吳茱萸提取物的抗氧化作用

1、吳茱萸提取物的抗氧化作用作者：甄攀史國茹張衛(wèi)喬海霞Wine and judgement mature with age. 【摘要】目的：研究吳茱萸提取物清除羥自由基(OH)和超氧陰離子自由基(O-2)的作用。方法：用硫酸亞鐵和過氧化氫反應(yīng)產(chǎn)生OH;用鄰苯三酚自氧化法產(chǎn)生O-2。用分光光度法測定吳茱萸正丁醇提取物1、正丁醇提取物2和乙醚提取物對OH和O-2的清除作用。結(jié)果：三種提取物及Vc清除OH的IC50分別為145.0、141.0、335.0、2.3gmL-1;正丁醇提取物1清除O-2的作用無法測定，吳茱萸正丁醇提取物2、乙醚提取物及Vc清除O-2的IC50分別為270.0、0.185、0.

2、0575gmL-1()。結(jié)論：本研究中的三種吳茱萸提取物均有一定的抗氧化作用并呈量效關(guān)系。吳茱萸脂溶性成分清除O-2的作用非常顯著，與Vc有相似作用?！娟P(guān)鍵詞】吳茱萸;抗氧化;羥自由基;超氧陰離子自由基In a great river great fish are found; but take heed lest you be drowned. 【ABSTRACT】Objective:TostudytheremovalfunctionofexfractfromEvodiarutaecarpa(Juss.)onhydroxylradical(OH)andSuperoxideanionradic

3、al(O-2).Methods:KreactionofferroussulfateandhydrogenperoxidewasusedtogenerateOH，withthepyrogallolautoxidationmethodproducingO-2.Theremovingabilityofnbutanolextract1，nbutanolextract2andetherextractwasdeterminedbyspectrophotometry.Results:IC50ofscavengingOHforthesethreekindsofextractsandVCwere145.0，14

4、1.0，335.0，2.3gmL-1respectively;buttheabilityofremovingO-2ofnbutanolextract1couldnotbedetermined，IC50oftherestthreewere270.0，0.185and0.0575gmL-1respectively.Conclusion:ThreeextractsfromEvodiarutaecarpa(Juss.)Benth.havesomeantioxidation，andshoweddoseeffectrelationship.TheabilityofremovingO-2forliposol

5、ubleswasveryremarkable,andithadsimilarabilitywiththatofVc.【KEYWORDS】Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.,Antioxidation,Hydroxylradicals,SuperoxideanionradicalThe emperor treats talent as tools, using their strongpoint to his advantage. 自由基是含有一個單電子的分子、離子或原子團(tuán)，許多疾病的損傷機(jī)制都與其有密切關(guān)系。其中由氧自由基引起的氧化作用是導(dǎo)致生物組織損傷和病變的重要原因

6、1。研究發(fā)現(xiàn)，超氧陰離子自由基(O-2)、羥自由基(OH)等與生物體損傷、衰老、心腦血管疾病等緊密相關(guān)。許多學(xué)者認(rèn)為某些中草藥的療效與其抗氧化作用密切相關(guān)。已發(fā)現(xiàn)的植物藥抗氧化成分有黃酮類、皂苷類、多糖類、有機(jī)酸類和萜類等(教育學(xué)/職業(yè)教育論文 )。這些物質(zhì)通過清除人體內(nèi)自由基，還原體內(nèi)氧化性物質(zhì)，從而達(dá)到保護(hù)機(jī)體的作用2。吳茱萸Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.是蕓香科植物吳茱萸的干燥近成熟果實，具有溫胃止吐、溫脾止瀉、鎮(zhèn)痛、升高體溫等作用。吳茱萸中含有皂苷、揮發(fā)油、生物堿、多糖、氨基酸和黃酮等多種有效成分。我們用硫酸亞鐵和過氧化氫反應(yīng)產(chǎn)生OH，用鄰苯三酚自氧化法產(chǎn)生

7、O-2，用分光光度法測定吳茱萸提取物對OH、O-2的清除作用34。1材料與方法1.1儀器與試劑You never know what you can do till you. UV754N紫外可見光分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司制造)。Answer a fool according to his folly. 吳茱萸藥材購于張家口市藥材市場，由河北北方學(xué)院中醫(yī)學(xué)院趙恒成老師鑒定。人參皂苷Re對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。 蘆丁對照品由天津一方科技公司提供。 所用試劑均為分析純試劑。1.2實驗方法1.2.1供試品的制備All are not saints that go to chu

8、rch. 1.2.1.1乙醚提取物Beg from beggers and youll never be rich. 吳茱萸干燥、粉碎，精密稱取適量，用乙醚浸泡，1h后倒出乙醚液，再倒入適量乙醚，于35水浴中回流提取1h，重復(fù)上述步驟4次。提取液合并，過濾，蒸餾至無乙醚味，殘余物即為吳茱萸乙醚提取物。1.2.1.2正丁醇提取物Death when it comes will have no denial. 上述用乙醚脫脂后的吳茱萸殘渣揮干乙醚，用70%乙醇浸泡12h，于86水浴回流提取2h，重復(fù)提取3次。提取液合并，過濾，減壓濃縮得浸膏。浸膏用水飽和的正丁醇浸泡、萃取多次至正丁醇萃取液幾乎無色

9、，正丁醇液合并，抽濾，減壓濃縮。在此提取階段得到二種提取物：正丁醇濃縮液從燒瓶中倒出，在放置過程中沉淀出的沉淀物，用乙醚反復(fù)脫脂后，抽濾，得正丁醇提取物1;從燒瓶中倒出的正丁醇濃縮液濾除沉淀后的上清液中加入大量乙醚，所得沉淀物用乙醚反復(fù)脫脂后，抽濾，得正丁醇提取物2。此二種提取物均在烘箱中于80烘干至無正丁醇味。Great winds blow upon high hills. 1.2.2供試品的抗氧化1.2.2.1清除OH的作用體系中加入100mmolL-1磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)3.0mL，5.5mmolL-1FeSO41.0mL，6.5mmolL-1EDTA2Na1.0mL，0.6%

10、H2O21.0mL，10mmolL-1水楊酸鈉1.0mL和不同體積正丁醇提取物1、正丁醇提取物2、乙醚提取物，用水定容為10mL。37恒溫1h后，置于冰水中促滅。用UV754N紫外分光光度計于510nm測定不加樣管的吸光度A標(biāo)和加樣管的吸光度A樣。按下式計算OH清除率：論文教育信息網(wǎng) 羥自由基清除率%=A標(biāo)-A樣A標(biāo)100%1.2.2.2清除O-2的作用體系中加入4.5mLTrisHCl緩沖溶液(pH=8.2)，1.0mL1.0mmolL-1鄰苯三酚(由10mmolL-1HCl溶液配制)，一定體積的正丁醇提取物1、正丁醇提取物2、乙醚提取物，用水定容為9.0mL。用UV754N紫外分光光度計于

11、325nm測定5min內(nèi)不加樣管和加樣管的吸光度隨時間的變化率B標(biāo)和B樣，按下式計算O-2清除率：超氧陰離子自由基清除率(%)=B標(biāo)-B樣B標(biāo)100%Early mistakes are the seeds of future trouble. 2結(jié)果2.1吳茱萸提取物清除OH吳茱萸正丁醇提取物1、正丁醇提取物2、乙醚提取物和維生素C清除OH的作用見表1。表1吳茱萸提取物清除OH的作用Deeds are fruits; words are but leaves. 2.2吳茱萸提取物清除O-2Nightingales will not sing in a cage. 由于吳茱萸正丁醇提取物1在3

12、25nm處吸光度很大，無法測定其對O-2清除作用。正丁醇提取物2、乙醚提取物和維生素C清除O-2的作用見表2。表2吳茱萸提取物清除O-2的作用結(jié)果3討論It is right to put everything in its proper use. 前期研究發(fā)現(xiàn)，吳茱萸正丁醇提取物部分具有較強(qiáng)的抑菌作用5，也具有一定的清除亞硝酸鹽的作用，本文試驗結(jié)果提示吳茱萸正丁醇提取物還具有清除氧自由基的作用并呈量效關(guān)系。由此可見，正丁醇提取物應(yīng)是吳茱萸的有效部位群之一。吳茱萸正丁醇提取物中主要成分有可能是皂苷和黃酮，因為皂苷類和黃酮類成分在水飽和的正丁醇中有較大的溶解度，因此，常用正丁醇提取總皂苷和總黃酮

13、。含量測定結(jié)果(正丁醇提取物1中含有總皂苷28.71%、總黃酮43.25%，正丁醇提取物2中含有總皂苷31.27%、總黃酮44.31%)6也說明其中這兩類物質(zhì)含量較高。揭示吳茱萸總皂苷和總黃酮可能是其主要有效成分，對此有待進(jìn)一步研究。正丁醇提取物1在O-2測定波長處吸光度很大，超出了儀器使用范圍，無法測量。正丁醇提取物2則能順利完成測量，說明二者含有不同的成分。正丁醇提取物1和2的抑菌作用、清除氧自由基的作用相似，總皂苷和總黃酮的含量相近，但清除亞硝酸鹽的作用稍有差別。Love makes obedience easy. 乙醚提取物為脂溶性成分，其抑菌作用較正丁醇提取物作用弱，但其清除NO2-

14、、OH和O-2的作用很強(qiáng)并呈量效關(guān)系，與維生素C有相似作用。說明吳茱萸脂溶性成分具有很強(qiáng)的抗氧化作用，是其抗氧化的主要有效部位，具有潛在的開發(fā)價值。Make the night night, and the day day, and you will have a pleasant time of it. 【參考文獻(xiàn)】1陳主初.病理生理學(xué)M.北京：人民衛(wèi)生出版社,2001.8395.2先紅，吳可，孫存普.中藥抗氧化活性的主要成分及其自由基清除作用J.國外醫(yī)學(xué):中醫(yī)中藥分冊，2003，25(3)：150.3甄攀，王治寶，張萬明，等.吳茱萸多糖的提取及其氧化作用研究J.中成藥，2005，27(4)：491.4蔡仲軍，陳仕江，尹定華，等.不同產(chǎn)地冬蟲夏草清除羥自由基作用的研究J.中藥學(xué)，2004，35(1)：57.5喬海霞，甄攀，李秀娟，等.吳茱