分離提取微生物

1、 生物科學(xué)1102 李超 2013.11.29 n在社會高速發(fā)展的今天環(huán)境污染已然成為一個我們必須面對的難題。例如芳香族化合物包括苯酚類及其衍生物和喹啉類等化合物，是工業(yè)廢水中的主要的污染物。工業(yè)含芳香族化合物的廢水大量排放給環(huán)境帶來了嚴(yán)重的污染,該類化合物是原型質(zhì)毒物,對一切生命個體都有毒害作用，其一旦進入人體,會引起人體的蛋白質(zhì)變性和凝固。有害于人類健康及生物的生長繁殖,并且影響經(jīng)濟的可持續(xù)性發(fā)展。那么，如何從自然界獲得這種能降解芳香族化合物的微生物？n 確定目的菌物n 特定環(huán)境采樣n 實驗室中培養(yǎng)n 篩選目標(biāo)菌落n 重復(fù)培養(yǎng)純化n 獲得目的細菌n確定目的菌物 首先確定你所要篩選的目的微生

2、物，本實驗我們要從自然界中篩選分離能降解苯酚等芳香族化合物，例如高效降酚菌株JY03、石油降解菌A10、石油降解菌 B-5、嗜鹽堿陳摶泛菌TJB5、苯酚降解菌ZJ-1、苯酚降解菌MW-1、苯酚降解菌NTZH-1、高效苯酚降解菌株XH-10等等。n特定環(huán)境采樣 特定環(huán)境中采樣，即要于可能存在此類微生物的環(huán)境中采集菌樣。苯酚類化合物是有機合成的重要原料,是造紙、煉焦、農(nóng)藥和醫(yī)藥合成等行業(yè)生產(chǎn)的原料或中間體,大量用于制造酚醛樹脂以及其他高分子材料、燃料等，所以可去煉油廠、造紙廠、醫(yī)藥廠等排放工業(yè)廢水的環(huán)境中采集。本實驗可于該環(huán)境中采取部分土樣。n實驗室中培養(yǎng) 采好菌物樣品，拿回實驗室，稱取適量土樣，

3、加水，靜置一定時間后再培養(yǎng)。首先進行擴大培養(yǎng)，就是把樣品中所有的微生物都培養(yǎng)增殖，以獲得更多的數(shù)量的細菌。一般就用全營養(yǎng)培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。n篩選目標(biāo)菌落 增殖結(jié)束后，取上清液稀釋至不同倍數(shù)后，做平板單細胞培養(yǎng)。取合適梯度涂平板，按照自己要分離的菌選擇培養(yǎng)基。本實驗利用選擇性培養(yǎng)基（selected media），以芳香族化合物如苯酚作為唯一碳源和能源物質(zhì)進行篩選，即只有目標(biāo)菌體才能利用該培養(yǎng)基中的能源物質(zhì)。經(jīng)過培養(yǎng)之后在培養(yǎng)基上找出生長旺盛的目標(biāo)菌落。n重復(fù)培養(yǎng)純化 在獲得少量的生長良好的目標(biāo)菌落后，多次重復(fù)以上步驟，進行再培養(yǎng)，繼續(xù)進行選擇性培養(yǎng)，篩選，把生長良好的菌體挑出來，在選擇平板上，這

4、樣會得到一些單菌落，然后根據(jù)你的目的菌的菌落形態(tài)和鏡檢分子特征選出某個單菌落，然后再次劃線或者稀釋梯度，進行純化以及再純化。同時也可以可以多挑選幾支進行對比實驗，以增加實驗的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。n獲得目的菌體 對不常見的或者難辨的目的細菌就要在微生物鑒定儀上首先鑒定是否存在這種菌 再進行科學(xué)研究和工業(yè)化生產(chǎn)，保證其科學(xué)意義。 全球重大的石油泄漏事件盤點n 1967年3月托利卡尼翁號油輪在英吉利海峽觸礁使得所載11.8萬噸原油全部流入海中，近140千米的海岸受到嚴(yán)重污染。受污海域有25000多只海鳥死亡，50%90%的鯡魚卵不能孵化，幼魚也瀕于絕跡。n 1978年超級油輪阿莫戈卡迪茲號在法國西北部布

5、列塔尼半島布列斯特海灣觸礁，22萬噸原油全部泄入海中。n 1979年6月墨西哥灣“Ixtoc-I”油井發(fā)生井噴，一直到1980年3月24日才封住，共漏出原油47.6萬噸，這是直至目前最嚴(yán)重的石油泄漏事件。n 1999年12月，埃里卡號油輪在法國西北部海域因遭遇風(fēng)暴而斷裂沉沒。2萬多噸重油瀉入海中，是法國遭遇的最嚴(yán)重泄漏石油污染海域事件。n 2005年7月6日，一艘油輪與瓦爾河筑堤相撞，造成30多噸石油泄漏。n 2006年3月10日在美國阿拉斯加該州北部海灣地區(qū)發(fā)生一起重大石油泄漏事故，超過1000噸（共6357桶）泄漏并污染了附近約84畝的苔原地帶。這次事故造成了大批周圍海洋生物及海洋大批死亡，附近的漁業(yè)損失近千萬美元。n 2007年11月10日晚，亞速海和黑海突起風(fēng)暴，裝載4700噸燃油的 “伏爾加石油139”號油輪斷為兩截，致2000 噸燃油流入海中。n 2009年9月15日