實(shí)驗(yàn)一 紙層析法分離鑒定氨基酸

1、181通過實(shí)驗(yàn)，掌握紙層析的基本操作技能。通過實(shí)驗(yàn)，掌握紙層析的基本操作技能。加深對分配層析原理的理解。加深對分配層析原理的理解。182是利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)是利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中一相為一相為，另一相流過此相稱作，另一相流過此相稱作，并使，并使各組分以不同速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的目的。各組分以不同速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的目的。糖類、有機(jī)酸、氨基酸、核苷等糖類、有機(jī)酸、氨基酸、核苷等183 在層析中在層析中的物質(zhì)。如紙層析中固定相是濾紙纖維中結(jié)合的的物質(zhì)。如紙層析中固定相是濾紙纖維中結(jié)

2、合的水。固定相被看成是樣品移動(dòng)的阻力。水。固定相被看成是樣品移動(dòng)的阻力。 在層析過程因其本身流動(dòng)而在層析過程因其本身流動(dòng)而的物質(zhì)。的物質(zhì)。184名稱名稱操作方式操作方式固定相固定相流動(dòng)相流動(dòng)相分離依據(jù)分離依據(jù) 分配層析分配層析 紙層析紙層析 薄層層析薄層層析液體液體液體液體 溶解度溶解度 離子交換層析離子交換層析 離子交換柱層析離子交換柱層析固體固體液體液體 帶電性帶電性 靜電引力靜電引力 吸附層析吸附層析 吸附薄層層析吸附薄層層析 氣體吸附層析氣體吸附層析固體固體液體液體氣體氣體 吸附力吸附力 親和層析親和層析 酶與底物酶與底物 抗原與抗體抗原與抗體固體固體液體液體 配體專一性配體專一性 凝

3、膠層析凝膠層析 凝膠過濾凝膠過濾固體固體液體液體 分子大小分子大小185：是利用不同物質(zhì)在兩種不相溶的溶劑：是利用不同物質(zhì)在兩種不相溶的溶劑中的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的一種技術(shù)。中的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的一種技術(shù)。分配系數(shù)分配系數(shù) =溶質(zhì)在固定相的溶解度溶質(zhì)在固定相的溶解度溶質(zhì)在流動(dòng)相的溶解度溶質(zhì)在流動(dòng)相的溶解度186 紙層析是以濾紙作為惰性支持物的紙層析是以濾紙作為惰性支持物的：紙纖維上的：紙纖維上的 OHOH 基具有親水性，所基具有親水性，所以能以能一層一層，而通常把而通常把作為作為。流動(dòng)相流經(jīng)支持物時(shí)與固。流動(dòng)相流經(jīng)支持物時(shí)與固定相間連續(xù)抽提，使物質(zhì)在兩相間不斷地分定相間連續(xù)抽提，使物

4、質(zhì)在兩相間不斷地分配而得到分離。配而得到分離。187v 溶質(zhì)在濾紙上的移動(dòng)速率用溶質(zhì)在濾紙上的移動(dòng)速率用f（比移）值來（比移）值來表示：表示： 展層層斑點(diǎn)中心與原點(diǎn)間的距離 Rf = - 溶劑前沿與原點(diǎn)之間的距離188189物質(zhì)的極性大小決定了物質(zhì)在水物質(zhì)的極性大小決定了物質(zhì)在水 和有機(jī)溶劑之間的分配情況。和有機(jī)溶劑之間的分配情況。 展層劑的展層劑的pHpH影響被分離物質(zhì)的極性基團(tuán)影響被分離物質(zhì)的極性基團(tuán)的解離形式。的解離形式。層析用濾紙要質(zhì)地均勻，緊密，層析用濾紙要質(zhì)地均勻，緊密， 有一定的機(jī)械強(qiáng)度，并含雜質(zhì)少。國產(chǎn)新華濾紙可有一定的機(jī)械強(qiáng)度，并含雜質(zhì)少。國產(chǎn)新華濾紙可 用于一般的紙層析。用于一般的紙層析。1810181118121813下次實(shí)驗(yàn)下次實(shí)驗(yàn) ：實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 蛋白質(zhì)和氨基酸的顏色反應(yīng)蛋白質(zhì)和氨基酸的顏色反應(yīng)1814小實(shí)驗(yàn)小實(shí)驗(yàn)1815v可以看出可以看出1 1號氨基酸上升的最號氨基酸上升的最高，在濾紙上跑得最快。高，在濾紙上跑得最快。v而而4 4號氨基酸與濾紙的結(jié)合最號氨基酸與濾紙的結(jié)合最緊，因此跑的速度比其他的緊，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。氨基酸慢。12341816v這就是紙色譜法。這就是紙色譜法。v對照上圖，可知道對照上圖，可知道1-41-4號的各號的各代表什么氨基酸。代表什么氨基酸。v紙色譜法是分離鑒定蛋白質(zhì)的紙色譜法