高效液相色譜法測(cè)定半邊旗中木犀草素的含量

1、高效液相色譜法測(cè)定半邊旗中木犀草素的含量              作者：呂應(yīng)年 吳科鋒, 鄧亦峰, 梁念慈    【關(guān)鍵詞】  高效液相色譜；半邊旗；黃酮；木犀草素摘要：目的建立草藥半邊旗中木犀草素含量的準(zhǔn)確測(cè)定方法，并測(cè)定不同采收期半邊旗中木犀草素的含量。 方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Diamonsil C18，流動(dòng)相為甲醇水梯度洗脫，流速0.2 mlmin1，檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm，柱溫度35。結(jié)果木犀草素進(jìn)樣量在0.0620

2、.62 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.998 7），平均回收率為99.5(RSD=1.98%)。 結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)論可靠，可用于半邊旗草藥的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞： 高效液相色譜；  半邊旗；  黃酮；  木犀草素Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for content determination of luteolin from PSL.MethodsThe separation was performed on a Diamonsil C18 column, the mobile phase was

3、  run with a mixture of methanol(B) and water(A) with a linear gradient elution at a flow rate of 0.2 mlmin1, the ultraviolet wavelength was 283 nm, and the column temperature was maintained at 35. ResultsThe calibration curve showed good linearity in the range of 0.0620.62 g（R2=0.998 7）, the a

4、verage recovery was 99.5%(RSD=1.98%). ConclusionThe method is simple, convenient and accurate and can be used for the quality control of PSL.Key words：HPLC;  Pteris Semipinnata;  Flavonoid;  Luteolin   半邊旗Psteris   semipinnata L.又名半邊蕨、半邊蓮、單邊旗，系鳳尾蕨科植物，是一種南方常用生藥，始載于嶺

5、南采藥錄，稱半邊旗。有止血、生肌、解毒、消腫之功效，民間用于吐血、外傷出血、發(fā)背、疔瘡、跌打損傷、目赤腫痛等1。現(xiàn)代研究表明，半邊旗中含有揮發(fā)油、萜類、黃酮、皂苷等多種物質(zhì)2。有關(guān)半邊旗的藥效成分研究主要集中在萜類化合物3，4。關(guān)于半邊旗中黃酮類物質(zhì)藥學(xué)研究尚未見報(bào)道。本課題組曾用分光光度法測(cè)定半邊旗黃酮的含量5，但該法主要用于植物提取物總黃酮的含量測(cè)定，不適合于對(duì)黃酮單體的分析。本文采用高效液相色譜對(duì)半邊旗的黃酮單體木犀草素進(jìn)行研究，建立了半邊旗中木犀草素含量的測(cè)定方法，并測(cè)定不同采取收期半邊旗的黃酮單體木犀草素進(jìn)行研究，并測(cè)定不同采收期半邊旗中木犀草素的含量，為植物半邊旗的廣泛開發(fā)利用奠定

6、基礎(chǔ)。1  儀器與試劑1.1  儀器島津 LC10A高效液相色譜儀（LC10ATVP泵，SCL10AVP控制器，SPD10 AVP紫外檢測(cè)器，CTO10AVP柱溫箱），梅特勒 AE240型分析天平。1.2  木犀草素對(duì)照品購于天津尖峰天然產(chǎn)物研究開發(fā)公司。1.3  半邊旗草藥采收于廣東湛江郊區(qū)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)茍占平博士鑒定為半邊旗全草。2  方法和結(jié)果2.1  色譜條件色譜柱Diamonsil C18 (150 mm×4.6 mm，5 )；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm；流動(dòng)相為甲醇水溶液， 0%100梯度洗脫；流速0.2 ml

7、min1；柱溫為35。2.2  溶液的制備2.2.1  對(duì)照品溶液的配制精密稱取木犀草素對(duì)照品0.00124 g，置10 ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.124 gL1 的木犀草素對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取儲(chǔ)備液0.1，0.3，0. 5，0.7，1.0 ml，分別加入甲醇定容至1.0 ml，搖勻，即得含木犀草素對(duì)照品溶液。2.2.2  供試品溶液的配制按文獻(xiàn)5的方法制備半邊旗提取物，稱取半邊旗提取物約5 g，先后加氯仿、醋酸乙酯索氏提取至無色，蒸干醋酸乙酯提取液得半邊旗黃酮，精密稱取半邊旗黃酮約100 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇

8、超聲使溶解，定容至刻度，搖勻。經(jīng)0.45 m微孔濾膜過濾，即得。2.3   系統(tǒng)適應(yīng)性及專屬性實(shí)驗(yàn)分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 l進(jìn)樣色譜儀，記錄色譜圖如圖1。在上述色譜條件下木犀草素出峰時(shí)間28 min，供試品在木犀草素峰相應(yīng)位置有一顯著峰。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法能使半邊旗黃酮較好分離，色譜系統(tǒng)的適應(yīng)性及專屬性良好。         a木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品   b半邊旗黃酮供試品圖1  色譜圖（略）2.4  線性關(guān)系的考察分別精密量取上述對(duì)照品溶液各5 l進(jìn)樣

9、，以色譜峰面積（Y）對(duì)質(zhì)量（X）進(jìn)行回歸，木犀草素的線性回歸方程為Y=408 058X，R2=0.998   7，線性范圍為0.0620.62 g。2.5  精密度實(shí)驗(yàn)取對(duì)照品儲(chǔ)備液5 l，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得木犀草素峰面積RSD均為0.84%，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。2.6  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試樣品溶液5 l，分別在0，3，6，12，16 h進(jìn)樣，測(cè)定木犀草素的峰面積RSD為1.34%，表明樣品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。2.7  重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批半邊旗草藥，按供試品制備方法配制6份，分別進(jìn)樣5 l，測(cè)定木犀草素的含量RSD為1.64%，表明該方法的

10、重現(xiàn)性較好。2.8  加樣回收率實(shí)驗(yàn)取同一供試品5份，分別加入木犀草素對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備樣品，進(jìn)樣5l，計(jì)算得回收率分別為99.5%，RSD 1.98%。結(jié)果見表1。2.9  樣品含量測(cè)定取不同采收期的半邊旗全草，按供試品制備方法制成樣品溶液，各取5 l進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，由線性方程計(jì)算得木犀草素的含量見表2，對(duì)照品及供試品色譜圖見圖2。表1  木犀草素的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表2  半邊旗草藥中木犀草素含量測(cè)定（略）圖2  木犀草素標(biāo)準(zhǔn)曲線（略）1  謝宗萬，余有芩. 全國(guó)中草藥名鑒（上冊(cè)）M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1

11、996：53.2  Maurakami T, Tanaka N. Occurrence, structure and taxonomic applications of ferm constituentsJ. Prog Chem Organic Nat Prod, 1988:54.3  張  曉,崔  燎，梁念慈,等. 半邊旗有效成分抗腫瘤活性研究J.中國(guó)藥學(xué)雜志，1997，32（1）：37.4  Li JH, Cui L. Effects of antitum or compounds is isolated from Pteris semipinnata L on DNA topoisomerases and cell cycle of HL-60 cellsJ.Acta Phamacol Sin, 1999,20(6)：541.5  傅玉萍，茍占平，胡菊英,等.分光光度法測(cè)定不同時(shí)期半邊旗總黃酮含量J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2001，12（12）：108