實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法

1、實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法1、1M Tris-HCl組份濃度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）配制量 1L配置方法 1. 稱量121.1gTris置于1L燒杯中。2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值 濃HCl7.4 約70mL7.6 約60mL8.0 約42mL4. 將溶解定容至1L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。2、1.5 M Tris-HCl組份濃度 1.5 M Tr

2、is-HCl （pH8.8）配制量 1L配置方法 1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。4. 將溶液定容至1L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。3、10×TE Buffer組份濃度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）配制量 1L配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。1 M Tris-HCl Buffer（p

3、H7.4，7.6，8.0） 100mL500 mM EDTA（pH8.0） 20mL2. 向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。3. 將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。4. 室溫保存。4、3 M 醋酸鈉組份濃度 3 M 醋酸鈉（pH5.2）配制量 100mL配置方法 1. 稱取40.8gNaOAc3H2O置于100200mL燒杯中，加入約40mL 的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?. 加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。3. 加入去離子水將溶液定容至100mL。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBS Buffer組份濃度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM

4、 KH2PO4 配制量 1L配置方法 1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中。NaCl 8 gKCl 0.2gNa2HPO4 1.42 gKH2PO4 0.27g2. 向燒杯中加入約800 mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6、10 M醋酸銨組份濃度 10 M醋酸銨配制量 100mL配置方法 1. 稱量77.1g醋酸銨置于100200 mL燒杯中，加入約30 mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.

5、加去離子水將溶液定容至100mL。3.使用0.22m濾膜過(guò)濾除菌。4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、Tris- HCl平衡苯酚 配置方法1. 使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無(wú)色的，無(wú)需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手

6、套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過(guò)的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚應(yīng)貯存于-20，此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68水浴中使苯酚充分溶解。 加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。 加入等體積的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌

7、器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟。 加入等體積的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘， 2靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟，稍微殘留部分上層水相。 使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。8、苯酚/氯仿/異戊醇 配置方法1. 說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配置方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（

8、24：1）均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中4保存。9、10（W/V）SDS組份濃度 10（W/V）SDS配制量 100mL配置方法 1.稱量10g高純度的SDS置于100200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水，68加熱溶解。2. 滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。3. 將溶液定容至100mL后，室溫保存。10、2 N NaOH組份濃度 2N NaOH配制量 100mL配置方法1.量取80mL去離子水置于100200mL塑料燒杯中（NaOH溶解過(guò)程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂）。2. 稱取8g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至

9、100mL。4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。11、2.5 N HCl組份濃度 2.5 N HCl配制量 100mL配置方法 1. 在78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸（11.6N），均勻混合。2. 室溫保存。12、5 M NaCl組份濃度 5 M NaCl配制量 1L配置方法 1. 稱取292.2g NaCl置于1L燒杯中，加入約800mL的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成小份。3. 高溫高壓滅菌后，4保存。13、20（W/V）Glucose組份濃度 20（W/V）Glucose配制量 100mL配置方法 1. 稱取20g Glucose

10、置于100200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水后，攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100mL。3. 高溫高壓滅菌后，4保存。14、Solution I組份濃度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose（質(zhì)粒提取用）配制量 1L配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL20Glucose（1.11M） 45mLdH2O 910mL2. 高溫高壓滅菌后，4保存。3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg

11、/mL）。15、Solution II組份濃度 250mM NaOH，1（W/V）SDS （質(zhì)粒提取用）配制量 500mL配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。10SDS 50mL2N NaOH 50mL2. 加滅菌水定容至500mL，充分混勻。3. 室溫保存。此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月。注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢琛?6、Solution III組份濃度 3M KOAc，5M CH3COOH （質(zhì)粒提取用）配制量 500mL配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。KOAc 147gCH3COOH 57.5mL2. 加入300mL去離子水后攪拌溶解。3. 加去離子水將溶液定容至500mL。4. 高溫高壓滅菌后，4保存。17、0.5M EDTA組份濃度 0.5 M EDTA (pH8.0)配制量 1L配置方法 1. 稱取186.1g Na2EDTA2H2O，置于1L燒杯中。2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值值8.0（約20g NaOH）。注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1L。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。18、1 M DTT組份濃度 1 M DTT配制量 20mL配置方法 1. 稱取3.09g DTT，加入到50mL塑料離心管內(nèi)。