藍玉簪顆粒治療小鼠慢性支氣管炎作用機理的研究

1、藍玉簪顆粒治療小鼠慢性支氣管炎作用機理的研究    【摘要】  目的： 觀察藍玉簪顆粒治療實驗性小鼠慢性支氣管炎的作用. 方法: 60只雌性昆明種小鼠隨機分為對照組、慢性支氣管肺炎氨水（NH3）模型組、藍玉簪顆粒高、中、低劑量治療組、復(fù)方氣管炎片治療組. 除正常對照組外，各組昆明種小鼠在YLS?8A多功能誘咳引喘儀中定時給予氨水霧化吸入，共30 d，誘導(dǎo)慢性支氣管炎模型. 第31日起，對照組小鼠及NH3模型組動物給予生理鹽水灌胃，其余各組給予相應(yīng)的藥物進行治療，1次/d，共15 d. 治療結(jié)束后，檢測各組小鼠肺組織超氧化物歧化酶（SOD）和丙二

2、醛(MDA)水平，應(yīng)用HE染色觀察各組小鼠肺組織病理學(xué)改變. 結(jié)果: 藍玉簪顆粒組與慢性支氣管肺炎NH3模型組相比，肺勻漿中MDA含量下降，肺勻漿SOD的含量上升，變化程度與用藥量呈量效關(guān)系；HE染色觀察到藍玉簪顆粒治療后慢性支氣管炎損傷程度改善. 結(jié)論： 藍玉簪顆粒具有治療NH3誘導(dǎo)慢性支氣管炎的治療作用，其機理是藍玉簪顆?？蓪寡趸瘬p傷，增強機體抗氧化酶的活力，調(diào)節(jié)氧化?部寡躉?平衡，從而治療慢性支氣管炎. 【關(guān)鍵詞】  藍玉簪龍膽 支氣管炎 慢性 小鼠 慢性超氧化物歧化酶 丙二醛0引言  藍玉簪龍膽是龍膽科龍膽屬植物藍玉簪龍膽(Gentiana Veitchiorum

3、 Hemsl)的干燥地上部分,晶珠本草記載龍膽花解毒治各種毒癥，性味苦、寒無毒,主治咳嗽、氣管炎、咽喉腫疼等，屬藏藥榜間類1. 榜間類均屬高山型植物，用法獨特，療效確實，有文獻報導(dǎo)藏成藥十味龍膽花顆粒在臨床應(yīng)用中對慢性支氣管炎、兒童肺部感染有良好的療效2-3. 我們早期的研究顯示，藍玉簪龍膽花水煎液可以提高鼠肺組織中的SOD活性，改善氧化/抗氧化平衡，抑制膠原沉積，保護肺組織免受損傷. 體內(nèi)氧化?部寡躉?平衡失調(diào)對慢性支氣管炎的形成和發(fā)展具有重要的作用4，是慢性支氣管炎的重要致病機理之一，抗氧化治療對于減輕肺部的慢性損傷，阻止肺功能的下降和延緩病情的發(fā)展具有重要的意義5. 本實驗采用藏藥藍玉簪

4、龍膽顆粒對慢性支氣管炎的治療作用進行研究，初步討論其可能的作用機理.1材料和方法1.1材料二級雌性昆明種小鼠60只，體質(zhì)量（20±2）g，由本校動物中心提供. YIS?8A多功能誘咳引喘儀購自山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站；氨水（NH3）購自西安三浦精細化工廠，（批號070622）；復(fù)方氣管炎片由陜西香菊制藥股份有限公司生產(chǎn)（批號：Z20026876）；藍玉簪顆粒由第四軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥劑科研制（批號2005005）；超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）試劑盒均購自南京建成生物工程研究所（批號分別20071220，20071101）.1.2方法1.2.1分組與建立動物模型60只雌性昆

5、明種小鼠隨機分為正常對照組、慢性支氣管炎NH3霧化模型組、藍玉簪顆粒高、中、低劑量治療組、復(fù)方氣管炎片治療組（每組10只）. 小鼠慢性支氣管炎模型復(fù)制參照陳氏6-7等方法進行改進. 依次以組為單位將小鼠放入YIS?8A多功能誘咳引喘儀，應(yīng)用氨水霧化吸入引咳方法誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生慢性支氣管炎. 除正常組外，其余各組前10 d每日給予氨水霧化吸入5次，每次2 min，間隔30 min，后20 d每日給予氨水霧化吸入2次，每次2 min，間隔30 min，全程30 d，用以制備慢性支氣管炎動物模型.1.2.2治療第31日起，動物藥物灌胃給藥，1次/d，共計15 d；對照組：20 mL/kg生理鹽水（NS）

6、；模型組20 ml/kg生理鹽水（NS）灌胃；藍玉簪顆粒治療組：分別給予相當于4 g生藥/kg，2 g生藥/kg，1 g生藥/kg的顆粒溶于生理鹽水灌胃8；復(fù)方氣管炎片治療組，將復(fù)方氣管炎片研成粉末，加蒸餾水配制成2.63 g/L的溶液，按0.05 g/kg灌胃.15 d后處死動物收集標本. 所有小鼠均于末次給藥的當天晚上禁食，第2 日上午處死，NS制成100 g/L肺組織勻漿，用于進行超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的測定，測定均參照試劑盒說明. 其余肺組織多聚甲醛固定，包埋，切片，HE染色，觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化.統(tǒng)計學(xué)處理： 計量數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS11.

7、0統(tǒng)計分析軟件進行處理. 組間比較采用方差分析及LSD?t檢驗. 2結(jié)果2.1小鼠肺組織病理學(xué)變化對照組小鼠支氣管，細支氣管纖毛柱狀上皮基本正常. NH3模型組小鼠支氣管粘膜上皮細胞的纖毛發(fā)生粘連、倒伏、脫失，上皮細胞空泡變性、壞死、增生、較大支氣管上皮細胞可見變性、脫落和杯狀細胞增生. 細支氣管皺縮，周圍可見單核細胞、淋巴細胞浸潤. 氣管腔內(nèi)可見大量漿液滲出物，部分區(qū)域肺泡隔斷裂形成肺大泡，肺間質(zhì)血管擴張淤血. 藍玉簪顆粒高劑量治療小鼠大支氣管，細支氣管纖毛柱狀上皮基本正常, 纖毛上皮細胞未見明顯變性、壞死、脫落、杯狀上皮細胞增生等病理變化，未見漿液滲出物；細支氣管無痙攣改變. 中劑量組小鼠

8、氣管腔內(nèi)可見少量滲出物，纖毛柱狀上皮以及杯狀細胞可見輕度增生, 管壁可見少量淋巴細胞浸潤. 低劑量組小鼠大支氣管纖毛柱狀上皮以及杯狀細胞可見增生, 管壁可見淋巴細胞浸潤，管腔內(nèi)可見較多漿液滲出物，肺邊緣處肺氣腫明顯輕于模型對照組小鼠. 復(fù)方氣管炎片治療組小鼠肺組織的病理變化和藍玉簪顆粒高劑量治療組相似(圖1).2.2咳嗽次數(shù)觀察末次給藥后觀察3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)，共觀察3次，每次間隔2 h. 若出現(xiàn)3次以上的典型咳嗽動作（腹肌收縮或縮胸，同時張大嘴，有時有咳嗽聲）算作“咳嗽”動物. 如沒有則作“無咳嗽”動物9. 給藥后統(tǒng)計咳嗽次數(shù), 公式為抑制率=(模型組咳嗽次數(shù)-給藥組咳嗽次數(shù))/模型組咳嗽

9、次數(shù)，計算抑制率(表1). 藍玉簪顆粒三個劑量組均有止咳的效用，這種效用與用藥的劑量成正比，高劑量組效果最好，優(yōu)于臨床常用的復(fù)方氣管炎片. 表1對NH3所致小白鼠咳嗽的影響（略）2.3肺組織勻漿中SOD,MDA含量的變化模型組中SOD活力低于對照組（P<0.05），MDA含量高于對照組. 藍玉簪顆粒高劑量治療組SOD活力高于模型組（P<0.05），與對照組沒有統(tǒng)計學(xué)差異；MDA含量低于模型組（P<0.05）和對照組（P<0.05）. 中劑量及低劑量治療組SOD活力高于模型組（P<0.05）；MDA含量低于模型組（P<0.05）和對照組（P<0.05）.

10、 復(fù)方氣管炎片治療組SOD活性高于模型組（P<0.05）；MDA含量低于模型組和對照組（P<0.05）. 藍玉簪高劑量組可將受到損傷的SOD活性恢復(fù)接近正常，并將MDA水平降至正常水平之下，中、低劑量組也有此種效應(yīng)，但均略于高劑量組；復(fù)方氣管炎片也具有此種作用，但略遜于藍玉簪高劑量組（表2）. 表2肺組織勻漿中SOD,MDA含量的變化 （略）3討論文獻報導(dǎo)，慢性支管炎已成為誘導(dǎo)肺癌的重要因素10. 本實驗參照陳奇6方法并加以改進. 實驗中模型小鼠呈現(xiàn)煩躁不安，頻繁跳動，咳嗽樣動作較多等反應(yīng). 氨水刺激約1 wk后，小鼠活動能力明顯降低，有多只小鼠出現(xiàn)間斷性咳嗽，消瘦,毛發(fā)灰白稀疏、

11、干枯蓬松，納差，大便質(zhì)黏等特征. 造模30 d，模型組小鼠肺支氣管黏膜結(jié)構(gòu)不完整，管壁形態(tài)亦發(fā)生改變，上皮細胞大量脫落，變性壞死，支氣管管腔出現(xiàn)漿液滲出、黏膜層出現(xiàn)炎性細胞浸潤,較多肺泡壁充血水腫，細支氣管皺縮，小靜脈擴張并有瘀血；表明模型復(fù)制成功. 藍玉簪顆粒高劑量治療后小鼠咳嗽次數(shù)明顯減少；肺大支氣管纖毛柱狀上皮細胞、細支氣管黏膜上皮細胞病理改變和均較模型動物明顯減輕.氧自由基是機體正常代謝時產(chǎn)生的有極強氧化能力的活性原子或基團，氧自由基攻擊膜結(jié)構(gòu)會使細胞組織結(jié)構(gòu)和功能均遭到破壞5,  SOD活力降低和過氧化物MDA的堆積，氧化?部寡躉?的平衡失調(diào)，造成小鼠呼吸器官的氧化損傷，發(fā)

12、生組織形態(tài)學(xué)的慢支病變；藍玉簪顆粒治療各劑量組小鼠肺組織SOD的生物活性明顯增強. 并抑制體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化，促進還原反應(yīng)的發(fā)生，從而起到抑制急性和慢性炎癥,減輕氨水所造成的損傷的作用.實驗研究初步表明慢性支氣管小鼠經(jīng)過藍玉簪顆粒治療可得到明顯改善. 其機理是藍玉簪顆粒能升高慢支小鼠肺組織SOD的活力水平,抑制MDA的生成,從而調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化與抗氧化平衡紊亂,對持久的炎性物質(zhì)（NH3）所引起的慢性炎癥具有治療作用. 在慢性炎癥的發(fā)生過程中，多種炎性因子均參與反應(yīng)，藍玉簪顆粒對抗炎性物質(zhì)具體的機制還有待進一步研究.【參考文獻】  1馬俊,趙汝能. 甘肅龍膽科藏藥初步調(diào)查J. 甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)

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