動(dòng)物生化實(shí)驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)四、牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定(1)ppt課件

1、了解蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)；了解蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)；掌握蛋白質(zhì)的提取方法和鑒定理。掌握蛋白質(zhì)的提取方法和鑒定理。 牛乳中含豐富的蛋白質(zhì)水分牛乳中含豐富的蛋白質(zhì)水分87.8%87.8%、脂、脂肪肪3.5%3.5%、蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)3.1%3.1%、乳糖、乳糖4.9%4.9%、灰分、灰分0.7%0.7%、能量、能量29.kg/100kg29.kg/100kg，其中主要是，其中主要是酪蛋白。酪蛋白在牛乳中約占總蛋白量酪蛋白。酪蛋白在牛乳中約占總蛋白量的的5/65/6。 蛋白質(zhì)是含羧基和氨基的兩性電解質(zhì)，在某蛋白質(zhì)是含羧基和氨基的兩性電解質(zhì)，在某一一pHpH值溶液中，蛋白質(zhì)分子所帶的正電荷和值溶液中，蛋白質(zhì)分子

2、所帶的正電荷和負(fù)電荷相等，蛋白質(zhì)以?xún)尚噪x子形狀存在，負(fù)電荷相等，蛋白質(zhì)以?xún)尚噪x子形狀存在，這時(shí)溶液的這時(shí)溶液的pHpH值，稱(chēng)為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)值，稱(chēng)為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)PIPI。 在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)所帶凈電荷為零，在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)所帶凈電荷為零，溶解度最小，蛋白質(zhì)沉淀析出，利用蛋白質(zhì)溶解度最小，蛋白質(zhì)沉淀析出，利用蛋白質(zhì)的這個(gè)特點(diǎn)可將蛋白質(zhì)提取出來(lái)。的這個(gè)特點(diǎn)可將蛋白質(zhì)提取出來(lái)。 由于粗提出的酪蛋白中還含有脂肪，可由于粗提出的酪蛋白中還含有脂肪，可用乙醇和乙醚洗滌除去。用乙醇和乙醚洗滌除去。酪蛋白中含有酪氨酸殘基，酪氨酸殘基的酪蛋白中含有酪氨酸殘基，酪氨酸殘基的R R基團(tuán)為：基團(tuán)為：含酚羥基，

3、可與米倫試劑反響先生成白色絮狀沉淀，繼續(xù)反響生含酚羥基，可與米倫試劑反響先生成白色絮狀沉淀，繼續(xù)反響生成紅色沉淀。成紅色沉淀。蛋白中還含有含硫氨基酸胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸，在堿蛋白中還含有含硫氨基酸胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸，在堿性溶液中水解后可與醋酸鉛反響生成黑色的鉛鹽性溶液中水解后可與醋酸鉛反響生成黑色的鉛鹽 三、操作步驟三、操作步驟一酪蛋白的制備一酪蛋白的制備新穎牛奶、醋酸納緩沖液各新穎牛奶、醋酸納緩沖液各5ml 40 5ml 40 分別加熱至同樣溫度分別加熱至同樣溫度 上清液：保管做鑒定燒杯三上清液：保管做鑒定燒杯三邊加邊搖混勻邊加邊搖混勻 5min 5min 沉淀沉淀 加加4ml95

4、%4ml95%的乙醇的乙醇 離心離心5 5分鐘分鐘 上清液：棄去上清液：棄去 沉淀：做鑒定沉淀：做鑒定3000r/min離心離心二酪蛋白的性質(zhì)鑒定二酪蛋白的性質(zhì)鑒定1 1、溶解度、溶解度 取取3 3支試管支試管+ 0.1M NaOH+ 0.1M NaOH、 0.2M 0.2M HClHCl、 10%NaCl 10%NaCl各各2ml+2ml+少許酪蛋白少許酪蛋白振蕩振蕩察看溶解快慢。察看溶解快慢。2 2、米倫反響、米倫反響 1ml H2O1ml H2O 少許酪蛋白少許酪蛋白 察察看看 10 10滴米倫試劑。加熱滴米倫試劑。加熱三乳清中可凝固性蛋白質(zhì)鑒定：三乳清中可凝固性蛋白質(zhì)鑒定： 將第一次離

5、心所得的上清液徐徐加熱，出現(xiàn)將第一次離心所得的上清液徐徐加熱，出現(xiàn)蛋白質(zhì)沉淀球蛋白、清蛋白。蛋白質(zhì)沉淀球蛋白、清蛋白。 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 五、討論五、討論二、常用生化儀器運(yùn)用二、常用生化儀器運(yùn)用 離心機(jī) 離心技術(shù)centrifugal technique：根據(jù)顆粒作勻速圓周 運(yùn)動(dòng)時(shí)遭到一個(gè)外向的離心力的行為而開(kāi)展起來(lái) 的一種分別技術(shù)。 離心技術(shù)運(yùn)用很廣，諸如分別出化學(xué)反響后的沉淀物，天然的生物大分子、無(wú)機(jī)物、有機(jī)物，在生物化學(xué)以及其它的生物學(xué)領(lǐng)域常用來(lái)搜集細(xì)胞、細(xì)胞器及生物大分子物質(zhì)。離心機(jī)種類(lèi)離心機(jī)種類(lèi)按用途：按用途： 有分析用、制備用及分析有分析用、制備用及分析- -制備分；制備分

6、； 按構(gòu)造特點(diǎn)：按構(gòu)造特點(diǎn)： 有管式、吊藍(lán)式、轉(zhuǎn)鼓式和碟式等；有管式、吊藍(lán)式、轉(zhuǎn)鼓式和碟式等； 按轉(zhuǎn)速：按轉(zhuǎn)速： 有為常速低速、高速和超速三種。有為常速低速、高速和超速三種。實(shí)驗(yàn)室用普通低速離心機(jī)實(shí)驗(yàn)室用普通低速離心機(jī)實(shí)驗(yàn)室普通離心機(jī)運(yùn)用方法實(shí)驗(yàn)室普通離心機(jī)運(yùn)用方法1.1.將離心機(jī)放在堅(jiān)實(shí)而平整的將離心機(jī)放在堅(jiān)實(shí)而平整的任務(wù)臺(tái)上；任務(wù)臺(tái)上；2.2.在適用的離心管中參與樣品，在適用的離心管中參與樣品，必需對(duì)稱(chēng)配重，否那么會(huì)損必需對(duì)稱(chēng)配重，否那么會(huì)損壞離心機(jī)；壞離心機(jī)；3.3.按離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的離心管位置按離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的離心管位置刻度所對(duì)應(yīng)孔插入，放下離刻度所對(duì)應(yīng)孔插入，放下離心機(jī)頂蓋；心機(jī)頂蓋；4.4.檢查確認(rèn)調(diào)速鈕處于最低速檢查確認(rèn)調(diào)速鈕處于最低速位置；位置；5.5.翻開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調(diào)速到需求翻開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調(diào)速到需求的轉(zhuǎn)速；的轉(zhuǎn)速；6.6.選擇任務(wù)時(shí)間，調(diào)選擇任務(wù)時(shí)間，調(diào)“選時(shí)鈕選時(shí)鈕到需求的位置。到需求的位置。7.7.離心完成，離心機(jī)自然停頓。離心完成，離心機(jī)自然停頓。 2、離心機(jī)運(yùn)用本卷須知 (1嚴(yán)禁各種液體和雜物進(jìn)入離心任務(wù)室，那樣