紫外分光光度法測(cè)定荔枝核抗乙肝成分的含量

1、紫外分光光度法測(cè)定荔枝核抗乙肝成分的含量論文網(wǎng)作者：湯建萍 丁立穩(wěn) 周春2010-11-19 2:06:26【關(guān)鍵詞】 荔枝核；,抗乙肝；,黃酮類；,紫外分光光度法摘要：目的研究荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的測(cè)定方法。方法紫外分光光度法在510 nm處測(cè)定。結(jié)果建立了回歸方程C（g/ml） = 2.541 61 + 83.286 26 A, 相關(guān)系數(shù)r = 0.999 8，平均加標(biāo)回收率為100.82%（RSD=1.59%）。測(cè)定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物含量為7.13%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可用于測(cè)定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量。關(guān)鍵詞：荔枝核； 抗乙肝； 黃酮類； 紫外分光光度法

2、Determination of the Content of Antihepatitis B Consituents in Litchi Seed by Spectrophotometric MethodAbstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of the content of antihepatitis B constituents flavonoids in Litchi Seed.MethodsThe content of anti-hapatitis B consituents flavnoids i

3、n Litchi Seed was determined by spectrophtometric method at 510nm. ResultsThe regression equation C（g/ml） = 2.54161 + 83.28626 A and R = 0.9998 of the relationship between concentration and absorbance were established. The average recovery was 100.82% and RSD was 1.59%. The content of antihepatitis

4、B consituents flavonoids in Litchi Seed was 7.13%. ConclusionThe method is easy and accurate, and can be used for determination of the content of antihepatitis B consituents flavnoids in Litchi Seed.Key words：Litchi Seed; Antihepatitis B; Flavonoids; Spectrophometic method 荔枝核是無(wú)患子科植物荔枝的干燥成熟種子，主要分布在福

5、建、臺(tái)灣、廣西、廣東等省。我國(guó)古代藥典記載荔枝核性溫，歸肝、腎經(jīng), 能祛寒止痛?，F(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)研究顯示荔枝核能夠降低血糖、調(diào)節(jié)血脂和提高抗氧化能力、抑制乙肝病毒的作用1，2。徐慶等3發(fā)現(xiàn)荔枝核中黃酮類化合物具有很好的抑制乙肝病毒表面抗原HBsAg的功效。目前除了少量荔枝核被藥用外，大量荔枝核都被遺棄浪費(fèi)。為了充分利用該資源、變廢為寶、研究如何開發(fā)荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物很有意義和價(jià)值。天然藥用植物中黃酮類化合物測(cè)定方法主要有紫外可見(jiàn)分光光度法4、高效液相色譜法5、薄層色譜法6等。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于荔枝核中黃酮類化合物的測(cè)定方法尚未見(jiàn)報(bào)道，本文建立了鋁鹽顯色分光光度法測(cè)定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合

6、物的方法，并測(cè)定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量。1 儀器與材料1.1 儀器756MC紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）；WS2-133-74多功能電子恒溫水浴鍋（廣東汕頭醫(yī)療器械二廠），Explorer11140電子天平（瑞士OHAUS公司）。1.2 材料荔枝核購(gòu)自中藥材公司，產(chǎn)地廣西；蘆丁對(duì)照品來(lái)自中國(guó)藥品生物學(xué)制品檢定所；氯化鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉（分析純）；95%乙醇；石油醚；水為蒸餾水。2 方法與結(jié)果2.1 測(cè)定方法依據(jù)以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)控制適宜pH值，使黃酮類化合物與鋁鹽形成配合物在可見(jiàn)光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2

7、.2 試樣品溶液的配制荔枝核打成粉過(guò)40目的篩。取一定量的荔枝核粉，加入適量50 乙醇浸提。提取液過(guò)濾后加入石油醚萃取以除去酯類物質(zhì)和色素，分液去掉石油醚層得到荔枝核黃酮類化合物的提取溶液。2.3 對(duì)照品溶液的配制精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg, 用50%乙醇溶解后定容50.00ml，配制成蘆丁50%乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.200 mg/ml）。2.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇各取試樣品溶液和蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液少量，按25方法顯色后在400650 nm區(qū)間掃描，確定二者在510 nm處均有一強(qiáng)吸收峰(圖12)，故選擇510 nm 為測(cè)定波長(zhǎng)。圖1 蘆丁標(biāo)樣顯色掃描曲線(略)2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立精確量取蘆

8、丁對(duì)照溶液 0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml于25 ml 容量瓶，加水至6 ml。加入5% NaNO2溶液1.00 ml, 混勻后放置6 min；再加入10% AlCl3溶液1.00 ml，混勻后放置6 min；最后加入4% NaOH溶液10.00 ml顯色，加水至刻度。靜置15 mins后在510 nm處測(cè)定吸光度，以1號(hào)瓶為空白。繪制出吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3）。用最小二乘法求出回歸方程為：C（g/ml） = 2.541 61 + 83.286 26A, 相關(guān)系數(shù)r = 0.999 8 ,P 0.0001表明蘆丁含量在線性范圍8.0048.00

9、/ml之間與吸光度呈良好的線性關(guān)系。圖2 荔枝核提取液顯色掃描曲線(略)圖3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(略)2.6 準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)取荔枝核黃酮類化合物的提取液，加50 乙醇配成不同濃度的3種樣品。取1ml樣品溶液，按25顯色測(cè)定A。結(jié)果見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)顯示5次測(cè)定A值變化很小，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）1.5% (n=5)，表明該方法準(zhǔn)確性高。表1 準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取1ml的 1號(hào)樣品顯色后,每隔10 min測(cè)定1次A值。結(jié)果見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)表明在30 min內(nèi)A值保持穩(wěn)定，1 h后A值下降約10%, 因此提取液顯色后應(yīng)在30 min內(nèi)測(cè)定吸光度。表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)2.8 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)取3號(hào)

10、樣品1 ml于25 ml，再加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00, 2.00, 3.00, 4.00 ml，按2.5法顯色測(cè)定總黃酮含量，計(jì)算加標(biāo)回收率。結(jié)果見(jiàn)表3。表3 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略) 從表3可見(jiàn), 總黃酮含量在線形范圍(8.0048.00 g/ml)內(nèi)，回收率在99.38% 103.15%之間,平均回收率達(dá)到100.82%(RSD=1.59%)，表明該方法可以作為荔枝核中抗乙肝成分黃酮類化合物含量的測(cè)定方法。2.9 荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物含量的測(cè)定荔枝核打成粉過(guò)40目的篩。平行取5 g荔枝核粉5份，加入50%的乙醇溶液100 ml，80回流提取兩次，第1次6 h，第2次4 h。合并兩次提

11、取液，提取液加入石油醚萃取除去酯類物質(zhì)。取一定體積的萃過(guò)液，稀釋至一定倍數(shù)。吸取稀釋液1 ml按上面的方法顯色，測(cè)定吸光度，通過(guò)回歸方程計(jì)算出稀釋液中總黃酮的濃度。荔枝核中總黃酮含量按下式計(jì)算：含量(%)=總黃酮的濃度25提取液的體積數(shù)稀釋倍數(shù) 荔枝核原料的質(zhì)量100%表4是5次平行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。從表中可以看到荔枝核中抗乙肝成分黃酮類化合物的平均含量為7.13%，RSD=2.39%（n=5）。表4 荔枝核黃酮類化合物含量(略)3 討論3.1 采用紫外分光光度法測(cè)定荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量具有快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。3.2 提取液顯色前用石油醚萃取掉脂類物質(zhì)和色素，減少了干擾，使含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性更高，重現(xiàn)性更好。3.3 荔枝核抗乙肝成分黃酮類化合物的含量測(cè)定顯示黃酮類化合物的含量較高，可以作為新的抗乙肝藥物成分來(lái)源開發(fā)利用。參考文獻(xiàn)：1 潘競(jìng)鏘, 郭潔文, 韓 超,等.荔枝核的藥理實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)新藥雜志，2000，9（1）：14.2 肖柳英，潘競(jìng)鏘, 饒衛(wèi)農(nóng)，等.荔枝核對(duì)小鼠免疫性肝炎的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)新醫(yī)藥，2004，3（6）：7.3 徐 慶，宋蕓娟，陳全斌，等.荔枝核黃酮類化合物對(duì) HepG2215細(xì)胞系 HBsAg與 HBeAg表達(dá)及HV-DNA含量的影響J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，25（20）：1862.4 王仲英，李香蘭.