高效液相色譜法

1、1第二十章高效液相色譜法第二十章高效液相色譜法high performance liquid chromatography；HPLC分析化學(xué)教研室分析化學(xué)教研室2經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，引入氣相色譜法的理論和實驗技術(shù)，引入氣相色譜法的理論和實驗技術(shù)，高壓輸送流動相，高壓輸送流動相，高效固定相及高靈敏度檢測器，高效固定相及高靈敏度檢測器，現(xiàn)代液相色譜分析方法?，F(xiàn)代液相色譜分析方法。 3與經(jīng)典液相色譜法相比與經(jīng)典液相色譜法相比 顆粒極細（一般為顆粒極細（一般為10 m以下）、規(guī)則均以下）、規(guī)則均勻的固定相，勻的固定相，(鍵合相鍵合相)傳質(zhì)阻抗小，柱效傳質(zhì)阻抗小，柱效高，分離效率

2、高；高，分離效率高；高壓輸液泵輸送流動相，流速快，分析速高壓輸液泵輸送流動相，流速快，分析速度快；度快；高靈敏度檢測器，靈敏度大大提高。紫外高靈敏度檢測器，靈敏度大大提高。紫外檢測器最小檢測限可達檢測器最小檢測限可達10 9g，而熒光檢，而熒光檢測器最小檢測限可達測器最小檢測限可達10 12g。 4與氣相色譜法相比與氣相色譜法相比不受試樣的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，不受試樣的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，應(yīng)用范圍廣；應(yīng)用范圍廣；可選用各種溶劑作為流動相，對分離可選用各種溶劑作為流動相，對分離的選擇性有很大作用，選擇性高；的選擇性有很大作用，選擇性高；一般在室溫條件下進行分離，不需要一般在室溫條件下進行

3、分離，不需要高柱溫。高柱溫。 5第一節(jié) 高效液相色譜法的主要類型和原理 一、主要類型一、主要類型四類基本類型色譜法四類基本類型色譜法 分配色譜法（分配色譜法（partition chromatography）吸附色譜法（吸附色譜法（adsorption chromatography）離子交換色譜法（離子交換色譜法（IEC）空間排阻色譜法（空間排阻色譜法（SEC）6第一節(jié) 高效液相色譜法的主要類型和原理 一、主要類型一、主要類型四類基本類型色譜法四類基本類型色譜法 分配色譜法（分配色譜法（partition chromatography）吸附色譜法（吸附色譜法（adsorption chroma

4、tography）離子交換色譜法（離子交換色譜法（IEC）空間排阻色譜法（空間排阻色譜法（SEC）化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法7其他色譜類型其他色譜類型親合色譜法（親合色譜法（affinity chromatography；AC）手性色譜法（手性色譜法（chiral chromatography；CC）膠束色譜法（膠束色譜法（micellar chromatography；MC）電色譜法（電色譜法（electrochromatography；EC）8二、化學(xué)鍵合相色譜法二、化學(xué)鍵合相色譜法 以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法，簡稱以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法，簡稱鍵合相色譜法鍵合相色譜法(bon

5、ded phase chromatography；BPC)化學(xué)鍵合相：采用化學(xué)反應(yīng)的方法將官化學(xué)鍵合相：采用化學(xué)反應(yīng)的方法將官能團鍵合在載體表面所形成的固定相能團鍵合在載體表面所形成的固定相 9優(yōu)點：優(yōu)點：固定相的均一性和穩(wěn)定性好，在使用過程中不固定相的均一性和穩(wěn)定性好，在使用過程中不易流失，使用周期長；易流失，使用周期長；柱效高；重現(xiàn)性好；柱效高；重現(xiàn)性好；能使用的流動相和鍵合相的種類多，分離的選能使用的流動相和鍵合相的種類多，分離的選擇性高擇性高正相（正相（normal phasenormal phase，NPNP）和反相）和反相（reversed phasereversed phase，

6、RPRP）鍵合相色譜法：）鍵合相色譜法：根據(jù)化學(xué)鍵合相與流動相極性的相對強弱根據(jù)化學(xué)鍵合相與流動相極性的相對強弱10（一）正相鍵合相色譜法（一）正相鍵合相色譜法 固定相：極性鍵合相固定相：極性鍵合相如氰基（如氰基（CNCN）、氨基（）、氨基（NHNH2 2）或二羥基）或二羥基鍵合硅膠。（經(jīng)典：水飽和的硅膠）鍵合硅膠。（經(jīng)典：水飽和的硅膠） 流動相：非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)流動相：非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)整劑整劑如烷烴加醇類。（與水不混溶的溶劑）如烷烴加醇類。（與水不混溶的溶劑）適用范圍：溶于有機溶劑的極性至中等適用范圍：溶于有機溶劑的極性至中等極性的分子型化合物極性的分子型化合物如一些在硅

7、膠柱上分離的物質(zhì)如一些在硅膠柱上分離的物質(zhì)11正相鍵合相色譜法正相鍵合相色譜法分離機制？分離機制？分配：把有機鍵合層作為一個液膜看待，溶分配：把有機鍵合層作為一個液膜看待，溶質(zhì)在兩相的溶解質(zhì)在兩相的溶解吸附：溶質(zhì)與鍵合極性基團間的誘導(dǎo)、氫鍵吸附：溶質(zhì)與鍵合極性基團間的誘導(dǎo)、氫鍵和定向作用和定向作用分離選擇性：分離選擇性：極性強的組分極性強的組分k k大，后洗脫出柱。大，后洗脫出柱。流動相的極性增強，洗脫能力增加，使組流動相的極性增強，洗脫能力增加，使組分分k k減小，減小，t tR R 減小。減小。12（二）反相鍵合相色譜法（二）反相鍵合相色譜法固定相：非極性鍵合相固定相：非極性鍵合相如十八烷

8、基硅烷（如十八烷基硅烷（C C1818，ODSODS）、辛烷基（）、辛烷基（C C8 8）鍵）鍵合硅膠合硅膠 流動相：流動相：水水為基礎(chǔ)溶劑，加入一定量與水為基礎(chǔ)溶劑，加入一定量與水混溶的極性調(diào)整劑混溶的極性調(diào)整劑常用甲醇水、乙腈水等常用甲醇水、乙腈水等應(yīng)用：最廣。非極性至中等極性的組分，應(yīng)用：最廣。非極性至中等極性的組分，（還有有機酸、堿及鹽等）（還有有機酸、堿及鹽等） 13保留機制保留機制疏溶劑理論（疏溶劑理論（solvophobic theory）溶質(zhì)的保留主要是溶質(zhì)分溶質(zhì)的保留主要是溶質(zhì)分子與極性溶劑分子間的子與極性溶劑分子間的排排斥力斥力，促使溶質(zhì)分子與鍵，促使溶質(zhì)分子與鍵合相的烴基

9、發(fā)生合相的烴基發(fā)生疏水締合疏水締合。不是溶質(zhì)分子與鍵合相間不是溶質(zhì)分子與鍵合相間的色散力，的色散力，14反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法保留行為的主要影響因素保留行為的主要影響因素1 1、溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性）、溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性） 極性越弱，疏水性越強，極性越弱，疏水性越強，k越大，越大，tR也越大也越大。同系物碳數(shù)越多，極性越弱，同系物碳數(shù)越多，極性越弱，k越大；越大； 引入極性取代基，降低疏水性，引入極性取代基，降低疏水性，k值變小。值變小。2 2、固定相、固定相鍵合烷基的疏水性隨鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長碳鏈的延長而增加，溶而增加，溶質(zhì)的質(zhì)的k也增大。也增大。硅膠表面硅膠表面鍵合烷

10、基的濃度越大鍵合烷基的濃度越大，則溶質(zhì)的，則溶質(zhì)的k越大。越大。 15反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法保留行為的主要影響因素保留行為的主要影響因素3 3、流動相、流動相極性越強，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)的極性越強，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)的k越大越大溶劑種類：水為弱溶劑，醇為強溶劑溶劑種類：水為弱溶劑，醇為強溶劑溶劑比例：水的比例增加，使溶劑比例：水的比例增加，使k增大增大中性鹽的加入：使中性溶質(zhì)的中性鹽的加入：使中性溶質(zhì)的k增大增大pH：影響弱酸、弱減的離解：影響弱酸、弱減的離解流動相的流動相的pH降低，弱酸降低，弱酸k增大，增大，tR增大；弱堿增大；弱堿k變小。變小。16離子抑制色譜法離子抑制色譜

11、法（ion suppression ion suppression chromatographychromatography；ISC ISC ）用少量弱酸、弱堿或緩沖溶液，調(diào)節(jié)流動相用少量弱酸、弱堿或緩沖溶液，調(diào)節(jié)流動相的的pHpH，抑制有機弱酸、弱堿的離解，增加疏，抑制有機弱酸、弱堿的離解，增加疏水締合作用，使水締合作用，使k k變大。變大。適用于適用于3p3pK Ka7a7的弱酸、的弱酸、7p7pK Ka8a8的弱堿的弱堿反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法17把離子對試劑加入到含水流動相中，組把離子對試劑加入到含水流動相中，組分離子在流動相中與離子對試劑的反離分離子在流動相中與離子對試劑的反

12、離子（子（counter ioncounter ion）生成）生成中性離子對中性離子對，增加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使增加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使k k增加，改善分離效果。增加，改善分離效果。 （三）反相離子對色譜法（三）反相離子對色譜法 paired ionchromatography；PIC ion pair chromatography；IPC18反相離子對色譜法反相離子對色譜法離子對模型離子對模型33+()+3s3(+固定相固定相+()+B)+B + H+BHRSO NaRSO + Na+BH RSORSO)BH離子對mB+AB AmA(smBAmmmsmsBAAABABBABE

13、K流動相流動相通式通式19影響容量因子的因素影響容量因子的因素離子對試劑的種類和濃度：碳鏈長度增加，離子對試劑的種類和濃度：碳鏈長度增加，溶質(zhì)的溶質(zhì)的k k增大；在一定范圍內(nèi)試劑的濃度升增大；在一定范圍內(nèi)試劑的濃度升高，溶質(zhì)的高，溶質(zhì)的k k增大增大 流動相的流動相的pHpH：有利于組分和離子對試劑離：有利于組分和離子對試劑離子化時（離子對的形成），組分的子化時（離子對的形成），組分的k k值最大值最大固定相固定相 、流動相性質(zhì)（同一般、流動相性質(zhì)（同一般RP-HPLCRP-HPLC）。）。 20適用范圍：有機酸、堿、鹽，離子型和非離子適用范圍：有機酸、堿、鹽，離子型和非離子型化合物的混合物。

14、型化合物的混合物。分析酸類或帶負電荷物質(zhì)：用季銨鹽，如四丁分析酸類或帶負電荷物質(zhì)：用季銨鹽，如四丁基銨磷酸鹽（基銨磷酸鹽（TBATBA）和溴化十六烷基三甲基銨）和溴化十六烷基三甲基銨（CTABCTAB）等）等分析堿類或帶正電荷的物質(zhì)：用烷基磺酸鹽或分析堿類或帶正電荷的物質(zhì)：用烷基磺酸鹽或硫酸鹽，如正戊烷基磺酸鈉（硫酸鹽，如正戊烷基磺酸鈉（PICBPICB5 5）、正己烷）、正己烷基磺酸鈉（基磺酸鈉（PICBPICB6 6）、）、 適用范圍和離子對試劑的選擇適用范圍和離子對試劑的選擇21第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇固定相應(yīng)符合下列要求：固定相應(yīng)符合下列要求：顆粒細且均勻；顆粒細且

15、均勻；傳質(zhì)快；傳質(zhì)快；機械強度高，能耐高壓；機械強度高，能耐高壓；化學(xué)穩(wěn)定性好，不與流動相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)?；瘜W(xué)穩(wěn)定性好，不與流動相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。22一、化學(xué)鍵合相色譜法的固定相一、化學(xué)鍵合相色譜法的固定相（一）鍵合相的種類（一）鍵合相的種類 非極性鍵合相非極性鍵合相 ：非極性烴基，如非極性烴基，如C C1818C C8 8C C1 1與苯基等鍵合與苯基等鍵合在硅膠表面；在硅膠表面；用于反相色譜；用于反相色譜；長鏈烷基可使溶質(zhì)的長鏈烷基可使溶質(zhì)的k k增大，選擇性改善，增大，選擇性改善，載樣量提高，穩(wěn)定性更好。載樣量提高，穩(wěn)定性更好。23鍵合相的種類鍵合相的種類弱極性鍵合相：弱極性鍵合相： 醚基和

16、二羥基等鍵合相醚基和二羥基等鍵合相用于反相或正相色譜用于反相或正相色譜極性鍵合相：極性鍵合相：常用氨基常用氨基氰基鍵合相（氰乙硅烷基氰基鍵合相（氰乙硅烷基Si(CHSi(CH2 2) )2 2CN)CN)鍵合硅膠鍵合硅膠一般用于正相色譜一般用于正相色譜 特殊用途的鍵合相特殊用途的鍵合相24（二）鍵合相的性質(zhì)和特點（二）鍵合相的性質(zhì)和特點 鍵合反應(yīng)鍵合反應(yīng)硅氧烷（硅氧烷（SiSiO OSiSiC C）型：氯硅烷與硅）型：氯硅烷與硅膠進行膠進行硅烷化反應(yīng)硅烷化反應(yīng) 22SiOHClCH+SiSiSiClH18OR118HC3737RRR1如：如：YWGYWGC C1818H H3737，無定形硅膠

17、，無定形硅膠YWGYWG上鍵合了上鍵合了十八硅烷基；十八硅烷基；SpherisorbSpherisorb ODS ODS，球形硅膠，球形硅膠SpherisorbSpherisorb 上鍵合了上鍵合了ODSODS。 25鍵合相的性質(zhì)和特點鍵合相的性質(zhì)和特點鍵合相的性質(zhì)鍵合相的性質(zhì)含碳量：含碳的百分?jǐn)?shù)含碳量：含碳的百分?jǐn)?shù) 覆蓋度覆蓋度 ：已反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表：已反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例面硅醇基總數(shù)的比例 封尾（封尾（end-cappingend-capping）：在鍵合反應(yīng)后，）：在鍵合反應(yīng)后，用三甲基氯硅烷等進行鈍化處理，減少殘用三甲基氯硅烷等進行鈍化處理，減少殘余硅醇基

18、余硅醇基。 26鍵合相的特點鍵合相的特點使用過程中不流失；使用過程中不流失；化學(xué)穩(wěn)定性好；化學(xué)穩(wěn)定性好；適于梯度洗脫；適于梯度洗脫；載樣量大載樣量大 注意：注意：流動相的流動相的pHpH一般應(yīng)在一般應(yīng)在3-83-8，否則會引起硅，否則會引起硅膠溶解；膠溶解；( (也有適用寬也有適用寬pHpH范圍的鍵合相范圍的鍵合相) )。 鍵合相的性質(zhì)和特點鍵合相的性質(zhì)和特點27二、化學(xué)鍵合相色譜法的流動相二、化學(xué)鍵合相色譜法的流動相 對流動相的要求對流動相的要求：與固定相不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。與固定相不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。對試樣有適宜的溶解度。使對試樣有適宜的溶解度。使k在在110范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，與檢測器相適應(yīng)。例如用

19、紫外檢測器時，與檢測器相適應(yīng)。例如用紫外檢測器時，選用截止波長小于檢測波長的溶劑。選用截止波長小于檢測波長的溶劑。純度高，粘度小。低粘度流動相如甲醇純度高，粘度小。低粘度流動相如甲醇乙腈等可以降低柱壓，提高柱效。乙腈等可以降低柱壓，提高柱效。 28（一）流動相對分離的影響（一）流動相對分離的影響n由色譜柱（固定相）性能決定，由色譜柱（固定相）性能決定，主要受溶劑種類的影響，主要受溶劑種類的影響，k受溶劑配比的影響。受溶劑配比的影響。 2211-4nkkR29（二）流動相的強度和選擇性（二）流動相的強度和選擇性溶劑的極性（強度）溶劑的極性（強度）正相色譜：溶劑極性越強，洗脫能力越強正相色譜：溶劑

20、極性越強，洗脫能力越強 反相色譜：極性弱的溶劑洗脫能力強反相色譜：極性弱的溶劑洗脫能力強 溶劑的選擇性溶劑的選擇性不同種類的溶劑，分子間的作用力不同，不同種類的溶劑，分子間的作用力不同，故選擇性不同故選擇性不同 混合溶劑（二元或多元流動相）混合溶劑（二元或多元流動相）30三、分離條件的選擇三、分離條件的選擇 （一）（一）HPLCHPLC中的速率理論中的速率理論渦流擴散渦流擴散A A=2=2ddp p 球形、小粒度、均勻（球形、小粒度、均勻（RSD5%）固）固定相，勻漿高壓填充，以降低定相，勻漿高壓填充，以降低A?？v向擴散縱向擴散=2=2DDm m 可以忽略?？梢院雎?。因為因為D Dl l很小，

21、室溫操作，且很小，室溫操作，且U大于大于U最佳最佳，31HPLCHPLC中的速率理論中的速率理論傳質(zhì)阻抗傳質(zhì)阻抗固定相傳質(zhì)阻抗固定相傳質(zhì)阻抗CS可以忽略可以忽略 ，因，因df極小極小流動相傳質(zhì)阻抗流動相傳質(zhì)阻抗Cm 要求：要求： dp小，小，Dm大大m2PmmDdC32靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗 ：由于部分流動相在固定相微孔內(nèi)的滯留由于部分流動相在固定相微孔內(nèi)的滯留靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗系數(shù)靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗系數(shù)C Csmsm C Csmsm d dp p2 2， C Csmsm 1 1/ /D Dm m，而，而D Dm mTT/ / 要求要求: : 固定相固定相d dp p2 2、 流

22、動相流動相都小都小HPLCHPLC中的速率理論中的速率理論33H H= =A A+ +C Cm mu u+ +C Csmsmu u 原因：化學(xué)鍵合相，液體流動相原因：化學(xué)鍵合相，液體流動相結(jié)果：結(jié)果：HPLCHPLC的實驗條件應(yīng)該是：的實驗條件應(yīng)該是：小小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；低低粘度流動相，流速不宜過快；粘度流動相，流速不宜過快；柱溫柱溫適當(dāng)。適當(dāng)。 HPLCHPLC中的速率理論中的速率理論34（二）正相鍵合相色譜法的分離條件 固定相固定相極性鍵合相如氰基、氨基鍵合相等極性鍵合相如氰基、氨基鍵合相等 流動相流動相烷烴加適量極性調(diào)節(jié)劑烷烴加適量極性調(diào)節(jié)劑35（

23、三）反相鍵合相色譜法的分離條件固定相固定相非極性鍵合相如非極性鍵合相如ODSODS流動相流動相以水為基礎(chǔ)溶劑，加入甲醇、乙以水為基礎(chǔ)溶劑，加入甲醇、乙腈等極性調(diào)節(jié)劑腈等極性調(diào)節(jié)劑弱酸、弱堿或緩沖鹽作為離子抑制劑弱酸、弱堿或緩沖鹽作為離子抑制劑加入加入0.1%1%0.1%1%的醋酸鹽、磷酸鹽可減少殘的醋酸鹽、磷酸鹽可減少殘余硅醇基的作用余硅醇基的作用 36（四）反相離子對色譜法的分離條件（四）反相離子對色譜法的分離條件 固定相固定相 盡可能選擇表面覆蓋度高且盡可能選擇表面覆蓋度高且疏水性強的非極性鍵合相，疏水性強的非極性鍵合相，離子對試劑離子對試劑 離子對試劑所帶的電荷離子對試劑所帶的電荷應(yīng)與試

24、樣離子的電荷相反應(yīng)與試樣離子的電荷相反 流動相流動相pHpH使試樣組分與離子對試劑全使試樣組分與離子對試劑全部離子化部離子化有機溶劑及其濃度有機溶劑及其濃度 同一般同一般HPLC HPLC 37第三節(jié)高效液相色譜儀組成組成輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)進樣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng) 38一、輸液系統(tǒng)一、輸液系統(tǒng)高壓輸液泵高壓輸液泵恒流泵：在輸送流動相過程中流量恒定。恒流泵：在輸送流動相過程中流量恒定。常用柱塞往復(fù)泵常用柱塞往復(fù)泵雙泵：為了克服流量的脈動。雙泵：為了克服流量的脈動。 有串聯(lián)式和并聯(lián)式有串聯(lián)式和并聯(lián)式3940輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)輸液泵應(yīng)具備的性能

25、：輸液泵應(yīng)具備的性能：流量精度高且穩(wěn)定流量精度高且穩(wěn)定流量范圍寬流量范圍寬能在高壓下連續(xù)工作能在高壓下連續(xù)工作液缸容積小液缸容積小密封性能好，耐腐蝕密封性能好，耐腐蝕 41輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)輸液泵操作注意事項：輸液泵操作注意事項：防止固體微粒進入泵體防止固體微粒進入泵體流動相不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì)流動相不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì)防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完不超過規(guī)定的最高壓力不超過規(guī)定的最高壓力流動相一般應(yīng)該先脫氣流動相一般應(yīng)該先脫氣42二、分離和進樣系統(tǒng)二、分離和進樣系統(tǒng) 進樣器進樣器進樣閥（六通閥）、自動進樣裝置進樣閥（六通閥）、自動進樣裝置色譜柱（色譜柱（columncolum

26、n） 由柱管和固定相組成由柱管和固定相組成分析柱、制備柱分析柱、制備柱 性能評價性能評價 H H、n n、f fs s、k k和和的重復(fù)性，或的重復(fù)性，或R R。 4344三、檢測系統(tǒng)三、檢測系統(tǒng)（一）檢測器（一）檢測器(detector)(detector)的主要性能的主要性能要求：要求：靈敏度（靈敏度（sensitivitysensitivity）高（檢測限低）高（檢測限低）噪音（噪音（noisenoise）低）低線性范圍（線性范圍（linear rangelinear range）寬）寬重復(fù)性（重復(fù)性（repeatabilityrepeatability）好）好適用范圍廣（通用型、專屬型

27、）適用范圍廣（通用型、專屬型） 45（二）紫外檢測器（二）紫外檢測器(ultraviolet detector) 檢測原理：檢測原理：朗伯比爾朗伯比爾 (Lambert-Beer) (Lambert-Beer) 定律，響應(yīng)定律，響應(yīng)信號（吸光度）與濃度成正比信號（吸光度）與濃度成正比A=Cl特點：特點：靈敏度較高（靈敏度較高（1010-6-61010-9-9 g/ml g/ml），噪音低，），噪音低，線性范圍寬，穩(wěn)定性好，適于梯度，不破線性范圍寬，穩(wěn)定性好，適于梯度，不破壞樣品，應(yīng)用廣（分析、制備）。壞樣品，應(yīng)用廣（分析、制備）。局限：局限：只能檢測有紫外吸收的物質(zhì)，流動相的截只能檢測有紫外吸

28、收的物質(zhì)，流動相的截止波長應(yīng)小于檢測波長。止波長應(yīng)小于檢測波長。 專屬型、濃度型檢測器專屬型、濃度型檢測器46紫外檢測器紫外檢測器固定波長檢測器固定波長檢測器 ：254nm254nm可變波長檢測器：可變波長檢測器：光源：氘燈（和鎢燈光源：氘燈（和鎢燈），）， 200200400400（800800）nmnm，單色器，流通池（試樣），光電，單色器，流通池（試樣），光電管管光路系統(tǒng)和紫外分光光度計相似光路系統(tǒng)和紫外分光光度計相似 光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器 (photodiode (photodiode array detectorarray detector； PDAD)PDAD)：一系列光電二極管，一系列光電二極管，一個二極管對應(yīng)接一個二極管對應(yīng)接受光譜上約受光譜上約1nm1nm譜帶寬的單色光譜帶寬的單色光 474