中藥中皂苷類化合物的抗氧化活性評價研究

1、中藥中皂苷類化合物的抗氧化活性評價研究<    【關(guān)鍵詞】   人參； 西洋參； 三七； 皂苷類化合物； 抗氧化活性Abstract：ObjectiveTo explore the antioxidative activity of the saponins in Panax ginseng, Panax quinquefoljus and Panax notoginseng.  MethodsPhotochemi-luminescence (PCL) was applied to determine the antioxida

2、tive activity of the saponins for the first time, and DPPH method was developed for evaluating the scavenging activity of the extracts.Photochemi-luminescence (PCL) was applied to determine the antioxidative activity of the saponins for the first time, and DPPH method was developed for evaluating th

3、e scavenging activity of the extracts.ResultsThe saponins of 95% ethanol extracts from Panax ginseng, Panax quinquefoljus, Panax notoginseng had obvious anti-radical capacity, the efficiency inereased with the contents of major saponins extracted from plants.ConclusionPCL method is successfully appl

4、ied to study the the antioxidative activity of the saponins. Key words： Panax ginseng;   Panax quinquefoljus;  Panax notoginseng;   Saponins;   Antioxidant    現(xiàn)代 研究發(fā)現(xiàn)很多疾病的發(fā)生與自由基反應(yīng)有關(guān)?；钚匝踝杂苫芍苯踊蜷g接損傷DNA，導致DNA鏈斷裂和染色體斷裂1。因此，研究清除氧自由基的物質(zhì)是生命 科學 發(fā)展 的必然趨勢

5、24。傳統(tǒng)中藥在緩解衰老以及衰老性疾病的防治方面有著極為豐富的 實踐 經(jīng)驗 ，我國中草藥資源豐富，因此從中草藥中尋找低毒高效的抗氧化劑是一個很好的途徑。人參是具有極高藥用價值的傳統(tǒng)中藥，在中醫(yī) 治療 中常用于大補元氣、調(diào)補五臟及延緩衰老，是一種重要的抗衰老藥物，人參以及和它親緣關(guān)系較近的西洋參、三七的抗氧化作用已經(jīng)被應(yīng)用到食品和化妝品等領(lǐng)域。    人參Panax ginseng C.A.Mey.、西洋參Panax quinquefoljus L.、三七Panax notoginseng（Burk）F.H.chen系五加科人參屬中重要的3種植物，是我國名貴中藥材。

6、三者主要的有效成分均為皂苷類化合物，已有的研究表明，人參皂苷具有多種生理活性5，幾乎可作用于人體的各個生命系統(tǒng)6，7。研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷類化合物具有清除自由基的作用8，9，但是在自由基清除劑方面人參皂苷是一種較弱的自由基清除劑，此特性在聯(lián)合用藥中有利于人參皂苷抗自由基作用的緩慢釋放。近年研究中清除自由基的實驗多采用Fenton、Haber-W Ei ss、DPPH法等紫外分光光度計法進行分析10，11，本研究將光化學發(fā)光(PCL-photochemi-luminescence)法應(yīng)用于皂苷類化合物的清除自由基能力分析。    光化學發(fā)光(PCL)法是一種測定抗氧化劑

7、和自由基的方法，其樣品制備簡單，分析時間短，試劑用量較少，不受溫度和pH值的影響，且由光化學法生成自由基，簡單、快捷、可靠；并采用化學發(fā)光法檢測自由基，保證了極高的靈敏度。此法已成功測定了維生素片劑的水溶性抗氧化能力12，此外這種方法在國內(nèi)的應(yīng)用報道還比較少。    采用不同體外抗氧化實驗體系測定樣品時，由于抗氧化作用機制不同，有可能產(chǎn)生的結(jié)果也不一致，所以一般要求至少采用兩種方法來衡量樣品的抗氧化活性13。本實驗以人參、西洋參、三七中的皂苷類化合物為研究對象，采用Photochemi-luminescence (PCL)抗氧化活性體外評價體系為分析平臺，系統(tǒng)考察

8、皂苷類化合物的抗氧化活性，并利用DPPH法進行對照評價，為應(yīng)用一種較新的體外抗氧化活性的方法提供實驗數(shù)據(jù)。1  材料與儀器    實驗所用液相試劑均為色譜純試劑（Caledon LaboratoriesL Ltd公司，加拿大），0.45 m濾膜（安捷倫公司，美國），其它試劑為分析純 （北京化工廠），用于PCL 分析的溶劑由AnalytikJena AG公司 （德國）提供。二苯基苦基苯肼自由基 （1，1 -diphenyl- 2 - p icryhydrazyl， DPPH·）購于Sigma公司（美國）。人參切片、西洋參切片、三七根部藥材均購于北

9、京同仁堂大藥房（長春分店），人參皂苷Rg1，Re，Rb1，Rb2，Rc，Rd和三七皂苷 R1對照品購于 中國 藥品生物制品檢定所。Agilent-1100高效液相色譜(安捷倫公司，美國)；DU800紫外可見分光光度計(Backman公司，美國)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛郎儀器有限公司)；S180H超聲清洗器(Elma 公司，德國)；BS 124S 電子 天平( Sartorius AG，德國)；耶拿Photochem抗氧化劑與自由基分析儀（AnalytikJena AG 公司，德國）。 2  方法 2.1  樣品溶液的制備分別精密稱取人參、西洋參、三七藥材粉末 (0.15 mm粒

10、徑) 1.006 3 ，1.004 7 ，1.002 7 g。用30 ml，95%乙醇浸泡(2 h)超聲提取 30 min，提取3次。將乙醇提取液過濾，減壓回收乙醇，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解過 0.45 m濾膜，定容于10    ml容量瓶中，制得人參、西洋參和三七樣品溶液。    分別精密稱取人參、西洋參、三七藥材粉末 (0.15 mm粒徑) 1.005 6 g、1.004 8 g和1.006 9 g。用30 ml，95%乙醇浸泡(2 h)回流提取2 h，提取3次。將乙醇提取液過濾，減壓回收乙醇，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解過 0 .

11、45 m濾膜，定容于10 ml容量瓶中，制得人參、西洋參和三七樣品溶液。    分別精密稱取人參、西洋參、三七藥材粉末 (0.15 mm粒徑) 1.007 8 g 1.0063 g和1.006 0g。用30 ml，95%乙醇浸泡(2 h)60水浴溫浸提取 2 h，提取3次。將乙醇提取液過濾，減壓回收乙醇，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解過 0.45 m濾膜，定容于10 ml容量瓶中，制得人參、西洋參和三七樣品溶液。2.2  高效液相色譜條件采用美國Agilent1100系統(tǒng)，DAD二極管陣列檢測器。Agilent 1100 Series自動進樣器；Agilent

12、-C18 色譜柱 (4.6 mm × 250 mm，5 m) (美國安捷倫)，柱溫 35。采用二元線性梯度洗脫，流速為0.5 ml /min，流動相組成為乙腈（A），0.05%的磷酸水溶液（B），樣品分析時間為50 min，樣品進樣量為10 l，檢測波長為203 nm。流動相梯度：02 min，75%75%B；250 min，75%50% B。2.3  抗氧化活性的PCL法分析采用Photochem (Berlin, Germany)超快速抗氧化劑和自由基全自動分析儀，測定原理是由光化學法生成自由基，并利用化學發(fā)光法檢測自由基。發(fā)光氨(Luminol)是一種光致化學發(fā)光物質(zhì)，通過測量反應(yīng)所生成的光強度來測量自由基的瞬間含量（光強與自由基含量成正比）14。在實驗中使用有光化學激發(fā)作用的光敏劑（Photosensitizer，發(fā)光氨）激發(fā)反應(yīng)分子，使之在紫外燈的作用下以比正常條件下快1000倍的速度發(fā)生氧化反應(yīng)，迅速產(chǎn)生自由基。    采用PCL-ACW-Kit方法測量人參、西洋參和三七提取物中水溶性成分的抗氧化活性。首先，配置分析混合液為 1.0 ml 反