擬黑多刺蟻論文擬黑多刺蟻 乙酰膽堿酯酶 RACE 實(shí)時定量RT-PCR

1、 擬黑多刺蟻論文：擬黑多刺蟻acetylcholinesterase基因的克隆mRNA水平表達(dá)及其與發(fā)育相關(guān)性研究【中文摘要】乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase, AChE, EC 3.1.1.7)在生物體內(nèi)能特異性催化乙酰膽堿,終止神經(jīng)遞質(zhì)對突觸后膜的刺激作用,保證信號在生物體內(nèi)的正常傳遞。隨著研究的深入,越來越多的證據(jù)表明乙酰膽堿酯酶有著更為廣泛的生理作用,如在非神經(jīng)細(xì)胞中參與細(xì)胞的增殖、分化、細(xì)胞骨架的形成、促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞突觸的生長、促進(jìn)血小板和血細(xì)胞的生成、參與細(xì)胞凋亡等。乙酰膽堿能神經(jīng)元、神經(jīng)纖維的減少與多種病變性疾病引起的認(rèn)知障礙也有關(guān)系。擬黑多刺蟻隸屬于膜翅目(

2、Hymenoptera),蟻科(Formicidae),多刺蟻屬(Polyrhachis),是一種典型的社會性昆蟲,其群體具有多態(tài)現(xiàn)象,品級分化為工蟻、雌蟻和雄蟻,行為復(fù)雜、分工明確,因此它具有社會性的特征,具有高度復(fù)雜的神經(jīng)系統(tǒng),是研究昆蟲發(fā)育、行為調(diào)控和神經(jīng)功能方面很好的實(shí)驗(yàn)材料。本實(shí)驗(yàn)以擬黑多刺蟻為實(shí)驗(yàn)材料,采用RT-PCR,5與3RACE技術(shù),克隆了ace的全長cDNA序列,利用生物信息學(xué)方法對其進(jìn)行了序列分析、進(jìn)化關(guān)系分析和功能預(yù)測；應(yīng)用實(shí)時定量PCR技術(shù)對ace在擬黑多刺蟻體內(nèi)的mRNA水平表達(dá)進(jìn)行了相對定量。所獲實(shí)驗(yàn)結(jié).【英文摘要】The functions of Acetylc

3、holinesterase include the differentiation, migration and formation of synapses in nerve cells, proliferation and differentiation in hematopoiesis, as well as growth regulation in tumorigenesis. Usually the neurotransmitter acetylcholine (ACh) can be hydrolyzed by Acetylcholinesterase (AChE, EC 3.1.1

4、.7) and terminating neural excitement at postsynaptic membranes. The decrease in acetylcholine neurons and nerve fibers are related to cognitive impairment caused by variety of diseases.【關(guān)鍵詞】擬黑多刺蟻 乙酰膽堿酯酶 RACE 實(shí)時定量RT-PCR【英文關(guān)鍵詞】Polyrhacis vicina Roger acetylcholinesterase RACE Real-time quantitative R

5、T-PCR【索購全文】聯(lián)系Q1：138113721 Q2：139938848 同時提供論文寫作一對一輔導(dǎo)和論文發(fā)表服務(wù).保過包發(fā)【目錄】擬黑多刺蟻acetylcholinesterase基因的克隆mRNA水平表達(dá)及其與發(fā)育相關(guān)性研究摘要3-5Abstract5-6第一章 前言10-181.1 乙酰膽堿酯酶簡述101.2 乙酰膽堿酯酶在動物體內(nèi)的分布10-111.3 乙酰膽堿酯酶的功能11-131.4 乙酰膽堿酯酶的分子結(jié)構(gòu)13-141.5 乙酰膽堿酯酶的編碼基因14-151.6 擬黑多刺蟻簡述15-161.7 研究目的和意義16-171.8 研究目標(biāo)和整體路線17-18第二章 擬黑多刺蟻Pv-

6、ace基因cDNA序列的克隆18-392.1 材料18-202.1.1 動物材料182.1.2 儀器設(shè)備182.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑18-192.1.4 常用溶液配置192.1.5 瓊脂糖凝膠的制備19-202.2 方法20-332.2.1 RNA的提取與鑒定20-212.2.2 第一鏈cDNA的合成21-222.2.3 引物設(shè)計(jì)與合成22-232.2.4 擬黑多刺蟻Pv-ace基因全長序列擴(kuò)增23-272.2.5 擬黑多刺蟻Pv-ace cDNA序列5端的擴(kuò)增(5RACE)27-312.2.6 擬黑多刺蟻Pv-ace cDNA序列3端的擴(kuò)增(3RACE)31-322.2.7 序列的拼接32-

7、332.3 結(jié)果與分析33-392.3.1 總RNA的提取332.3.2 擬黑多刺蟻Pv-ace基因全長cDNA序列的擴(kuò)增33-352.3.3 擬黑多刺蟻Pv-acecDNA序列開放閱讀框分析35-39第三章 擬黑多刺蟻Pv-AChE蛋白序列的生物信息學(xué)分析39-503.1 分析方法與結(jié)果39-503.1.1 蛋白序列的同源性分析39-403.1.2 蛋白序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析40-423.1.3 蛋白質(zhì)的保守結(jié)構(gòu)域分析423.1.4 蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析42-453.1.5 疏水性分析453.1.6 信號肽分析45-473.1.7 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)分析47-483.1.8 蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)分析48-5

8、0第4章 熒光實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測擬黑多刺蟻Pv-ace基因mRNA水平表達(dá)50-604.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法504.1.1 生物材料504.1.2 主要試劑與儀器504.2 實(shí)驗(yàn)方法50-534.2.1 總RNA的提取及第一鏈cDNA的制備50-514.2.2 引物設(shè)計(jì)514.2.3 模板及引物質(zhì)量檢測51-524.2.4 SYBRGreen實(shí)時定量PCR實(shí)驗(yàn)52-534.2.5 數(shù)據(jù)分析方法534.3 結(jié)果與分析53-604.3.1 引物的專一性檢測53-554.3.2 模板質(zhì)量的檢測55-564.3.3 擬黑多刺蟻不同品級、不同發(fā)育階段蟲體Pv-ace mRNA的相對表達(dá)56-60第五章 討論60-645.1 關(guān)于RNA的提取605