冬蟲夏草醇提取物對(duì)大鼠缺血再灌注過程心肌保護(hù)作用研究

1、    冬蟲夏草醇提取物對(duì)大鼠缺血再灌注過程心肌保護(hù)作用研究        摘要目的和方法：觀察冬蟲夏草對(duì)缺血再灌注過程心肌保護(hù)作用。采用Langendorff非循環(huán)式離體心臟灌流方法，與正常對(duì)照組、缺血再灌組、刺五加注射液用藥組相對(duì)比，研究了冬蟲夏草醇提取物對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注過程脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(MDA)和腺嘌呤核苷酸含量的影響。結(jié)果：冬蟲夏草醇提取物顯著降低了再灌注心肌的MDA水平(P0.01)及顯著提高了心肌中腺嘌呤核苷酸含量(P0.01)。結(jié)論：冬蟲夏草可通過改善心

2、肌的能量代謝減少缺血再灌注損傷，對(duì)心肌的保護(hù)作用明顯優(yōu)于刺五加注射液。主題詞腺嘌呤核苷酸類； 心肌再灌注損傷； 中草藥 The protective effect of Cordyceps Sinensis (Berk) succi on the myocardium during ischemia reperfusionLIU Feng-Zhi, LI Yan-Ping, HUANG Ming-Li, JINANG Jie-Ling,XIE Zhen-Huan, ZHAO Ya-Jun, SUN Jin-Sheng, WANG Xiao-MingDepartment of Pathophys

3、iology, Harbin Medical University, Harbin (150086)Abstract AIM and METHODS:Weadapted the nonecirculating method perfused rat heart and high performance liquid chromatography technique (HPLC) and compared with the control group, the ischemia reperfusion group and the Acanthopanox Senticosus group, st

4、udied the effect of Cordyceps Sinensis (Berk) succi on the content of adenine nucleotides and MDA during ischemia reperfusion. RESULTS：It was shown that adenine nucleotide and total adenine nucleotide pool level increased obviously in the Cordyceps group and the level of MDA in the cardium decreased

5、 obviously during ischemia reperfusion (P0.01). CONCLUSION：Cordyceps can reduce ischemial reperfusion injury by improving cardial energy metabolism and the protective effect of Cordyceps in much better than that of the Acanthopanax Senfi Cosus.MeSHAdenine nucleotides; Myocardial reperfusion injury;

6、Drugs, Chinese herbal 冬蟲夏草為我國(guó)特有的名貴中藥，自古以來為人類治病健身之珍品，現(xiàn)已由人工培養(yǎng)菌絲體產(chǎn)品代替。經(jīng)臨床證明1：能明顯提高人體的免疫功能，可選擇性地作用于心臟有關(guān)部位，增強(qiáng)心肌細(xì)胞的抗缺氧能力、增加心臟的營(yíng)養(yǎng)性血流量及降低膽固醇和脂蛋白作用，但有關(guān)冬蟲夏草菌絲體的醇提取物在心肌缺血再灌損傷過程對(duì)能量代謝及脂質(zhì)過氧化物的影響尚未見報(bào)道。因此本文以過氧化脂質(zhì)及腺苷酸含量為指標(biāo)觀察了冬蟲夏草醇提取物在缺血再灌注過程中，對(duì)心肌的保護(hù)作用，這對(duì)今后臨床心血管疾病的防治及新藥開發(fā)都具有重要意義。材料與方法一、主要試劑：AMP、ADP、ATP等各種標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma)，刺

7、五加注射液(黑龍江完達(dá)山藥廠)，冬蟲夏草菌粉(白求恩醫(yī)科大學(xué)藥廠)，按文獻(xiàn)2所報(bào)道方法，制成含20%生藥的水溶液。二、色譜條件：日本島津LC-6A高效液相色譜儀，色譜柱：Hypersi/BDS填料，4.6×150 mm，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，靈敏度0.46 UFS，流動(dòng)相組成：215 mmol/L KH2PO4,2.3 mmol/L硫酸氫四丁胺和3.5%乙腈水溶液，pH 6.25。三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)步驟：健康雄性Wistar大鼠(本校腫瘤研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供)，體重(250±40)g，隨機(jī)分為4組：對(duì)照組(灌流55 min)，缺血再灌(ischemiareperfusi

8、on,IR）組(預(yù)灌15 min、缺血20 min,再灌20 min)，刺五加+I/R組、蟲草+I/R組(同上)，按0.2 mL藥液/L KHB液的藥量給藥100 mL。采用Langendorff離體心臟灌流法造成心臟缺血再灌注模型。灌注結(jié)束，立即在-70下將心肌冷凍，(1)作高能磷酸化合物含量測(cè)定：將左室心肌稱重，在0.42 mol/L高氯酸溶液中04制成勻漿(100 mg/mL)，按100 mg組織加0.35 mL氫氧化鉀的量中和后，用超聲細(xì)胞粉碎器打碎(250 mA超聲3 min)使能量物質(zhì)釋放。7 000 r/min離心10 min，上清液用0.25 m微孔濾膜過濾去雜質(zhì)，取10 L注

9、高效液相色譜檢測(cè)。(2)MDA水平測(cè)定，按文獻(xiàn)3所述方法測(cè)定。四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間差異顯著性采用t檢驗(yàn)方法判別。結(jié)果1.大鼠心肌組織中ATP及總腺苷酸(TAN)含量變化：I/R組含量顯著低于對(duì)照組(P0.01)，刺五加(AS)+I/R組顯著高于缺血組(P0.01)，但仍不及對(duì)照組水平(P0.01)。蟲草組(CP)+I/R顯著高于缺血I/R組及刺五加+I/R組(P0.01)，與對(duì)照組無顯著差異，見表1。2.冬蟲夏草醇提取物對(duì)大鼠心肌組織中脂質(zhì)過氧化物(MDA)水平的影響：I/R組MDA水平明顯高于對(duì)照組(P0.01)，刺五加+I/R組、

10、蟲草+I/R組明顯低于I/R組(P0.01)，蟲草+I/R組更優(yōu)于刺五加+I/R組，見表2。表1心肌樣品中高能磷酸化合物的含量Tab 1 The content of high energy phosphate compound in myocardium (±s)GroupnATPADPAMPTANControl62.12±0.083.77±0.491.31±0.297.15±0.84I/R60.74±0.07*1.81±0.230.93±0.36*3.48±0.42*AS+I/R61.38±

11、0.15*2.59±0.58*1.15±0.115.23±0.59*CP+I/R62.00±0.133.16±1.041.80±0.547.48±0.53*P0.05，*?*P0.01，vscontrol;P0.05，P0.01，vs IR；P0.05，P0.01，vs IR， or ASIR；TAN=ATP+ADP+AMP；ASAcanthcpanox;CP=cordyceps 表2蟲草醇提取物對(duì)大鼠心肌MDA的影響Tab 2 The effect of cordyceps on MDA leval in rat myoc

12、ardium (±s)GroupnMDA(nmol/g)Control1043.07±11.32I/R858.89±9.24*?*AS+I/R943.54±9.54CP+IR636.06±7.17*?*P0.01, vs control; P0.01vs I/R 討論在心血管疾病中，經(jīng)常發(fā)生缺血再灌注損傷，其機(jī)制可能是多因素的，但主要環(huán)節(jié)有三個(gè)4，5：即能量代謝失常和鈣超載、自由基的生成。能量代謝障礙是始動(dòng)因素，ATP是心肌細(xì)胞直接利用的能源物質(zhì)，其含量變化與心臟功能密切相關(guān)；氧自由基可損傷心肌細(xì)胞膜，生成脂質(zhì)過氧化物，是造成缺血再灌注損傷的直

13、接原因。冬蟲夏草可使心肌的ATP、ADP、AMP水平顯著提高，達(dá)正常狀態(tài)，而刺五加雖然也使ATP含量顯著提高，但并不能恢復(fù)到無缺血再灌時(shí)的水平。蟲草使缺血心肌ATP及總腺苷酸顯著升高的原因之一可能是由于蟲草中含有一些ATP合成的前體物質(zhì)，使ATP合成的水平通過補(bǔ)救途徑迅速提高。據(jù)報(bào)道，蟲草菌粉可明顯降低老令大鼠血漿中MDA水平6。以及肝組織中MDA水平，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，冬蟲夏草可顯著降低缺血再灌心肌的MDA水平。冬蟲夏草對(duì)心肌缺血再灌注過程具有較好的自由基清除作用和促使心肌能量代謝物質(zhì)迅速恢復(fù)至正常水平的作用，療效優(yōu)于目前臨床應(yīng)用的心血管藥物刺五加注射液，有可能成為今后臨床上抗缺血再灌注損傷大有前途的藥物。作者單位：哈爾濱醫(yī)科大學(xué)病理生理教研室(哈爾濱150086)參考文獻(xiàn)1劉燦坤.冬蟲夏草及蟲草菌絲體藥理研究近況.山東中醫(yī)雜志，1991，10(5)：42.2樓雅卿，瘳小曼，陸迎春.人工蟲草菌絲體醇提物和發(fā)酵液的心血管藥理研究.中草藥，1986，17：17.3徐叔云，卡如謙，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994.936.4Reimer A, Rober B, Tatum H.Pathobiology of acute myocardidal ischemia:metabolic, functional and ultrastructural stu