高效液相色譜法測(cè)定牛黃清火丸中黃芩苷的含量

1、高效液相色譜法測(cè)定牛黃清火丸中黃芩苷的含量 【摘要】 目的：建立牛黃清火丸的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱：Thermo ODS-2HYPERSIL C18（4.6mm250mm，5m），流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸溶液（45：55，V/V），流速：1.0mlmin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：312nm，柱溫：30。結(jié)果：黃芩苷在0.010.06mgml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r =0.9996）；平均加樣回收率為99.06%， RSD=0.8%（n=9）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可適用于牛黃清火丸的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法 牛黃清火丸 黃芩苷 含量測(cè)定 Deter

2、mination of Baicalin in Niuhuangqinghuo pills by HPL 【Abstract objective】To set up a method for quality control of Niuhuangqinghuowans. METHOD HPLC method was developed to quantitative determination. COLUMN C18-Thermo ODS-2HYPERSIN(4.6mm250mm,5m).The mobilic phase was methanol-0.4%phosphoric acid so

3、lution (45:55V/V).The column temperature was 30,the wavelength for detection was 312nm,flow rate was 1.0mlmin-1. RESULTS The Baicalin average of recovery rate was 99.06%, and RSD was 0.8%(n=9). CONCLUSION The method is simple, accurate and suitable for its assaying. 【Key words】HPLC；Niuhuangqinghuo p

4、ills；Baicalin；determination 牛黃清火丸為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第七冊(cè)（中藥成方制劑）收載的品種，由黃芩、桔梗、牛黃、山藥、丁香等9味中藥組成，具有清熱、散風(fēng)、解毒之功效。臨床用于肝胃肺蘊(yùn)熱引起的頭暈?zāi)垦?，口鼻生瘡，風(fēng)火牙痛，咽喉腫痛，痄腮紅腫，耳鳴腫痛1，療效良好。處方中黃芩為君藥，黃芩苷為其主要有效成分，原標(biāo)準(zhǔn)中只有顯微鑒別和薄層色譜。為了更好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測(cè)定牛黃清火丸中黃芩苷的含量，以期為該制劑的質(zhì)量提供快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)告如下。 1 儀器與試藥 LC2010A 高效液相色譜儀，CLASSVP 色譜工作站；黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：11

5、0715-200212），由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用；牛黃清火丸為市售樣品（哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠，規(guī)格3g/丸，批號(hào)：0604158，0604272，0605126）。甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Thermo ODS-2HYPERSIN C18 (4.6mm250mm，5m)；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸溶液（45：55，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：312nm；流速：1.0mlmin-1；柱溫：30。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)應(yīng)不低于5000。 2.2 溶液制備 2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓

6、干燥12小時(shí)以上的黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成0.1mgml-1的對(duì)照品貯備液；再精密量取對(duì)照品貯備液適量，加甲醇制成30gml-1的對(duì)照品溶液，即得。 2.2.2 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的牛黃清火丸，剪碎，混勻，取約1g，精密稱定，加70%乙醇30ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液置50ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，用0.45m微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液2。 2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取除黃芩以外的處方中其余藥材的十分之一量，按法制成大蜜丸，

7、再按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。 2.3 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見(jiàn)，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間（黃芩苷11.850min）的色譜峰，陰性試驗(yàn)無(wú)干擾，證明本法可行。 2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取黃芩苷對(duì)照品貯備液（濃度：0.1mgml-1）各適量，分別置于10ml量瓶中，加甲醇定容，配成濃度分別為0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mgml-1的溶液6份，搖勻，用0.45m微孔濾膜過(guò)濾。精密吸取續(xù)濾液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積。以峰面

8、積（A）為縱坐標(biāo)，其濃度（C）為橫坐標(biāo)，得黃芩苷的回歸方程為：A=28905511.43C4455.07，r =0.9996（n=6）。結(jié)果表明，黃芩苷在0.010.06 mgml-1范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系。 2.5 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液（0.03 mgml-1）10l，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，求得黃芩苷溶液峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.8%，表明精密度較好。取同一對(duì)照品溶液，在0、4、8、12、24h分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明黃芩苷對(duì)照品溶液的峰面積在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.7%（n=5）。 2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品（批號(hào)0604158），共

9、5份，分別按“2.2.2供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，求得黃芩苷含量的RSD為0.9%（n=5），表明重復(fù)性良好。 2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)0604158，黃芩苷含量9.03mgg-1，平均丸重2.901g丸-1）適量，共9份，分別精密加入低、中、高3種不同濃度的黃芩苷對(duì)照品適量，照 “2.2.2供試品溶液的制備”方法操作，得回收率試驗(yàn)溶液，依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。 2.8 樣品含量測(cè)定 分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定三批樣品中黃芩苷峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算其含量（n=5），結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)三批樣品所測(cè)結(jié)果，暫定每丸牛黃清火丸的黃芩苷含量質(zhì)控定量限為25mg。表1 黃芩苷加樣回收率試驗(yàn) 3 討論 3.1 通過(guò)對(duì)3批樣品中黃芩苷的測(cè)定，結(jié)果表明最高含量為27.10mg丸-1，最低為26.09mg丸-1 ，綜合考慮確定限量每丸