葛根總黃酮和葛根素的純化工藝研究

1、2. 1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇精密稱取注射用 FB 適量 , 加蒸餾水溶解并定量稀釋成 8mg m L -1的溶液 , 得 貯備液。量取適量貯備液加蒸餾水定容 , 得 16L g mL -1的溶液 , 在 200nm 400nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃 描 , 結(jié)果 FB 在 270nm 處有最大吸收。 在此波長(zhǎng)處 , 10% GS 、 5%GNS 、 NS 、 Ringer's 幾無(wú) 吸收 , 不 干擾測(cè) 定。 因此確定 270nm 為注射用 FB 的測(cè)定波長(zhǎng)。2. 2 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 的 制 備 精 密 稱 取 注 射 用 FB0. 2000g 置 25mL 容量瓶中 , 加蒸餾水溶解 并稀 釋至刻

2、度 , 搖勻 , 得貯備液 (8m g mL -1 精密吸取貯 備液 0. 05、 0. 1、 0. 15、 0. 2、 0. 25mL 分別至 50mL 容 量瓶中加蒸餾水稀釋到刻度 , 搖勻 , 得系列濃度的標(biāo) 準(zhǔn)液 (8, 16, 24, 32, 40L g mL -1 以蒸餾水為空 白 , 在 270nm 處測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)液的吸收度 (A , 以吸收度 (A 為縱坐標(biāo) , 濃度 (C 為橫坐標(biāo)得標(biāo)準(zhǔn)曲線 , 求得 回歸方程為 A=0. 0375C-0. 0286, r =0. 9997。 結(jié)果 顯示 , 注射用 FB 濃度在 840L g L -1范圍內(nèi)有良 好的線性關(guān)系 , 可進(jìn)行含量測(cè)

3、定。2. 3精密度實(shí)驗(yàn)取 FB 濃度分別為 8, 24, 40L g L -1的標(biāo)準(zhǔn)液 , 在同日內(nèi)重復(fù)測(cè)定 4次 , 每次間隔 2h, 3種濃度的 RSD 分別為 0. 76%、 0. 754%、 0. 677%。 2. 4回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取注射用 FB 0. 2000g 各 4份置 25mL 容量瓶中 , 分別加入 10%GS 、 5%GS 、 NS 、 Ring er's 注射液配制成濃度為 8mg mL -1的樣 品 , 精密量取各樣品 0. 1mL 至 25mL 容量瓶中用蒸 餾水稀釋到刻度得濃度為 32L g L -1的待測(cè)液。同 前法測(cè)定各自的含量 3次并計(jì)算其平均回收率

4、 , 平 均 回 收 率 依 次 為 99. 4%; 101. 94%; 100. 24%; 100. 80%。 2. 5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)2. 5. 1 含量 及 紫 外 吸 收光 譜 :精 密 稱 取 注 射 用 FB0. 2000g 各 4份 置 25m L 容 量 瓶 中 , 分 別 加 入 10%GS 、 5%GS 、 NS 、 Ringer's 注射 液配制成濃度為 8m g mL -1的樣品 , 將 4種樣品置 25恒溫箱中放 置。于 0, 2, 4, 6h 后各精密量取適量 , 用蒸餾水稀釋 至 32mg L -1同前法測(cè)定各樣品稀釋液的含量。在 含量測(cè)定的同時(shí)掃描各配伍液的紫

5、外吸收?qǐng)D譜 , UV 波譜形狀無(wú)變化 , 未見其他吸收峰 , 表明無(wú)新的物質(zhì) 生成。 以 0h 注射用 FB 含量為 100%, 計(jì)算各樣品在 不同時(shí)間的相對(duì)百分含量。結(jié)果 (見表 1 。2. 5. 2 pH 值及外觀的變化在 25條件下 , 于 0、 2、 4、 6h 觀察各組配伍液外觀變化 , 并測(cè)定其 pH 值 , 結(jié)果上述條件下 , 06h 內(nèi) , 配伍液外觀均為無(wú)色澄 明 , pH 變化 (見表 1 。表 1 FB 與 4種常見輸液配伍后 6h 內(nèi)的含量及 pH 變化表 (n=3 輸液名稱0h 2h 4h 6h含量 %pH 含量 %pH 含量 %pH 含量 %pH 10%GS 100

6、5. 07100. 374. 9999. 074. 9399. 074. 94 5%GS 1004. 87101. 074. 77100. 114. 7296. 204. 70 NS 1004. 891004. 9099. 854. 82100. 034. 81 Ringer's 1004. 8799. 584. 8696. 734. 7997. 604. 78 3小結(jié)本實(shí)驗(yàn)在 25下考察呋布西林鈉與 4種常見輸 液的配伍穩(wěn)定性 , 在 6h 內(nèi) , 配伍液的外觀、 pH 值以 及含量無(wú)明顯變化 , 用紫外分光光度法測(cè)定呋布西 林鈉 的含量 , 其測(cè) 定結(jié)果不受輸 液的干擾 , 回 收

7、完 全 , 操作簡(jiǎn)便 , 結(jié)果可靠。故臨床可配伍作用。 參考文獻(xiàn) 1 董曄 . 中國(guó)藥品實(shí)用手冊(cè) M . 第一版 , 北京 :中國(guó)醫(yī)藥科技出版 社 , 1999, 10.葛 根 總 黃 酮 和 葛 根 素 的 純 化 工 藝 研 究陳幸苗 , 楊中林 *(中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院 南京 210038摘要 :目的 研究葛根總黃酮和葛根素的純化工藝。 方法 以葛根總黃酮和葛根素為指標(biāo) , 對(duì)萃取 法、 鹽析法、 活性炭吸附法以及大孔樹脂吸 附法四種純化方法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià) , 并對(duì)大孔樹脂吸附法進(jìn)行了工藝優(yōu)化。 結(jié)果 四種純化方法中 , 大孔樹脂吸附法效果最佳。非極性大孔樹脂 更加有利于葛根總黃酮及葛根素

8、的純化 , 且以 HPD 300最佳。 結(jié)論 HPD 300樹脂吸附純化時(shí) , 以上樣液濃度 1g ·mL -1(相當(dāng)于原生藥 , 20%乙醇洗脫效果最佳 , 其中葛根總黃酮可達(dá) 90%以上 , 葛根素純度可達(dá) 50%以上 , 能滿足大工業(yè)生產(chǎn)的要求。關(guān)鍵詞 :純化 ; 葛根總黃酮 ; 葛根素 ; 大孔樹脂中圖分類號(hào) :TQ460. 4; R931. 71文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 :A 文章編號(hào) :1006-3765(200602-0024-04作者簡(jiǎn)介 :陳幸苗 , 女 (1983- 。中國(guó)藥科大學(xué) 2003級(jí)碩士研究生。通訊作者 :楊中林 , 女 (1950- 。聯(lián)系電話 :025-85322

9、508海峽藥學(xué) 2006年第 18卷 第 2期Studies on Purifyin g Process of R adix Pu erariaeCH E N Xing -m iao , YAN G Zh ong -lin (TCM departm ent of Chi n a P harm aceu tical U n iversity , N an ji n g , 210038; Ch in a ABSTR ACT :OBJECTIVE T o study the proper process for purifying Pueraria isoflavones and puerarin

10、. METHODS With the content of the total isoflavones and puerarin as detective markers, the process was studied by com paring 4purification methods, and optimizing purification w ith macroporous resin. RESULTS Purification w ith macroporous resin is better than other m ethods, and the HPD300is the be

11、st choice for purify ing Pueraria isoflavones and puerarin. CONC LUSION When using HPD300w ith the flavones content in the liquid is 1. 0g per 1ml(equivalem t to raw material and 20%ethanol as eluant, the total flavones' purity could reach 90%and the puerarin's purity could reach 50%.Therefo

12、re, the process can meet the industrial requirements.KEY WOR DS :P urification; T otal flavone; P uerar in; M acro por ous resin葛根是一味常用中藥 , 為豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd. Ohw i 的干燥根 , 主要成分為葛根素、 大豆素、 大豆苷等異黃酮化合物。 對(duì)于葛根總黃酮的 純化 , 本實(shí)驗(yàn)比較了工業(yè)生產(chǎn)上常用的液液萃取法、 鹽析法、 活性炭脫色 法、 大孔樹脂 吸附法這四 種方 法 ; 通過靜態(tài)吸附 , 動(dòng)態(tài)吸附法篩選了最適合葛

13、根純 化的大孔樹脂型號(hào) ; 并對(duì)樹脂吸附法的一些基本工 藝參數(shù)進(jìn)行了探討。1儀器與試藥752型紫外分光光度計(jì) (上海第三分析儀器廠 , H 66M C 超聲發(fā)生儀 (無(wú)錫電子儀器廠 , 高效液相色 譜儀 (Agilent 1100series , 葛根素對(duì)照品 (中國(guó)藥品 生物 制 品檢 定 所 , 95%乙 醇 (AR, 南 京 化學(xué) 試 劑 廠 , 野葛藥材 購(gòu)自南京同仁堂藥材公司 , 經(jīng)中國(guó)藥 科 大學(xué)楊中林教授鑒定為 Pueraria lobata (Willd. Ohw i 的根 。 大孔樹脂 (D 系列購(gòu)自天津海光化工有 限公司 , AB-8購(gòu)自天津南開大學(xué)化工廠 , HPD 系列

14、 購(gòu)自河北滄州寶恩化工有限公司 。2方法和結(jié)果2. 1葛根總異黃酮含量的測(cè)定2. 1. 1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 :分別吸取葛 根素對(duì)照品 醇溶液 適量 , 置于 10mL 容量 瓶中 , 加 95%乙 醇至 2mL, 再加蒸餾水稀釋至刻度 , 以 2mL95%乙醇加水 至 10mL 作空白對(duì) 照 , 根據(jù) 以往 文獻(xiàn) , 在 240nm 260nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外測(cè)定。 結(jié)果在 248nm 波 長(zhǎng)處有最大吸收 , 故選擇 248nm 為測(cè)定波長(zhǎng)。 2. 1. 2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 :精密稱取葛 根素對(duì)照品 4. 04mg , 置 50mL 容量瓶中 , 加 95%乙醇溶解并稀 釋至刻度 , 搖勻。精

15、密吸取 0. 2、 0. 4、 0. 6、 0. 8、 1. 0、 1. 2、 1. 4、 1. 6mL 分 別 置于 10mL 容 量瓶 中 , 各 加 95%乙 醇 至 2mL, 再 加 蒸 餾 水 定 容 , 搖 勻。 以 2m L95%乙 醇 加 蒸 餾 水 至 10mL 作 空 白 對(duì) 照 , 在 248nm 波 長(zhǎng) 處 測(cè) 定 吸 收 度 , 得 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 :A = 70. 522C +0. 0196; r =0. 9998, 線性范圍 :0. 0016mg mL -10. 0128mg mL -1。2. 1. 3穩(wěn)定 性考察 :對(duì)同一樣品 溶液分別在 2h 、 6h 、 8

16、h 、 10h 、 12h 、 24h 測(cè) 定 吸 收 度 , 結(jié) 果 RSD = 0. 53%, 表明樣品溶液在 24h 內(nèi)穩(wěn)定。2. 1. 4精密度試驗(yàn) :對(duì)同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液平行測(cè)定 5次 , RSD =0. 45%, 采用本定量分析方法 , 精密度良 好。2. 1. 5重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) :準(zhǔn)確稱取同一樣品 , 平行操作 5次 , RSD=1. 45%, 采用本定量分析方法 , 檢測(cè)結(jié)果 具有良好的重現(xiàn)性。2. 1. 6加樣 回收率試驗(yàn) :精密吸 取同一供試品 9份 , 分 3個(gè)水平添加葛根素對(duì)照品溶液 , 每個(gè)水平重 復(fù) 3次。按照樣品溶液的測(cè)定方法試驗(yàn) , 測(cè)定透光 率 , 計(jì)算葛 根總 異黃

17、 酮含 量。結(jié) 果平 均回 收率 為 98. 2%。2. 1. 7固體樣品測(cè)定液的制備 :精密稱取各干燥 后 樣 品 粉 末 100mg 置 于 50m L 容 量 瓶 中 , 以 30mL95%乙醇溶解 , 超聲 60min 后 , 取出搖 勻后繼 續(xù)加 95%乙醇定容。 精密量取 1m L 置于 10mL 容量 瓶 中 , 以 95%乙 醇定 容 , 再?gòu)?中 量取 0. 4mL 置 于 10mL 容量瓶中 , 加 95%乙醇置 2m L , 再以蒸餾水定 容。2. 1. 8液體樣品測(cè)定液的制備 :把液體樣品定容 到 適當(dāng) 體積 , 過濾 , 棄去 初濾 液 , 精密 量取 續(xù)濾 液Str

18、ait Pharmaceutical Journal Vol 18No. 220061mL 置于 10m L 容量瓶中 , 以 95%乙醇定容 , 再?gòu)闹?量取 0. 4mL 置于 10mL 容量 瓶中 , 加 95%乙醇 至 2mL, 再以蒸餾水定容。2. 2葛根素的 HPLC 測(cè)定 12. 2. 1色 譜 條 件 :色 譜 柱 :Scienhome C 18(150×4. 6nm , 流 動(dòng) 相 :甲 醇 水 (25 75 , 檢 測(cè) 波 長(zhǎng) : 250nm , 流速 1. 0mL m in -1。以外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算。 2. 2. 2對(duì)照品溶液的制備 :精密稱取 葛根素對(duì)照 品 1

19、0. 02mg , 置 25mL 量瓶中 , 加 30%乙醇至刻度 , 搖勻 , 精密量取 2mL , 置 10mL 量瓶中 , 加 30%乙醇 至刻度 , 搖勻 , 即得 (每 1m L 中含葛根素約 80L g 。 2. 2. 3固體樣品待測(cè)液的制備及測(cè)定 :精密稱取 各干燥后樣品粉末 100mg 置于 50mL 容量瓶中 , 以 30m L 30%乙 醇溶解 , 超聲 30min 后 , 取出搖勻 后繼 續(xù)加 30%乙醇定容。 精密吸取 1m L 置于 10mL 容量 瓶中 , 以 30%乙醇定容 , 搖勻 , 微孔濾膜過濾 , 取續(xù)濾 液 , 即得樣品溶液。 分別精密吸取對(duì)照品溶液與樣

20、品 溶液各 10L L, 注入液相色譜儀 , 測(cè)定 , 即得。2. 2. 4液體樣品待液的制備及測(cè)定 :把液體樣品 定容到適當(dāng)體積 , 過濾 , 棄去初濾液 , 精密量取續(xù)濾 液 1mL , 置于 50mL 量瓶中 , 加 30%乙醇定容 至刻 度 , 搖勻 , 微孔濾膜過濾 , 取續(xù)濾液 , 即得液體樣品溶 液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與樣品溶液各 10L L, 注入液相色譜儀 , 測(cè)定 , 即得。2. 3大孔樹脂的預(yù)處理新購(gòu)大孔樹脂用 95%乙 醇浸泡 12h 充分溶脹后 , 加熱回流 2h , 除去乙醇后添 加 2倍量 50%乙醇回流 3次 , 濕法裝柱 , 用乙醇清洗 至流出液加水不混濁

21、為止 , 再用蒸餾水洗至澄清備 用。2. 4葛根的純化方法比較 葛根的純化主要有樹 脂吸附法、 鹽析法、 萃取法、 活性炭脫色法等方法。 葛 根樣品液的制備 :稱取葛根提取物一定量 , 加入 20倍量的蒸餾水超聲 30min 至充分溶解 , 搖勻后即得 樣 品溶液。其中葛根 總黃酮的 濃度為 21. 88mg mL -1, 葛根素的濃度為 10. 09mg mL -1。2. 4. 1正丁醇萃取法 :取 20m L 樣品溶液 , 加入水 飽和正丁醇 萃取 4次 , 每 次 50mL, 合并 , 回收 正丁 醇 , 殘?jiān)婵崭稍镏粮珊蠓Q重 , 按 2. 1. 7和 2. 2. 3項(xiàng) 下操作 , 結(jié)

22、果 (見表 1 。2. 4. 2鹽析法 2 :取 20mL 樣品溶液 , 加入 2g 氯化 鈉 , 攪拌后放入靜置 48h 后 , 析出沉淀 , 過濾 , 沉淀濾 出用少量水洗滌 后真空干燥至干后稱重 , 按 2. 1. 7 和 2. 2. 3項(xiàng)下操作 , 結(jié)果 (見表 1 。2. 4. 3 活性 炭脫 色法 :取 20mL 樣 品溶 液 , 加 入 0. 3%的活性炭 , 加熱活化 1h 后 , 過濾 , 濾液濃縮后 真空干燥至干后稱重 , 按 2. 1. 7和 2. 2. 3項(xiàng)下操作 , 結(jié)果 (見表 1 。2. 4. 4大孔樹脂吸附法 :稱取 10g 處理后大孔樹脂 D 101, 裝柱

23、, 取 20mL 樣品液吸附完畢后 , 先用少量 水洗至糖反應(yīng)陰性 , 再用 250mL50%乙醇洗脫 , 洗脫 液濃縮后真 空干燥至干后 稱重 , 按 2. 1. 7和 2. 2. 3項(xiàng)下操作 , 結(jié)果 (見表 1 。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 , 綜合各因素考慮 , 不管是總 黃酮還是葛 根素均以大孔樹 脂吸附法純化 效果最 佳 , 正丁醇萃取法次之。表 1不同方法純化后結(jié)果純化方法純化后總黃酮的純度(%純化后葛根素的純度(%總黃酮的收率 (%葛根素 的收率 (% 正丁醇萃取法 59. 7828. 9190. 2194. 61鹽析法 50. 1726. 4869. 2170. 35活性炭脫色法 47

24、. 9323. 5981. 8487. 38大孔樹脂吸附法 78. 3537. 7488. 5493. 45 2. 5大孔樹脂純化葛根中總黃酮和葛根素的工藝 研究2. 5. 1不同吸附樹脂對(duì)葛根異黃酮和葛根素的靜 態(tài)吸附量實(shí)驗(yàn) :將經(jīng)過預(yù)處理的 13種大孔樹脂去除 表面水后 , 各取 5g 分別置于具塞磨口三角瓶中 , 加 入上述葛根樣品液 20mL, 至搖床上振蕩 12h, 使樹 脂充分吸附后 , 吸取上層液按 2. 1. 7和 2. 2. 4項(xiàng)下 測(cè)定總黃酮及葛根素的濃度 , 并按下式計(jì)算樹脂飽 和吸附量 :飽和吸附量 (mg g -1樹脂 =(初始濃度 吸附后濃度 ×吸附液體積

25、 /樹脂量 , 結(jié)果 (見表 2 。2. 5. 2不同吸附樹脂對(duì)葛根異黃酮和葛根素的靜 態(tài)解吸附性能實(shí)驗(yàn) :將上述靜態(tài)吸附后樹脂濾出 , 吸 干表面水分 , 精密加入 50mL 體積分?jǐn)?shù) 70%乙醇至 搖床上振蕩 12h, 使異黃酮和葛根素充分解吸附 , 過 濾 , 測(cè)定濾液中異 黃酮和葛根素 的濃度 , 計(jì)算 解吸 率 , 結(jié)果 (見表 2 。 從上述結(jié)果我們可以看出 , 對(duì)于總黃酮和葛根 素 , 非 極 性樹 脂 顯 示出 較 好 的 吸附 性 能 , 其 中 以 HPD300、 HPD100、 HPD400、 AB-8、 D101、 HPD700綜合性能較佳。2. 5. 3動(dòng)態(tài) 吸附 :

26、取靜態(tài) 吸附優(yōu)選 的 6種樹 脂各 10g, 裝 入 2cm ×20cm 的 柱 內(nèi) , 加 入 葛 根 樣 品 液 50mL 進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附 , 收集流出液 , 同時(shí)用 20mL 蒸 海峽藥學(xué) 2006年第 18卷 第 2期餾水沖洗樹脂縫隙間未吸附的葛根樣品液 , 收集 , 按 和分別測(cè)定其中總黃酮及葛根素的含量 , 按下式計(jì) 算其動(dòng)態(tài)吸附飽和量 , 動(dòng)態(tài)飽和吸附量 (mg g -1樹 脂 =上樣液中總黃酮 (葛根素 的量泄漏液中總 黃酮 (葛根素 的量 /樹脂量 , 結(jié)果 (見表 3 。表 2不同型號(hào)樹脂靜態(tài)吸附結(jié)果樹脂型號(hào) 樹脂極性葛根素飽和吸附量(mg g -1樹脂 葛根素解吸

27、率(%酮飽和吸附量 -1樹脂 葛根總黃 酮解吸率 (%D101非極性 32. 0092. 6471. 6492. 03 DA201極性 22. 7888. 5052. 3390. 12 DM 301中極性 28. 2791. 1063. 7091. 58 DS 401弱極性 30. 9590. 1969. 1392. 43 AB -8非極性 32. 4992. 1672. 7290. 22 HPD100非極性 34. 6591. 1577. 4391. 78 HPD300非極性 38. 1294. 4180. 5990. 49 HPD400中極性 32. 5690. 2272. 0588. 8

28、4 HPD 450中極性 23. 2893. 4054. 1297. 10 HPD500極性 29. 0691. 2164. 5991. 17 HPD600極性 23. 6986. 6454. 3187. 68 HPD700非極性 31. 2391. 9970. 2093. 10 HPD750中極性 27. 5993. 7163. 6094. 51表 3 6種大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附結(jié)果樹脂型號(hào) 葛根素動(dòng)態(tài)飽和吸附量(m g g -1樹脂 葛根總黃酮?jiǎng)討B(tài)飽和吸附量 (mg g -1樹脂 HPD10032. 9472. 58 HPD30036. 6778. 50 HPD40032. 1569. 22HP

29、D 70025. 6956. 30AB-832. 7870. 46D10130. 5967. 42 動(dòng) 態(tài) 吸 附 結(jié) 果 顯 示 , 6種 大 孔 樹 脂 中 , 以 HPD300對(duì)葛根素及總黃酮吸附效果最佳。2. 5. 4上樣液 濃度的考察 :取 3份 處理好的 樹脂 HPD300各 10g, 分別裝入 2cm ×20cm 的柱內(nèi) , 取葛 根提取物 2. 5g , 分別定容于 10mL, 25mL, 50m L 容 量瓶中 , 超聲使其完全溶解 , 配成 1號(hào)、 2號(hào)及 3號(hào)樣 品。分別完全上樣 , 收集流出液 , 同時(shí)用 20mL 蒸餾 水沖洗 樹脂縫隙間未 吸附的葛根樣品

30、液 , 收集 , 按 2. 1. 8和 2. 2. 4項(xiàng)下分別測(cè)定其中總黃酮及葛根素 的含量 , 同上式計(jì)算飽和吸附量 , 并根據(jù)上樣液中葛 根素 及總黃酮含量換算成 原生藥濃度 , 結(jié)果 (見表 4 。表 4上樣液濃度考察結(jié)果上樣液濃度 (相當(dāng) 于原生藥 g mL -1 葛根素飽和吸附量(mg g -1樹脂 葛根總黃酮飽和吸附量 (mg g -1樹脂 2. 544. 2485. 401. 043. 7984. 870. 536. 6678. 49上樣液濃度越大 , 吸附效果越好 , 但是 1號(hào)樣品 液和 2號(hào)樣品液兩者的吸附能力差別很小 , 且在實(shí) 驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)配制 1號(hào)樣品液時(shí)很難全部溶解 , 故 在大工業(yè)生產(chǎn)中認(rèn)為 2號(hào)樣品的上樣液濃度為最佳 濃 度 (其中葛根總黃 酮的濃度為 43. 77m g mL -1, 葛根素的濃度為 20. 19mg mL -1 。2. 5. 5乙醇洗脫濃度考察 :取 7份葛根水溶液 (葛 根總黃酮的濃度為 43. 77m g mL -1, 葛根素的濃度 為 20. 19mg mL -1 各 10mL, 分別上樣于 7根處理 好的 2cm ×20cm 的 HPD300(10g 上 , 充分吸附后先