2013選修1生物技術(shù)實(shí)踐知識點(diǎn)歸納

1、實(shí)驗(yàn)1 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1.微生物是指結(jié)構(gòu)簡單、形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞或沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物，包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。細(xì)菌是單細(xì)胞的原核生物，有細(xì)胞壁（肽聚糖）、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)，無成型的細(xì)胞核，只有一環(huán)狀DNA分子（擬核）。以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。用革蘭氏染色法將細(xì)菌分為革蘭氏陽性菌（革蘭氏染液染色后，再脫色處理，細(xì)菌仍保留染色液的顏色）和革蘭氏陰性菌兩大類，區(qū)別在細(xì)胞壁的成分不同。大腸桿菌是革蘭氏陰性（細(xì)胞壁薄，有莢膜）、兼性厭氧的腸道桿菌。2.細(xì)菌的分離方法有兩種：劃線分離法和涂布分離法。是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡便方

2、法之一。劃線分離就是用接種環(huán)蘸菌液后在含有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿平板上劃線，在劃線的過程中菌液逐漸減少，細(xì)菌也逐漸減少，。劃線最后，可使細(xì)菌間的距離加大。將接種后的固體培養(yǎng)基培養(yǎng)1020小時后，一個細(xì)菌細(xì)胞就會繁殖成許多細(xì)菌細(xì)胞，形成菌落，不會重疊。在斜面上劃線，則每個斜面的菌群就是有一個細(xì)菌產(chǎn)生的后代。用于基因工程的大腸桿菌的工程菌，可以用劃線分離法獲得產(chǎn)物表達(dá)能力高的菌株。由于工程菌的質(zhì)粒中通常有抗性基因（如抗氨芐青霉素基因），如在培養(yǎng)基中加入一定量的氨芐青霉素，由于非工程菌的其他雜菌都沒有抗性基因，所以在劃線后只有存在抗性基因的工程菌能生存下來。涂布分離時，需要先將培養(yǎng)的菌液稀釋，通常稀釋到

3、10-510-7之間，然后去0.1ml不同稀釋度的稀釋菌液放在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂布在培養(yǎng)基平面上進(jìn)行培養(yǎng)，在適當(dāng)?shù)南♂尪认?，可產(chǎn)生相互分開的菌落。通常每個培養(yǎng)皿中有20個以內(nèi)的單菌落為最合適。劃線分離法，方法簡單；涂布分離法，單菌落更易分開，但操作復(fù)雜。3.在培養(yǎng)微生物時，必須進(jìn)行無菌操作。其首要條件是各種器皿必須是無菌的，各種培養(yǎng)基也必須是無菌的，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基、倒平板、接種、平板劃線、平板稀釋涂布等操作中的每一步都要做到無菌（防止雜菌污染）。進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時，要將培養(yǎng)皿倒置，是因?yàn)榕囵B(yǎng)基中的水分會以水蒸氣的形式蒸發(fā)，倒放培養(yǎng)皿會使水蒸氣凝結(jié)成水滴后，落入培養(yǎng)基的表面并且擴(kuò)散，菌落

4、中的細(xì)菌也會隨水?dāng)U散，菌落見相互影響，很難在分成單菌落，達(dá)不到分離的目的。4.細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)要用LB液體培養(yǎng)基（通用培養(yǎng)基、常用于做生理學(xué)研究和發(fā)酵工業(yè)），劃線分離要用LB固體培養(yǎng)基（常用于微生物分離、鑒定、計數(shù)和菌種保存）?！凹?xì)菌喜葷，霉菌喜素”，通常細(xì)菌培養(yǎng)基要用蛋白胨和酵母提取物來配制，還要加入一定的氯化鈉，以維持一定的滲透壓；霉菌培養(yǎng)基一般用無機(jī)物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。盡管培養(yǎng)基的配方各不相同，但其基本成分都一樣（五類）。人及動物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類；植物的營養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類；微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及生長因子等

5、五類。（1）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。（2）消毒與滅菌的區(qū)別消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，還有化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紅外線消毒。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅

6、菌、高壓蒸汽滅菌(121。C 15 MIN)。（1）培養(yǎng)基可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基（按照物理性質(zhì)）。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。（2）各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽四種營養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長還需要適宜的pH、氧氣的要求（根據(jù)微生物的需求提供有氧或無氧環(huán)境）、特殊營養(yǎng)物質(zhì)等。碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無機(jī)碳源；糖類、蛋白質(zhì)、脂肪等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N2

7、、NH3、NO3-、蛋白質(zhì)、氨基酸等。只有固氮微生物才能利用N2。（3）培養(yǎng)基配制的原則：目的要明確、PH值要適宜、營養(yǎng)要協(xié)調(diào)和要經(jīng)濟(jì)節(jié)約。5討論和思考（P24） （1）如何操作可以盡量避免被雜菌污染？ 答：膽大心細(xì)，操作快捷。注意滅菌操作原則，滅菌徹底。手和實(shí)驗(yàn)服要清潔。注意微生物生長條件。 （2）在培養(yǎng)后如何判斷是否有雜菌污染？ 答：可根據(jù)菌落形態(tài)特征來判斷。用顯微鏡鏡檢菌的形態(tài)和大小。上述方法較難區(qū)分同類的物種，需要用化學(xué)方法進(jìn)一步觀察，如用革蘭氏染色法。 （3）進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時為什么要培養(yǎng)皿倒置？ 答：冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，

8、凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 （4）實(shí)驗(yàn)完成后，接觸過細(xì)菌的器皿應(yīng)如何處理？ 答：實(shí)驗(yàn)完成后，所有接觸過細(xì)菌的器皿都必須先高壓滅菌后再洗滌，特別是培養(yǎng)基，有可能被有害菌體污染，在培養(yǎng)繁殖后，大量有害菌體影響人畜健康，也污染環(huán)境，因此必須高壓滅菌。使用后的廢棄物也要高壓滅菌后再拋棄。 實(shí)驗(yàn)2   分離以尿素為氮源的微生物一、教學(xué)要求基本要求1進(jìn)行微生物分離，使用含有尿素的培養(yǎng)基分離有脲酶的細(xì)菌。2使用酚紅指示劑檢測以尿素為氮源的細(xì)菌的存在。

9、發(fā)展要求1說明分離以尿素為氮源的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)原理。2舉例說明本實(shí)驗(yàn)分離出來的細(xì)菌不一定都是以尿素為氮源的細(xì)菌。說明 二、基本內(nèi)容1實(shí)驗(yàn)原理：本實(shí)驗(yàn)以LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基與尿素固體培養(yǎng)基為對照，通過觀察兩者的細(xì)菌菌落數(shù)說明能利用尿素的細(xì)菌在土壤菌群中較少。這兩種培養(yǎng)基在配制時均要用瓊脂糖代替瓊脂使之固化。另外，由于尿素在高溫下會分解，所以對尿素溶液的滅菌要采用G6玻璃漏斗過濾的方法。在尿素固體培養(yǎng)基中還要加入酚紅，這是一種酸堿指示劑，有脲酶的細(xì)菌菌落周圍會出現(xiàn)著色的環(huán)帶。 2實(shí)驗(yàn)步驟：（1）土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事

10、先準(zhǔn)備好的信封中。（2）制備培養(yǎng)基準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。（3）制備細(xì)菌懸液參考課本中P26圖5的實(shí)驗(yàn)流程示意圖，將1 g土樣加入盛有99mL無菌水的錐形瓶中（錐形瓶體積為250 mL），充分搖勻，吸取上清液，轉(zhuǎn)移至盛有4.5 mL的無菌水的大試管中，依次等比稀釋至104和105稀釋度，并按照由104和105稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進(jìn)行平板涂布操作，各做三個培養(yǎng)皿。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。（4

11、）微生物的培養(yǎng)與觀察將涂布好的培養(yǎng)皿放在37 溫度下培養(yǎng)2448h。隨著培養(yǎng)時間的延長，會有不同的菌落產(chǎn)生。比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄。挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生著色的環(huán)帶的顏色反應(yīng)。3討論和思考（P28）（1）為什么本實(shí)驗(yàn)中要用瓊脂糖來代替瓊脂配制固體培養(yǎng)基呢？瓊脂糖與瓊脂有何區(qū)別？答：瓊脂在制作固體培養(yǎng)基時起凝固劑的作用。但它卻是一種未被純化的混合物，里面有一定量的含氮化合物。在本實(shí)驗(yàn)中所使用的尿素培養(yǎng)基卻要求提供氮元素的物質(zhì)只有尿素，用這種培養(yǎng)基才能分離得到含脲酶的細(xì)菌。若用瓊脂來制備本實(shí)驗(yàn)的尿素固體培

12、養(yǎng)基，則提供氮元素的物質(zhì)除了尿素還有瓊脂，用這種培養(yǎng)基就不難只得到含脲酶的細(xì)菌，還會得到大量以非尿素為氮源的細(xì)菌，這樣就達(dá)不到分離出以尿素為氮源的細(xì)菌這一實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧?。所以要將瓊脂純化，去除那些含氮化合物，這樣經(jīng)純化得到的瓊脂糖就可以代替瓊脂做固體劑且不會帶來含氮化合物對本實(shí)驗(yàn)的干擾了。（2）有脲酶的細(xì)菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用？答：有脲酶的細(xì)菌使植物廢棄物和動物尸體降解，并利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循環(huán)。如果土壤中有許多尿素，在自然界較高溫度下就會被水解，水解后的NH3會使土壤變成堿性，NH3與其他陰離子物質(zhì)如CO、NO等形成化合物，則會使土壤板結(jié)。（3）有脲酶的細(xì)菌周圍會為什么出現(xiàn)著

13、色的環(huán)帶？答：細(xì)菌向胞外分泌脲酶，使培養(yǎng)基中的尿素水解，尿素分解后產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚紅在酸性環(huán)境中是黃色，在堿性環(huán)境中是紅色。（4）與全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落比較，為什么尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落？答：全營養(yǎng)培養(yǎng)基數(shù)量和種類都明顯多于尿素培養(yǎng)基上的。因?yàn)槿珷I養(yǎng)培養(yǎng)基中的氮源是蛋白胨，很多細(xì)菌都能利用它，而尿素培養(yǎng)基中的氮源只有尿素，只有含脲酶的細(xì)菌才能利用尿素，能存活。（5）本實(shí)驗(yàn)的微生物分離與上一實(shí)驗(yàn)中大腸桿菌的分離實(shí)質(zhì)上一樣嗎？兩者的細(xì)菌分離有很大的不同。實(shí)驗(yàn)1：大腸桿菌培養(yǎng)和分離，利用劃線分離法，從同種菌種中分離得到同種菌的單菌落，在劃線的末端出現(xiàn)大腸桿菌單菌落。實(shí)驗(yàn)2：分離以尿素為氮源的微

14、生物，利用涂布分離法，從土壤浸出液里所存在的各種細(xì)菌中只將含有脲酶的細(xì)菌分離出來，只出現(xiàn)含有脲酶的細(xì)菌菌落。 實(shí)驗(yàn)4 果汁中的果膠和果膠酶1.果膠是植物細(xì)胞壁的以及胞間層的主要成分之一，由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯組成。下面是果膠的結(jié)構(gòu)式：山楂的果實(shí)中果膠含量最多，煮沸的山楂泥可制成山楂糕，就是由于果膠的作用。果膠起著將植物細(xì)胞粘合在一起的作用，去掉果膠，就會使植物組織變得松散。果膠不溶于乙醇，這是鑒別果膠的一種簡易方法。植物細(xì)胞壁和胞間層的主要組成成分之一。在果汁加工中，果膠的存在易導(dǎo)致果汁出汁率低，果汁渾濁。果膠酶分解果膠的作用是：瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層，使榨取果汁更容易；把果

15、膠分解為可溶性的半乳糖醛酸，使渾濁的果汁變得澄清，因此可以解決果汁加工中出現(xiàn)的問題。果膠酶是一類酶的總稱，包括：多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶。在植物細(xì)胞工程中果膠酶的作用是與纖維素酶一起除去植物細(xì)胞的細(xì)胞壁。3.黑曲霉 蘋果青霉可用于生產(chǎn)果膠酶。（1）制作果汁的最佳條件是什么？答：制作果汁的最佳條件是方法要溫和，且對人體無害，能使最多的水果成分溶解或分散在果汁中，能盡量保留水果的營養(yǎng)成分，具有水果的原始色彩和口味；有更多的固形物，分散程度好，不沉淀，不上浮；除去所有的機(jī)械組織，更易消化。（2）果膠酶在制作果汁中起什么作用？答：可將細(xì)胞離析，增加固形物的分散度。降低水果勻漿懸液黏度，有

16、利于過濾掉不溶物，并使果膠分解成半乳糖醛酸。（3）果膠酶還可能起什么作用？答：果酒澄清，同時也作為洗衣粉的添加劑，有利于洗去衣服上的果汁等污垢。（4）果膠酶水解果膠的最終產(chǎn)物是什么？要使果汁澄清，是否應(yīng)該同時使用果膠酶和果膠甲酯酶中的哪一種？還是同時使用兩種酶？為什么？答：果膠酶水解果膠的最終產(chǎn)物是半乳糖醛酸，要使果汁澄清，應(yīng)該同時使用果膠酶和果膠甲酯酶。從微生物中獲得的果膠酶都包括這兩種酶。因?yàn)椋绻皇褂霉z完全降解成半乳糖醛酸，則不可能減少組織的分散性，許多水果中的固形物不能除去，這樣會降低果汁的營養(yǎng)成分，也影響其澄清度。實(shí)驗(yàn)7 -淀粉酶的固定化及淀粉水解1實(shí)驗(yàn)原理固定化酶：將水溶性的酶

17、用物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。 固定化酶方法：吸附法、交聯(lián)法、包埋法、共價偶連法等。固定化酶技術(shù)。即將酶固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)（如固定在不溶于水的載體上）。固定化酶的優(yōu)點(diǎn)：使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離；固定在載體上的沒可以被反復(fù)利用。實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)原理：本實(shí)驗(yàn)是用吸附法將a-淀粉酶固定在石英砂上，一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示劑溶液測試，流出物呈紅色表明水解產(chǎn)物糊精生成。2實(shí)驗(yàn)步驟（1）淀粉酶的固定化。5mg 淀粉酶溶于4ml蒸餾水，加入5mg石英砂，攪拌30min。（2）將石英砂裝入含氣門心并用夾子封住的注射

18、器中。用40ml蒸餾水用流速1ml/min來洗滌除去未吸附的游離淀粉酶。（3）使淀粉溶液以的流速過柱，在流出5ml后接收流出液。加入1-2滴KI-I2溶液，觀察顏色變化。實(shí)驗(yàn)預(yù)期結(jié)果：水解產(chǎn)物糊精遇碘呈紅色。3討論和思考（P40）（1）如何證明洗滌固定化酶柱的流出液中沒有淀粉酶？答：可在試管中加入1ml可溶性淀粉，再加幾滴淀粉酶柱流出液，保溫幾分鐘后用碘液檢驗(yàn)。如仍顯藍(lán)色，則流出液中沒有淀粉酶了。（2）耐高溫的淀粉酶有哪些可能的用途？答：在高溫下使淀粉水解快，不會因?yàn)闇囟雀叨Щ?，發(fā)酵生產(chǎn)中經(jīng)常要用到植物淀粉水解。實(shí)驗(yàn)8 果酒及果醋的制作（一）實(shí)驗(yàn)原理1酵母菌的細(xì)胞呼吸酶酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量

19、繁殖，反應(yīng)式：C6H12O6+O2 CO2+H2O+能量酶酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳，表達(dá)式為：C6H12O6 C2H5OH+CO2+能量2酵母菌發(fā)酵的最佳環(huán)境酵母菌在有氧和無氧的條件下都能生活：在有氧時，酵母菌大量繁殖，但是不起到發(fā)酵效果；在無氧時，繁殖速度減慢，但是此時可以進(jìn)行發(fā)酵。在利用酵母菌發(fā)酵時最好是先通入足夠的無菌空氣在有氧環(huán)境下一段時間使其繁殖，再隔絕氧氣進(jìn)行發(fā)酵。25左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵的最佳溫度是在25-30，pH最好是弱酸性。酶3醋酸菌好氧性細(xì)菌，當(dāng)缺少糖源時和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸。表達(dá)式為：C2H5OH CH3COOH+H2O；當(dāng)氧氣

20、、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。醋酸菌生長的最佳溫度是在3035(二)實(shí)驗(yàn)步驟挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒（醋酸發(fā)酵果醋）1.對發(fā)酵瓶、紗布、榨汁機(jī)、盛葡萄汁的器皿等實(shí)驗(yàn)用具進(jìn)行清洗并消毒。先用溫水反復(fù)沖洗幾次,再用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。2.取葡萄500g，去除枝梗和腐爛的子粒。3.用清水沖洗葡萄12遍除去污物，注意不要反復(fù)多次沖洗。4.用榨汁機(jī)榨取葡萄汁后，將其裝入發(fā)酵瓶中或?qū)⑵咸汛虺蓾{后，用潔凈的紗布過濾至發(fā)酵瓶中，蓋好瓶蓋。如果沒有合適的發(fā)酵裝置，可以用500mL的塑料瓶替代，但注入的果汁量不要超過塑料瓶總體積的2/3。5.將發(fā)酵瓶置于適宜的溫度下發(fā)酵

21、。酵母菌，1825，1012d；醋酸菌，3035，78d。2的產(chǎn)量非常大，因此需要及時排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂。如果使用簡易的發(fā)酵裝置，如瓶子（最好選用塑料瓶），每天要擰松瓶蓋24次，進(jìn)行排氣。7.10d以后，可以開始進(jìn)行取樣檢驗(yàn)工作。例如，可以檢驗(yàn)酒味、酒精的含量、進(jìn)行酵母菌的鏡檢等工作。8.當(dāng)果酒制成以后，可以在發(fā)酵液中加入醋酸菌或醋曲，然后將裝置轉(zhuǎn)移至3035 的條件下發(fā)酵，適時向發(fā)酵液中充氣。如果找不到醋酸菌菌種或醋曲，可嘗試自然接種，但效果不是很好。如果沒有充氣裝置，可以將瓶蓋打開，在瓶口蓋上紗布，以減少空氣中塵土等的污染。(三)注意事項請分析此裝置中的充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作

22、用。為什么排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身連接？結(jié)合果酒、果醋的制作原理，你認(rèn)為應(yīng)該如何使用這個發(fā)酵裝置？答：充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出CO2的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。使用該裝置制酒時，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時，應(yīng)將充氣口連接氣泵，輸入氧氣。（四）知識重點(diǎn)酵母菌（真菌）和醋桿菌（細(xì)菌）。制作酒和醋的過程：在糯米或大米與酒曲混勻后，放在溫度較高的地方，米先變甜，即生成了糖，這是由于黑曲霉或黑根霉的淀粉酶將淀粉水解成糖。甜度增加后，再放到溫度低的地方保持厭氧條件，酵母就開始工作，

23、使糖變成酒（糖酵解）。如果時間太長，在有氧條件下，醋酸菌就開始作用，將乙醇氧化成乙酸，也就是變酸生成醋。2.用葡萄制作葡萄酒時，一般不加蔗糖，都只用野生酵母，但是本實(shí)驗(yàn)為了加速反應(yīng)，使觀察更直觀，需要有更多底物參加反應(yīng)，所以加入酵母使酒精發(fā)酵占有優(yōu)勢。使用高錳酸鉀溶液浸泡葡萄的目的是為了防止雜菌污染，也是消滅了野生酵母。發(fā)酵瓶中的液體不能裝滿是因?yàn)榘l(fā)酵過程中氣體產(chǎn)生，如果裝滿會使液體外溢，導(dǎo)致發(fā)酵液損失和瓶口等處污染雜菌，影響產(chǎn)物品質(zhì)。用裝著水的彎曲玻璃管可以防止氧氣進(jìn)入，發(fā)酵產(chǎn)生的二氧化碳可以出去，還可以防止空氣中雜菌的污染。3.制醋有固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵，本實(shí)驗(yàn)屬于固定化菌體連續(xù)發(fā)酵工藝。制

24、醋時要向發(fā)酵瓶中通入空氣，保證發(fā)酵是一個氧化過程，要用棉花過濾是防止空氣中的微生物進(jìn)入。實(shí)驗(yàn)10 泡菜的腌制和亞硝酸的測定假絲酵母和乳酸菌。這類食品含有乳酸和豐富的維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分，但蛋白質(zhì)含量低，還含有一定量的亞硝酸鹽。所用原料是白菜、洋白菜等。在無氧的條件（由所用容器的凹槽加水在加蓋造成）下，微生物利用菜中的糖和其他營養(yǎng)物進(jìn)行發(fā)酵，乳酸菌將糖分轉(zhuǎn)化為乳酸，這是需氧菌被殺死；當(dāng)有機(jī)酸增加到一定程度時，乳酸菌被殺死，出現(xiàn)酵母和霉菌，并逐漸產(chǎn)生亞硝酸。加白酒的作用是可抑制雜菌的生長，也是一種調(diào)味劑，增加醇香感。加鹽不要太多，否則會使乳酸菌發(fā)酵遲緩。溫度高則發(fā)酵快，但口味差些。2.雜菌較少

25、的原因是乳酸菌產(chǎn)生的乳酸球菌肽對許多革蘭氏陽性菌有抗菌作用，蛋白質(zhì)含量低，白酒的抑制作用等。3.亞硝酸鹽是對人體有害，引起中毒，可致癌的物質(zhì)，由假絲酵母產(chǎn)生?？膳c對氨基本磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，這一產(chǎn)物再與N1萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物，可用光電比色法定量。實(shí)驗(yàn)步驟包括樣品處理、測定、標(biāo)準(zhǔn)曲線（以亞硝酸鈉質(zhì)量為橫坐標(biāo)以光密度OD值為縱坐標(biāo)）、計算亞硝酸鹽含量（mg/kg）X1=通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的亞硝酸鹽質(zhì)量（ug）m2×1000×樣品處理液總體積V1/樣品質(zhì)量m1×測定樣品液總體積V2×1000）。實(shí)驗(yàn)11 植物組織培養(yǎng)一、教學(xué)要求基本要求1進(jìn)行菊花的組

26、織培養(yǎng)。2嘗試植物激素的應(yīng)用。發(fā)展要求 說明 二、基本內(nèi)容1原理：植物細(xì)胞的全能性。2影響植物組織培養(yǎng)的條件（1）材料植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。（2）激素在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。 （3）營養(yǎng)常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni、I、Co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。培養(yǎng)基中通常加一定量的蔗糖是除作為營養(yǎng)成分外，還用于維持一定的滲透壓。（4）環(huán)境條件PH、溫度、光等環(huán)境條件。3操作流程培養(yǎng)過程應(yīng)該在無菌的條件下進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)經(jīng)過外植體愈傷組織叢狀苗生根苗移栽植株。需要一定的光照和溫度的條件。（1）配制MS固體培養(yǎng)基 最常用的MS培養(yǎng)基（生芽培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基）。配制過程包括稱量、溶解、調(diào)PH、融化、分裝（三角瓶）、加蓋滅菌等步驟。 配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液。使用時根據(jù)母液