量菌劑名稱肥土數(shù)量g草本灰數(shù)量g7號(hào)菌液數(shù)量m l8號(hào)菌液數(shù)量m l菌液總量m l總重量g計(jì)算所得菌量億/g肥土1號(hào)10000505015010.7肥土2號(hào)681721.843.2

4、6515010.8肥土3號(hào)42.528.542.536.57915010.9液體00150015015010.8草木灰050752510015010.8注:肥土1號(hào)指肥土草木灰=10,肥土2號(hào)指肥土草木灰=82,肥土3號(hào)指肥土草木灰=64。1.2.4 添加菌液,密封,保藏。添加菌液在超凈工作臺(tái)上按表1第4、第5欄要求進(jìn)行。加菌液后,用寬膠帶嚴(yán)密封口,確保隔絕空氣,黑暗處室溫下保藏5個(gè)月2。1.2.5 菌量的測(cè)定方法。零時(shí)的菌量以計(jì)算所得菌量為準(zhǔn)(表1。零時(shí)以后菌量每30d測(cè)定1次,采用平板菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。2結(jié)果與分析2.1 菌量、測(cè)定結(jié)果和存活率如前述,零時(shí)的菌量以計(jì)算所得菌量為準(zhǔn),因?yàn)樗c實(shí)

5、測(cè)結(jié)果差別不大,且不影響對(duì)保藏效果的評(píng)價(jià)。每次測(cè)定所得菌量除以零時(shí)菌量即得出相對(duì)應(yīng)時(shí)間菌體的存活率3。5種菌劑各次的測(cè)定結(jié)果及計(jì)算后得出的相對(duì)應(yīng)存活率見表2。表2花生根瘤菌5種菌劑在不同保藏期的菌量及相對(duì)應(yīng)的存活率測(cè)定日期保藏天數(shù)d肥土1號(hào)菌量億/g存活率%肥土2號(hào)菌量億/g存活率%肥土3號(hào)菌量億/g存活率%液體菌量億/g存活率%草木灰菌量億/g存活率%2004-11-20010.7100.010.8100.010.9100.010.8100.010.8100.0 2004-12-203019.6183.214.9138.012.4113.89.386.57.771.2 2005-01-196

6、018.8175.714.0129.912.0110.08.578.3 6.257.4 2005-02-189016.9157.112.6116.811.0100.17.469.0 4.339.8 2005-03-2012013.9130.210.698.17.770.6 3.734.4 1.817.0 2005-04-191509.185.07.569.4 3.330.3 1.110.20.3 2.82.2存活率曲線以時(shí)間(保藏天數(shù)為橫坐標(biāo),以存活率(0200%為縱坐標(biāo)繪制而成的曲線,稱為存活率曲線。存活率曲線是一種不規(guī)則的曲線,由于保藏期的前、后兩段氣溫稍高,存活率變化較大,中間一段時(shí)間氣

7、溫較低,存活率變基金項(xiàng)目湖北省教育廳重點(diǎn)研究項(xiàng)目(2003A002。作者簡介王寶林(1944-,男,河南許昌人,副教授,從事微生物教學(xué)與研究工作。收稿日期2006-06-19化幅度較小,故存活率曲線一般略呈不規(guī)則的“S”型。通過存活率曲線可清晰直觀地對(duì)多種菌劑的保藏效果進(jìn)行對(duì)比和評(píng)價(jià),也便于對(duì)同一菌劑不同時(shí)間段的保藏效果進(jìn)行研究。5種菌劑的存活率曲線見圖1。2.3 保藏效果的比較與判定由表2和存活率曲線可知:肥土1號(hào)的保藏效果最好,保藏150d的菌量和存活率分別是9.1億/g和85%,與宋玉清報(bào)道的草炭制劑的保藏效果安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),J ou rn a l o f A n h u i A g r

8、i.S c i.2006,34(19:4985-4986責(zé)任編輯孫紅忠責(zé)任校對(duì)孫紅忠相似4,可進(jìn)行5個(gè)月以上的保藏5。肥土2號(hào)和肥土3號(hào)的保藏效果排在第2、第3位,保藏150d 的菌量依次是7.5億、3.3億/g ,存活率依次是69.4%和30.3%,可進(jìn)行45個(gè)月的保藏。液體菌劑的保藏效果位居第4,保藏90d 的菌量為7.4億/m l ,存活率為69%,與周平貞報(bào)道的存活率70%80%的結(jié)果接近;保藏150d 的存活率為10.2%,與宋玉清等報(bào)道的144d 存活率38%41.4%的結(jié)果相差較遠(yuǎn)4。液體菌劑適于3個(gè)月以內(nèi)的保藏。草木灰菌劑的保藏效果最差 ,沒有實(shí)用價(jià)值。圖1 5種菌劑的存活率曲

9、線3 討論花生根瘤菌的推廣應(yīng)用有2項(xiàng)技術(shù)難題:一是工業(yè)化生產(chǎn)的問題,二是提高質(zhì)量、降低價(jià)格的問題6。吸附劑是固體菌劑的生產(chǎn)原料,它的質(zhì)量和價(jià)格影響產(chǎn)品的質(zhì)量和價(jià)格。應(yīng)加強(qiáng)吸附劑的功能、質(zhì)量要求諸方面的研究工作。筆者認(rèn)為,吸附劑有3個(gè)方面的功能:一是載體功能;二是營養(yǎng)功能,向菌體提供水分和其他營養(yǎng)物質(zhì),使菌體得以適度增殖或維持低水平代謝而不招致死亡;三是對(duì)保藏環(huán)境中的pH 值、滲透壓、溫度變化等起緩沖作用,吸收有害的代謝產(chǎn)物,穩(wěn)定菌體的生存環(huán)境。陳華葵指出:“吸附劑的要求是通氣良好,持水量高”,“在以泥炭作吸附劑時(shí),盡可能采用有機(jī)質(zhì)含量在30%以上的高品位中性泥炭”7。據(jù)此,可對(duì)吸附劑指出4項(xiàng)初步的要求:一是通氣良好,二是持水量高,三是有機(jī)質(zhì)含量在30%以上,四是酸堿度中性。有必要進(jìn)行吸附劑主要化學(xué)成分、主要物理性狀與產(chǎn)品質(zhì)量、保藏效果之間相關(guān)性的研究,對(duì)吸附劑提出更具體全面的質(zhì)量要求。參考文獻(xiàn)1姚瑞林,李健寶.花生根瘤的應(yīng)用技術(shù)及其肥效(二J.花生科技,1989(2:17.2周平貞,胡濟(jì)生.我國花生根瘤技術(shù)應(yīng)用與研究進(jìn)展J.土壤學(xué)報(bào),1990,27(4:25-29.3宋玉清,馬麟祥,江木蘭.花生根瘤菌劑及其接種效應(yīng)J .遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué),1993(2:52.4宋玉清.花生根瘤菌劑的貯存試