紫外可見分光光度計(jì)的使用

1、紫外可見分光光度計(jì)主要內(nèi)容主要內(nèi)容1、工作原理及儀器組成2 、分光光度計(jì)的使用波長(zhǎng)掃描定量測(cè)定3 、注意事項(xiàng)物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系： 當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收，則物質(zhì)就會(huì)顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。一、工作原理及儀器組成一、工作原理及儀器組成互互補(bǔ)補(bǔ)色色原原理理植物葉子呈現(xiàn)綠色是植物葉子呈現(xiàn)綠色是因?yàn)橹参镏写嬖谝环N因?yàn)橹参镏写嬖谝环N吸收藍(lán)紫光和紅光的吸收藍(lán)紫光和紅光的載體載體葉綠素葉綠素顏顏色色的的產(chǎn)產(chǎn)生生完全吸收完全吸收完全透過完全透過吸收黃色光吸收黃色光光譜示意光譜示意表觀現(xiàn)象示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光復(fù)合光 利用一定頻率的

2、紫外-可見光照射分析物，它將有選擇地被吸收。吸收光譜可以反映出物質(zhì)的特征。 溶液對(duì)光的作用示意圖物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收溶液對(duì)光的作用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收溶液對(duì)光的作用 bcIITA0lglgI0 入射光輻射強(qiáng)度I 透射光輻射強(qiáng)度T 透射比a 吸光系數(shù) 摩爾吸光系數(shù)光吸收遵循朗伯-比爾定律：溶液對(duì)光吸收過程0.575光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測(cè)器檢測(cè)器顯示顯示儀器組成-單光束分光光度計(jì)單光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)比比值值光源光源單色單色器器吸收池吸收池檢測(cè)器檢測(cè)器顯顯示示光束分裂器光束分裂器組成：光源、單色器、樣品池、檢測(cè)器光源、單色器、樣品池、檢測(cè)器1光源：能提供連續(xù)

3、的輻射；光強(qiáng)度足夠大；在整個(gè)光譜區(qū)內(nèi)光譜強(qiáng)度不隨波長(zhǎng)有明顯變化；光譜范圍寬；使用壽命長(zhǎng)，價(jià)格低。 鎢燈可見光區(qū) 3202500nm 氫燈或氘燈紫外光區(qū) 195375nmU3010（碘鎢燈、氘燈）波長(zhǎng)范圍（碘鎢燈、氘燈）波長(zhǎng)范圍190-900nm 2 2單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件單色器是分光光度計(jì)的心臟部分，它的作用是把來自光源的混合光分解為單色光并能隨意改變波長(zhǎng)。它的主要組成部件和作用是： 入射狹縫限制雜散光進(jìn)入。 色散元件即棱鏡或光柵，是核心部件，可將混合光分解為單色光。 準(zhǔn)直鏡把來自入射狹縫的光束轉(zhuǎn)化為平等光，并把來自色散元件的平等光聚焦于出射狹縫

4、上。 出射狹縫只讓特定波長(zhǎng)的光射出單色器。 3. 3. 吸收池吸收池 玻璃由于吸收紫外UV光，僅適用于可見光區(qū)； 石英適用于紫外和可見光區(qū)4 4檢測(cè)器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置檢測(cè)器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置 光電管 光電倍增管 二極管陣列檢測(cè)器5 5記錄裝置：訊號(hào)處理和顯示系統(tǒng)記錄裝置：訊號(hào)處理和顯示系統(tǒng) Slit 1不存在，Mirror取代了光柵grating 1 Grating2 variable-pitch aberration-corrected diffraction grating 旋轉(zhuǎn)鏡將光分成兩束，分別通過參比池和樣品池，然后聚集在PMT開始方法設(shè)定樣品名輸入將空白樣品分

5、別放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦剡M(jìn)行用戶基線校正將樣品放入樣品池開始測(cè)量開始測(cè)量打印數(shù)據(jù)二 分光光度計(jì)的使用-波長(zhǎng)掃描啟動(dòng)啟動(dòng)UV Solution軟件軟件1.打開儀器主機(jī)電源。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊Windows開始菜單中的Hitachi Applications選項(xiàng)中的UV Solutions 2.0 選項(xiàng)?；蛘咧苯釉谧烂嫔想p擊UV Solution圖標(biāo)。2運(yùn)行UV Solution軟件。軟件將自動(dòng)配置計(jì)算機(jī)的串行口（RS 232 Port）見圖儀器在初始化過程中進(jìn)行如下自檢工作：儀器在初始化過程中進(jìn)行如下自檢工作： ROM檢測(cè) RAM檢測(cè) 波長(zhǎng)步進(jìn)電機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)檢測(cè) 氘燈點(diǎn)亮檢測(cè) 鎢燈點(diǎn)亮檢測(cè) 儀器波長(zhǎng)校正3 儀器主

6、機(jī)開始初始化。見圖4 儀器主機(jī)初始化完畢，進(jìn)入工作狀態(tài)。5 測(cè)量參數(shù)設(shè)置1 在Edit菜單中選擇Method選項(xiàng)，或按按鈕。出現(xiàn)下列窗口。 General:總體設(shè)置頁面總體設(shè)置頁面Measurement測(cè)量: Wavelength scan 波長(zhǎng)掃描 Time scan時(shí)間掃描 Photometry 定波長(zhǎng)測(cè)量Operator操作者: 輸入操作者的姓名Instrument儀器:儀器型號(hào)由軟件自動(dòng)從儀器主機(jī)獲得。 Use Sample Table使用樣品表:選擇是否使用樣品表。Comments備注:填寫一些備注信息。Load按鈕:用于裝載原來保存的方法文件。Save按鈕:保存當(dāng)前的設(shè)置參數(shù)。Sa

7、ve As按鈕:將當(dāng)前設(shè)置參數(shù)另存為一個(gè)方法文件。Instrument儀器參數(shù)設(shè)置頁面儀器參數(shù)設(shè)置頁面 Data mode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長(zhǎng)掃描的起止范圍一般為190-800，狹縫值一般為2 Light一般選擇“Auto”Monitor顯示頁面顯示頁面Processing數(shù)據(jù)處理頁面數(shù)據(jù)處理頁面 Report報(bào)告結(jié)果頁面報(bào)告結(jié)果頁面 樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入基線校正基線校正用戶基線校正方法：可將scan speed 設(shè)小一些；進(jìn)行樣品掃描時(shí)，可設(shè)大一些。 將空白樣品分別放入樣品室的參比光路和樣品光路。按按鈕 系統(tǒng)基線校正方法。 使用空氣

8、作為參比和樣品。按按鈕 出對(duì)話框見圖，選擇System后按OK按鈕，進(jìn)行系統(tǒng)基線校正。測(cè)量測(cè)量有兩種方法可以開始測(cè)量：使用菜單方式 選擇Spectrophotometer菜單下Start選項(xiàng)開始測(cè)量使用按鈕方式 ：按按鈕 開始測(cè)量如果要終止掃描按按鈕 。開始方法設(shè)定樣品名輸入將空白樣品分別放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦貙悠贩湃霕悠烦亻_始測(cè)量開始測(cè)量打印數(shù)據(jù)進(jìn)行用戶基線校正二 分光光度計(jì)的使用-光度法測(cè)量參數(shù)設(shè)置測(cè)量參數(shù)設(shè)置 在Edit菜單中選擇Method選項(xiàng)。出現(xiàn)下列設(shè)置窗口. 具體操作程序Method:1.general:Measurement測(cè)量方式選擇Photometry（光度計(jì)測(cè)量） 2.Qu

9、antitation定量參數(shù)設(shè)置頁面： 在measure中選擇波長(zhǎng)wavelength，在Calibration中選擇“1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校準(zhǔn)。在concertration中鍵入標(biāo)準(zhǔn)濃度單位。3. Instrument4 standards標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)設(shè)置 鍵入標(biāo)系的樣品濃度及名稱5 吸光度自動(dòng)校零吸光度自動(dòng)校零 在開始測(cè)試前，需要進(jìn)行吸光度校零。在樣品室參比和樣品光路中分別放入空白樣品。按按鈕 進(jìn)行吸光度校零。 6 在wavelength中設(shè)定掃描的最大吸收波長(zhǎng)， 7 放入標(biāo)樣，選中第一個(gè)標(biāo)樣，點(diǎn)measure依次測(cè)定完成 后自動(dòng)給

10、出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 8 選擇SAMPLE進(jìn)行樣品測(cè)定，全部測(cè)定完后點(diǎn)擊END，此 時(shí)自動(dòng)生成一個(gè)文件，打開此文件，另存為所需的文件名。 9 關(guān)機(jī)時(shí)，先退出UVsolution，再關(guān)電腦，最后關(guān)光度計(jì)上的power。三三 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1. 1. 開機(jī)預(yù)熱開機(jī)預(yù)熱1515分鐘左右。分鐘左右。2. 2. 測(cè)定時(shí)應(yīng)注意：測(cè)定時(shí)應(yīng)注意：參照池和吸收池應(yīng)是一對(duì)經(jīng)校正好的匹配的吸收池，材料和規(guī)格一致。使用前后應(yīng)將洗手池洗凈，測(cè)量時(shí)不能用手接觸窗口。已匹配好的比色皿不能用爐子和火焰干燥，不能加熱，以免引起光程長(zhǎng)度上的改變。3. 測(cè)量條件的選擇：測(cè)量條件的選擇：選擇適宜波長(zhǎng)的入射光:由于有色物質(zhì)對(duì)光有選擇性吸收,為了使測(cè)定結(jié)果有較高的靈敏度,必須選擇溶液最大吸收波長(zhǎng)的入射光?？刂莆舛華的準(zhǔn)確的讀數(shù)范圍:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.20.7讀數(shù)范圍內(nèi)時(shí),測(cè)量的準(zhǔn)確度較高. 選擇參比溶液：參比溶液是用來調(diào)節(jié)儀器工作零點(diǎn)的。若樣品溶液，試劑，顯色劑無色可用蒸餾水作參比溶液；反之應(yīng)采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液。4. 用完后先關(guān)程序，再關(guān)儀器開關(guān)，關(guān)電源，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。用完后先關(guān)程序，再關(guān)儀器開關(guān)，關(guān)電源，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。 5. 正確登記，將儀器及實(shí)驗(yàn)臺(tái)擦干凈。正確登記，將儀器及實(shí)驗(yàn)臺(tái)擦干