高效液相色譜法測定補腎益腦膠囊中補骨脂素和異補骨脂素含量

1、    高效液相色譜法測定補腎益腦膠囊中補骨脂素和異補骨脂素含量        摘要目的:用高效液相色譜法測定補腎益腦膠囊中補骨脂素和異補骨脂素含量，以控制該制劑的質量。方法:用十八烷基鍵合硅膠柱分離補骨脂素和異補骨脂素，以甲醇-水(4555)為流動相，檢測波長245 nm。結果:補骨脂素和異補骨脂素峰與其它組分峰的分離度為1.2，理論塔板數以補骨脂素和異補骨脂素峰計算均為4700；線性范圍：補骨脂素0.0220.176 g，異補骨脂素0.02040.163 g。補骨脂素平均

2、回收率101.0%，RSD=2.44%(n=6)，異補骨脂素平均回收率101.4%，RSD=2.73%(n=6)。結論:本法簡便、快速，適用于該產品質量分析檢驗。關鍵詞補腎益腦膠囊，補骨脂素，異補骨脂素，高效液相色譜法Determination of psoralen and isopsoralen angelicin in Bushen Yinao capsules by HPLCWang Yonglin,Wang Peimin,Sun Ting,et al (Department of Pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang 550004)ABST

3、RACTOBJECTIVE:To control the quality of Bushen Yinao capsules,the contents of psoralen and isopsoralen angelicin in the capsules were determined by HPLC.METHODS:Psoralen and isopsoralen angelicin were separated on spherisorb C18 column and detected at 245 nm，using methanol-water(4555) as mobile phas

4、e.RESULTS:The resolution between psoralen and isopsoralen angelicin was 1.2. The number of theoretical plates calculaled for psoralen and isopsoralen angelicin peak was 4700.The standard curves for psoralen and isopsoralen angelicin were linear in the range of 0.022 00.716 g and 0.020 40.163 g. The

5、average recoveries of psoralen and isopsoralen angelicin were 101.0%(RSD=2.44%) and 101.4%(RSD=2.73%).CONCLUSIONS:The method is simple and fast,and can be used for quality analysis of Bushen yinao capsules.KEY WORDSBushen Yinao capsules,psoralen,isopsoralen angelicin,HPLC補腎益腦膠囊劑系根據中國藥典1995年版一部收載的補腎益

6、腦片研制而成。由鹿茸、紅參、茯苓、山藥、熟地黃、當歸、川芎、補骨脂、牛膝、枸杞子、玄參、麥冬、五味子、酸棗仁、遠志、朱砂十六味中藥組成，具有補腎益氣，養(yǎng)血生精的功效。本方藥味組成較復雜，為控制產品質量，保證臨床療效，在原片劑質量標準基礎上，采用高效液相色譜法對制劑中補骨脂素(psoralen)和異補骨脂素(isopsoralen angelicin)的含量測定方法進行了研究，并對測定的方法學進行了考察。實驗結果表明，該法操作簡便、快速、重現(xiàn)性好，可用于補腎益腦膠囊的質量控制。1儀器與試藥島津LC-6A高效液相色譜儀，LC-6A高壓泵，SPD-6AV紫外檢測器，C-R3A色譜數據處理機；甲醇為優(yōu)

7、級純；正丁醇、氯仿、正己烷等均為分析純；補骨脂素和異補骨脂素對照品均為中國藥品生物制品檢定所提供；補腎益腦膠囊由貴陽醫(yī)學院藥學系提供。2色譜條件色譜柱：SUPELCOSILTM LC-18(5 m,25cm×4.6 i.d.mm);流動相：甲醇-水(4555)，流速1 ml.min-1；溫度：40，檢測波長：245 nm1。3方法與結果3.1樣品溶液的制備3.1.1供試品溶液的制備取本品20粒的內容物，混勻，取約0.2 g，精密稱定，置25 ml容量瓶。精密加入甲醇5 ml，密塞，稱量，超聲處理90 min，放冷。稱定重量，用甲醇補重，搖勻。取上清液用0.45 m濾膜過濾，濾液作為供

8、試品溶液。同法制備不含補骨脂素和異補骨脂素的陰性樣品溶液。3.1.2標準溶液的配制精密稱取補骨脂素和異補骨脂素對照品適量，加甲醇制成含補骨脂素0.110 mg.ml-1和異補骨脂素0.102 mg.ml-1的混合液。精密吸取該溶液5 ml于50 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成含補骨脂素11.0 g.ml-1和異補骨脂素10.2 g.ml-1的溶液，搖勻，作為對照品溶液。3.2系統(tǒng)適用性試驗分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各5 l，注入色譜儀，記錄色譜，見1。從中可見，陰性樣品譜在補骨脂素和異補骨脂素峰位置處無假陽性峰，即本試液條件下補骨脂素和異補骨脂素與其他組分分離完全，補骨

9、脂素和異補骨脂素分離度為1.2。理論塔板數以補骨脂素和異補骨脂素峰計算，均為4700。1補骨脂素和異補骨脂素HPLC色譜A. 對照品 B. 供試品 C. 陰性樣品a. 補骨脂素 b. 異補骨脂素3.3線性關系考察精密吸取補骨脂素和異補骨脂素對照品溶液2，4，6，8，10，12，14，16 l進樣(n=3)，記錄色譜，以峰面積A（V.S）對質量C(g)進行線性回歸。回歸方程為：補骨脂素：C(g)=5.077×10-7A+2.121×10-4，r=0.999 9；異補骨脂素：C(g)=5.137×10-7A-1.382×10-3，r=0.999 8。擬合成過

10、原點的直線方程為：補骨脂素：C(g)=5.086×10-7A；異補骨脂素：C(g)=5.076×10-7A。將一供試品溶液進樣分析所得峰面積分別代入兩方程計算，結果相對偏差分別為0.08%和0.52%，故采用外標一點法計算含量。線性范圍：補骨脂素0.022 00.176 g，異補骨脂素0.020 40.163 g。3.4精密度試驗取一供試品按質量標準草案制備供試液，重復進樣5次，記錄色譜，計算結果，補骨脂素和異補骨脂素的RSD分別為1.06%和1.65%。3.5重現(xiàn)性試驗取一供試品按質量標準草案制備5份供試液， 分別進樣，記錄色譜，計算結果，補骨脂素和異補骨脂素的RSD分別

11、為1.51%和1.98%。3.6回收率試驗采用加樣回收，精密稱取補骨脂陰性樣品6份，分別加入對照品適量，混勻，按樣品制備方法制備供試液，分別進樣，記錄色譜，計算結果，見表1。3.7樣品測定精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 l，注入液相色譜儀，記錄色譜，計算即得。用本法測定了5個批號樣品的補骨脂素和異補骨脂素含量，結果見表2。4討論4.1提取條件的選擇試驗中曾采用苯、氯仿、甲醇等有機溶劑提取制劑中補骨脂素和異補骨脂素。苯和氯仿提取后，脂溶性雜質多，譜需40 min后基線才能回落，分析時間過長。而甲醇提取液出峰時間短，故選擇甲醇為提取溶劑。同時，用超聲波處理和加熱回流提取考察了補骨脂素和異補骨脂

12、素的提取效率。試驗結果表明，超聲波提取90 min與加熱回流提取4 h的結果基本一致。加熱回流提取時取樣量大(約2 g)，回流過程中易爆沸，而超聲提取具有操作簡便、時間短、供試品溶液雜質峰少等優(yōu)點，并可避免由于回流提取過程中爆沸所產生的分析誤差。故選擇超聲方法處理樣品。表 1回收率試液結果實驗次數加入量/g測得量/g回收率/%/%RSD/%BYBYBYBYBY1262226.321.1101.295.92262225.722.898.8103.63524455.044.2105.8100.5101.0101.42.42.74524451.045.298.1102.7510488105.191.

13、8101.1104.3610488105.289.4101.2101.6注：B代表補骨脂素，Y代表異補骨脂素。 表 2樣品中補骨脂素和異補骨脂素含量(n=3)批號x/%RSD/%BYBY9712160.0540.0491.071.339712180.0530.0470.851.479803180.0350.0281.370.949803230.0330.0291.621.599804060.0280.0241.131.47注：B代表補骨脂素，Y代表異補骨脂素。 4.2補骨脂藥材的含量限度補骨脂主要含補骨脂素和異補骨脂素2。試驗中我們對6批不同產地的藥材含量進行了測定，補骨脂素和異補骨脂素含量分別在(0.20.7)%和(0.20.6)%之間。鑒于大生產中的原料受產