新生兒促甲狀腺素定量檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附法)說(shuō)明書(shū)

1、新生兒促甲狀腺素定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）說(shuō)明書(shū)目錄 產(chǎn)品名稱 包裝規(guī)格 預(yù)期用途 檢驗(yàn)原理 主要組成成分 儲(chǔ)存條件及有效期 適用儀器 樣本要求 檢驗(yàn)方法 參考值（參考范圍） 檢驗(yàn)結(jié)果的解釋 檢驗(yàn)方法的局限性 產(chǎn)品性能指標(biāo) 注意事項(xiàng) 參考文獻(xiàn) 生產(chǎn)企業(yè) 醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證編號(hào) 醫(yī)療器械注冊(cè)證書(shū)編號(hào) 產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào) 說(shuō)明書(shū)批準(zhǔn)及修改日期產(chǎn)品名稱通用名：促甲狀腺素定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）英文名稱：TSH ELISA Kit包裝規(guī)格96人份/盒 480人份/盒 預(yù)期用途用于定量檢測(cè)采集在S&S 903# 濾紙上的新生兒血樣本中促甲狀腺素（TSH）的濃度，適用于新生兒甲狀腺功能

2、低下的篩查。促甲狀腺素（TSH）是由垂體前葉分泌的一種糖蛋白，是調(diào)節(jié)甲狀腺功能活動(dòng)的主要激素。主要作用是促進(jìn)甲狀腺激素的合成與分泌。TSH受下丘腦分泌的促甲狀腺素釋放激素（TRH）控制，還受甲狀腺素（T3、T4）的影響，即負(fù)反饋?zhàn)饔?。血液中甲狀腺素濃度升高時(shí)，下丘腦減少TRH 的釋放，垂體分泌的TSH減少，甲狀腺素的釋放也隨之減少。血液中TSH的正常濃度很低，卻維持著甲狀腺的正常功能。在我國(guó)，甲狀腺功能低下的發(fā)病率約1/3000左右。主要發(fā)病原因有先天性甲狀腺發(fā)育異常，先天性甲狀腺激素合成障礙，TSH不足或孕婦服用抗甲狀腺的藥物等造成。通過(guò)篩查及時(shí)發(fā)現(xiàn)、早期診斷、適當(dāng)治療，即可避免發(fā)生智力損傷

3、。在新生兒甲狀腺功能低下的篩查方面，檢測(cè)TSH水平被認(rèn)為是較靈敏的、可行的方法。但在甲狀腺功能低下的確診中同時(shí)還需要做其它試驗(yàn)，如血清T3、T4、TSH等。 檢驗(yàn)原理 96孔微孔板包被抗-hTSH-抗體，與被分析物中的TSH抗原位點(diǎn)結(jié)合，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗-hTSH抗體與抗原的其他位點(diǎn)結(jié)合，形成“三明治”的抗原抗體復(fù)合物，催化底物TMB轉(zhuǎn)化成藍(lán)色的物質(zhì)，終止后呈黃色，在波長(zhǎng)450nm處有吸收峰，顏色的深淺與樣品中TSH抗原的濃度呈正比，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定最后產(chǎn)物的吸光度（OD值）。根據(jù)OD值，判斷反應(yīng)體系中被分析物的濃度。 主要組成成分 新生兒促甲狀腺素定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）組成表名稱9

4、6人份/盒480人份/盒包裝酶結(jié)合物(辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗hTSH抗體)12 ml /瓶60 ml /瓶白色塑料瓶或無(wú)色玻璃瓶終止液(2M H2SO4 )12 ml /瓶60 ml /瓶樣品緩沖液(Tris-HCl緩沖液)12ml/瓶60 ml /瓶濃縮洗液20（Tween 20）60ml/瓶300 ml /瓶底物A （檸檬酸鹽緩沖液） 10ml/瓶50 ml /瓶底物B (TMB)10ml/瓶50 ml /瓶棕色塑料瓶或玻璃瓶96孔包被板（包被抗-hTSH-抗體） 1塊 5塊鋁箔袋TSH標(biāo)準(zhǔn)血片AF(0、5、10、25、60、150µU/ml)*1份5份鋁箔袋質(zhì)控血片C1、C21

5、份5份蓋膜2張 10張說(shuō)明書(shū) 1份 注*：標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品的濃度若有改變，將在試劑盒內(nèi)放通知單，同時(shí)電話通知。 儲(chǔ)存條件及有效期 儲(chǔ)存條件 28,防止冷凍。 有效期 12個(gè)月。試劑盒開(kāi)啟后可在28保存6周。適用儀器 酶標(biāo)儀。本說(shuō)明中的技術(shù)參數(shù)使用美國(guó)DYNEX公司生產(chǎn)的CB 372型酶標(biāo)儀。使用波長(zhǎng)450±10nm。 樣本要求按照衛(wèi)生部規(guī)定的“新生兒采血常規(guī)”采取足跟血。檢驗(yàn)方法1. 檢測(cè)前將試劑盒、樣本先放在室溫（1825）平衡；2. 濃縮洗液與蒸餾水1：20稀釋，稀釋后28可保存1個(gè)月；3. 打下直徑3mm標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本血片放入相應(yīng)的微孔中；4. 每孔加樣品緩沖液100

6、81;l，充分混勻，蓋膜后放入4孵育1820小時(shí)；5. 洗板棄去包被板中孵育的混合物在吸水紙上拍干。每孔加洗液350µl，洗板之間浸泡約10秒或振蕩5秒，棄去，重復(fù)上述操作5次，洗完后在吸水紙上拍干直至沒(méi)有潮氣。6. 每孔加酶結(jié)合物100µl，混勻，蓋膜，37孵育1小時(shí)后重復(fù)洗板程序。7. 每孔加底物混合液100µl（底物A和底物B在使用前1560分鐘等體積混合在一起,避光待用），蓋膜后放入37孵育15分鐘。 8. 每孔加終止液100µl混勻，終止反應(yīng)。在30分鐘內(nèi)讀取OD值，酶標(biāo)儀波長(zhǎng)使用450nm。結(jié)果計(jì)算1. 手工計(jì)算： 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本平

7、均OD值。 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用標(biāo)準(zhǔn)品的OD值與其相對(duì)應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。OD值為縱軸（Y 軸），濃度為橫軸（X軸）。 樣品的TSH濃度：首先在Y 軸上查找樣品對(duì)應(yīng)的OD值，橫向延伸至標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)曲線上的點(diǎn)拉垂直線與X軸相交，得出TSH濃度值。2. 利用酶標(biāo)儀所帶的軟件，自動(dòng)計(jì)算樣品濃度值。3. 計(jì)算公式：Lin-Lin或 Log-Log參考值（參考范圍）參考值 10.8µU/ml（97.5百分位數(shù)）。對(duì)696例正常新生兒血斑樣品檢測(cè)促甲狀腺素并統(tǒng)計(jì)頻數(shù)分布，見(jiàn)圖1。圖1 696例正常新生兒血斑樣品的TSH含量分布圖每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的正常參考值范圍。注：本試劑盒得出的結(jié)果為血

8、清值（全血值血清值÷2.22）。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋a) 質(zhì)控品的結(jié)果必須控制在要求范圍之內(nèi)，否則實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合可接受范圍視為無(wú)效。b) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅僅是患者臨床的一個(gè)部分，只有與所有的臨床診斷吻合，才能做出最終診斷。c) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能單獨(dú)決定患者的治療。 檢驗(yàn)方法的局限性a) 出生后72小時(shí)采血，避免因生理性增高而產(chǎn)生假陽(yáng)性。 b) 含疊氮納化物不能用于酶反應(yīng)。產(chǎn)品性能指標(biāo)1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍 0150U/ml（非精確值，以實(shí)際試劑盒內(nèi)標(biāo)定值為準(zhǔn)），R值0.99。2. 批內(nèi)精密度：CV不大于15 %3. 批間精密度：CV不大于20 %4. 準(zhǔn)確性：回收率為851195. 靈敏度：最低可

9、檢出限小于2.2µU/ml 6. 特異性：與HCG、LH、FSH無(wú)交叉反應(yīng)，TSH表觀濃度5µU/ml注意事項(xiàng)1. 不同批號(hào)的試劑不可混用；超出有效期的試劑不可使用。僅用于體外診斷。2. 避免接觸終止液(0.5M H2SO4)，以免皮膚腐蝕和燒傷。3. 自備實(shí)驗(yàn)材料：酶標(biāo)儀、雙蒸水、移液器、移液槽及吸頭、吸水紙、一次性手套。4. 所有試劑、樣本應(yīng)視為有潛在的生物危害，實(shí)驗(yàn)結(jié)束應(yīng)采用高壓、消毒液等浸泡處理。參考文獻(xiàn) 衛(wèi)生部衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)新生兒疾病技術(shù)規(guī)范的通知，附件2。 黃雨三主編新生兒疾病篩查與臨床診斷治療技術(shù)操作規(guī)范全書(shū)2005，2：111-119 Travis, J.

10、C., et al.1979.Methods of Quality Control and Clinical Evaluation of a Commercial Thyroxin and Thyrotropin Assay for Use in Neonates. Clinical Chemistry. 25:735. F.Delange, 1998. Screening for Congenital Hypothyroidism Used as an Indicator of the Degree of Iodine Deficiency and of its Control. Thyroid Vol.8: No.12.生產(chǎn)企業(yè)企業(yè)名稱：北京協(xié)和洛克生物技術(shù)研究開(kāi)發(fā)中心地址：北京市海淀區(qū)恩濟(jì)莊18號(hào)院4-2-302郵政編碼：100036電話：01051295656 傳真：0108814069