側(cè)腦室注射AVP與微電泳AVP對(duì)家兔隔區(qū)溫敏神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響

1、    側(cè)腦室注射AVP與微電泳AVP對(duì)家兔隔區(qū)溫敏神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響        隔區(qū)不僅分布大量的精氨酸加壓素(AVP)神經(jīng)元，而且也分布溫敏神經(jīng)元，參與生理性與行 為性體溫調(diào)節(jié)。本文觀察了側(cè)腦室注射AVP和微電泳AVP對(duì)隔區(qū)溫敏神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響， 以證明隔區(qū)注射AVP的抗熱作用是否與AVP直接影響，隔區(qū)溫度敏感神經(jīng)元的活動(dòng)有關(guān)。1材料與方法選用體重1.82.6kg家兔36只，用25%烏拉坦溶液靜脈麻醉(1g/kg)，完成有關(guān)手術(shù)。用直 流恒溫電熱毯裹住家兔軀體，

2、使肛溫維持在38.5。隔區(qū)溫敏神經(jīng)元放電活動(dòng)的記錄定位按Sawyer兔腦譜取A35，L12.5， H59(腦表面下)，用充灌3 mol/L KCL溶液的玻璃微電極細(xì)胞外記錄隔區(qū)溫敏神經(jīng) 元 的放電活動(dòng)，然后用超級(jí)恒溫泵向循環(huán)變溫裝置分別泵入熱水和冷水使隔區(qū)局部溫度分別升 高或降低23，鑒別神經(jīng)元的類別。側(cè)腦室注射AVP 1 ng(1ng/l)，觀察放電的變化。 記錄部位局部溫度的控制、腦溫的測(cè)量以及側(cè)腦室插管定位同以往工作。神經(jīng)元分類的標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)局部溫度敏感系數(shù)，如溫敏感系數(shù)大于或等于0.8 imp/s,則為 熱敏神經(jīng)元；若溫度系數(shù)小于或等于-0.6 imp/s,，則為冷敏神經(jīng)元。微電泳采用5

3、管玻璃微電極，電極尖端為36 m。中心管充以含2%滂胺天藍(lán)的2 mol/L氯化 鈉溶液(電阻1020 m)，用以引導(dǎo)神經(jīng)元放電活動(dòng)和電極定位標(biāo)記。側(cè)管按需要分別充人 工腦脊液(ACSF)，AVP(Sigma,6.0×10-5 mol/L,pH5.5)，AVPv1受體阻斷劑d(c H2)5Tyr(me)2AVP(Sigma,2.5×10-5 mol/L,pH 5.5)。給藥注射電流+60 n A，時(shí)間60 s，滯留電流-10 nA。取自發(fā)放電的平均數(shù)作為對(duì)照值，然后觀察施以熱、冷和給藥等一系列項(xiàng)目的放電頻率，分 別求出其平均數(shù)與對(duì)照進(jìn)行比較，以便統(tǒng)一判定效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將腦

4、的有關(guān)部位進(jìn)行切片確認(rèn)微電極尖端的位置。     2實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)側(cè)腦室注射AVP對(duì)隔區(qū)溫敏神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響側(cè)腦室注射AVP后隔區(qū)熱敏神經(jīng)元放 電率明顯增加，持續(xù)到第8 min開始逐漸恢復(fù)；而對(duì)冷敏神經(jīng)元的放電活動(dòng)則有抑制作用， 在給AVP后第 8min放電頻率恢復(fù)到自發(fā)水平(表1)。Tab.1Effect of injection of AVP into lateral ventricle on discharge activity of WSN and CSN in septal area (imp/s,<"0 (881 byte

5、s)" src="/med/cano/201003/20100309170520817" 12 14>± s)Neuronsnspont.freqLocal coolingLocal warmingA fter injection of AVP048(min)WSN114.03±1.772.54±1.55*5.92±2.31* *4.49±2.36*4.92±2.91*4.61±2.79CSN93.45±1.604.98±2.13*2.03±0.73 * *3

6、.97±1.712.73±1.27*3.43±1.73     WSH:Warm-sensitve neurons,CSN:Cold-sensitive neurons.*P<0.05,*P<0.01,*P< 0.001,compared with spontaneous frequency Tab.2Effect of microiontophoretically ap plied AVP on discharge activity of WSN and CSN in septal area (imp/s

7、,<"0 (881 bytes)" src="/med/cano/201003/20100309170520817" 12 14>± s)Neuronsnspont.freqLocal coo lingLocal warmingmicroiontophoreticallyACSFAVPWSN104.66±1.743.49±1.406.84±2.54 *4.93±1.866.05±2.16*CSN73.05±0.504.44±1.04*2.16±0.25

8、*3.00±0.462.29±0.52*     *P<0.05,*P<0.01,*P<0.001 c ompared with spontaneous frequency(2)微電泳AVP對(duì)隔區(qū)溫敏神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響微電泳AVP能使隔區(qū)熱敏神經(jīng)元放電頻率 明顯增加，冷敏神經(jīng)元放電頻率明顯減少；而正電流注射ACSF對(duì)隔區(qū)熱敏和冷敏神經(jīng)元放電 活動(dòng)均無(wú)明顯影響(表2)。4個(gè)熱敏神經(jīng)元微電泳AVPv1-受體阻斷劑d(CH2)5Tyr(Me)2AVP時(shí)，其放電 頻率平均降低了14.8%；5個(gè)冷敏神經(jīng)元微電泳AVPv1受體

9、阻斷劑時(shí)，其中4個(gè)神經(jīng)元 放電頻率平均增加了25.4%，有一個(gè)冷敏神經(jīng)元放電出現(xiàn)減少現(xiàn)象。 3討論本實(shí)驗(yàn)在家兔隔區(qū)記錄到的溫敏神經(jīng)元的機(jī)率較PO-AH要低，因而在36只家兔中只完成了37 個(gè)溫敏神經(jīng)元放電活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)過程，可能與隔區(qū)溫敏神經(jīng)元分布較少有關(guān)。有趣的是神經(jīng)元 的平均放電頻率也較低，這就從一個(gè)側(cè)面為隔區(qū)在體溫調(diào)節(jié)中的主要作用是參與散熱調(diào)節(jié)過 程提供了依據(jù)，因?yàn)榈皖l率的熱敏神經(jīng)元主要是控制散熱調(diào)節(jié)反應(yīng)。我們往側(cè)腦室注射AVP和微電泳AVP能興奮隔區(qū)熱敏神經(jīng)元和抑制冷敏神經(jīng)元的放電活動(dòng)，特 別是對(duì)熱敏神經(jīng)元的興奮效應(yīng)非常明顯。實(shí)驗(yàn)表明，隔區(qū)注射AVP抗熱作用的機(jī)理，除了以 往證明的隔區(qū)注射

10、AVP能影響PO-AH溫敏神經(jīng)元活動(dòng)外，AVP直接引起隔區(qū)熱敏神經(jīng)元的興奮 和抑制冷敏神經(jīng)元的活動(dòng)是一個(gè)重要原因，而且主要是引起熱敏神經(jīng)元的興奮所致。這一結(jié) 果進(jìn)一步為隔區(qū)在體溫調(diào)節(jié)中的主要作用是參與散熱過程的理論提供了新的依據(jù)。腦內(nèi)注射AVPv1-受體阻斷劑d(CH2)5Tyr(Me)2AVP能有效的阻止AVP的抗熱 作用，因而認(rèn)為AVP的抗熱作用是AVP與AVPv1受體結(jié)合所致。我們的實(shí)驗(yàn)初步觀察到 微電泳AVPv1-受體阻斷劑d(CH2)5Tyr(Me)2AVP能使隔區(qū)熱敏神經(jīng)元放電 輕度降低，冷敏神經(jīng)元放電增加；而正電注射ACSF后熱敏神經(jīng)元和冷敏神經(jīng)元放電頻率均無(wú) 明顯變化。實(shí)驗(yàn)在一定程度