生物制品質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)審評一般原則

1、【S 】GPH1-1生物制品質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)審評一般原則藥品審評中心2005 年 12 月目 錄一、概述 .2二、生物學(xué)測定常用方法 .3三、方法的來源（種類） 4四、分析方法 5五、分析方法的驗(yàn)證 .7（一）專屬性（二）準(zhǔn)確性（三）精密度（四）線性（五）范圍（六）耐用性（七）檢測限度（八）定量限度六、綜合分析 .13七、名詞解釋 .13八、參考文獻(xiàn) . 14九、附錄（推薦的驗(yàn)證方案） . 15十、起草說明 . 16十一、著者 . 21一、概述質(zhì)控分析方法驗(yàn)證就是證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測要求，具有相當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確性和可靠性，進(jìn)而可以達(dá)到控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的。只有經(jīng)過驗(yàn)證的分析方法才能用于控

2、制產(chǎn)品質(zhì)量，因此方法驗(yàn)證是制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)。一般情況下，需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)檢查、原液或制劑中有效成分的含量測定及生物活性測定。其它質(zhì)控方法，如必要時(shí)也應(yīng)加以驗(yàn)證。生物制品質(zhì)控中采用的方法包括理化分析方法和生物學(xué)測定方法。生物制品的理化分析方法驗(yàn)證原則與化學(xué)藥品基本相同，可參照化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行，同時(shí)需結(jié)合生物制品的特點(diǎn)考慮。本技術(shù)審評一般原則主要針對生物學(xué)測定方法的驗(yàn)證進(jìn)行討論。生物學(xué)測定方法可廣泛用于各種檢測目的，包括鑒別、生物活性和雜質(zhì)檢測等，其中最主要的是生物活性（或效價(jià)、效力）測定。相對于理化分析方法而言，生物學(xué)測定具有更大的可變性，一般要使

3、用動物、細(xì)胞或生物分子，因此對于生物學(xué)測定的判斷標(biāo)準(zhǔn)可適當(dāng)靈活掌握，但是對于定量測定方法應(yīng)盡可能減少方法的變異，驗(yàn)證的結(jié)果仍應(yīng)能證明該方法具有相當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確性和可靠性，并應(yīng)以能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量為基本標(biāo)準(zhǔn)。如未經(jīng)必要的質(zhì)控分析方法驗(yàn)證或由擬定質(zhì)控分析方法構(gòu)成的制造及檢定規(guī)程難以控制產(chǎn)品質(zhì)量，則對于所申報(bào)品種的質(zhì)量可控性將無法評價(jià)。本文在某些關(guān)鍵參數(shù)上提出一些原則性的建議或要求，擬作為技術(shù)審評的一般原則，同時(shí)也可供申報(bào)單位在進(jìn)行相關(guān)研究工作時(shí)參考。生物制品具有多樣性和復(fù)雜性的特點(diǎn)，質(zhì)控分析方法也會各有特色，所以本技術(shù)審評一般原則不可能適用于每一個(gè)生物制品。這里只提出一些基本的原則，具體的驗(yàn)證方案可根

4、據(jù)這些原則制定。如進(jìn)行的相關(guān)研究工作與本原則（不包括推薦的驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案）不符，應(yīng)提供相應(yīng)的理由和依據(jù)。生物制品質(zhì)控分析方法的驗(yàn)證工作應(yīng)起始于研發(fā)工作之初，并貫穿于研發(fā)過程（包括臨床前及臨床研究）的始終。二、 生物學(xué)測定常用方法生物學(xué)測定系指采用生物學(xué)方法，以反映被測物的生物學(xué)特性為目的的測定方法。以下為生物學(xué)測定常用方法，根據(jù)具體情況，在產(chǎn)品的常規(guī)質(zhì)控時(shí)可采用其中的一種或幾種。鑒于一種測定方法僅能反映制品某一方面的特性，且方法的變異一般較大，為更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，必要時(shí)需同時(shí)采用多種方法進(jìn)行測定。（一）、酶反應(yīng)試驗(yàn)是指在體外能促進(jìn)酶分子的活化或本身具備酶的活性，通過底物的變化檢測酶活性。主要用于

5、酶、輔酶、激酶、激活劑、抑制劑等的活性測定。這類方法的變異相對較小，結(jié)果比較準(zhǔn)確。（二）、結(jié)合試驗(yàn)是基于產(chǎn)品與某種物質(zhì)的結(jié)合特性而設(shè)計(jì)的試驗(yàn)，如免疫結(jié)合試驗(yàn)。目前主要用于生物制品的鑒別。由于在結(jié)合試驗(yàn)中測定的分子不一定都具有生物活性，所以一般不用作制品的活性（或效力）測定。這類方法的變異也相對較小。（三）、細(xì)胞測定試驗(yàn)是指產(chǎn)品可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生可測定的應(yīng)答，如細(xì)胞增殖、聚集、分化、死亡、遷移或產(chǎn)生特定的化學(xué)物質(zhì)等。細(xì)胞測定試驗(yàn)一般能較好地反映制品的生物學(xué)活性，常用于各種生物制品的活性（效力）測定。與上述兩類方法相比，這類方法的變異較大。與使用傳代細(xì)胞相比，使用原代細(xì)胞的方法變異更大。（四）、動物

6、試驗(yàn)是指以整體動物為試驗(yàn)材料檢測制品生物學(xué)活性（或效力）的試驗(yàn)方法，如動物保護(hù)力試驗(yàn)，一般用于疫苗的效力測定。由于動物實(shí)驗(yàn)的成本高、周期長和變異大，所以一般僅用于成品檢定。對于某些治療用的制品，由于其作用機(jī)理或本身化學(xué)性質(zhì)的原因，難以建立體外測活的方法，也可以采用動物試驗(yàn)方法測定，但由于這類方法的變異一般相對較大，在進(jìn)一步的研究中應(yīng)盡可能以體外法代替。三、方法的來源（種類）根據(jù)質(zhì)控分析方法的來源，可將方法分為兩大類，即標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法。原則上，對于各類方法均需進(jìn)行驗(yàn)證，但依方法來源的不同對于驗(yàn)證的要求有所不同。（一）、標(biāo)準(zhǔn)方法（或正式方法、法定方法）一般是指已有國家標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控方法，WHO

7、推薦的質(zhì)控方法也可作為重要參考。此類方法在被確定為標(biāo)準(zhǔn)方法前已經(jīng)過了適當(dāng)?shù)尿?yàn)證。申報(bào)者應(yīng)說明方法的來源，并附具體方法。研制單位在首次采用此類方法前，也應(yīng)對該方法進(jìn)行適當(dāng)?shù)尿?yàn)證, 如進(jìn)行專屬性和精密度的驗(yàn)證，以便證明在實(shí)際的使用條件下該方法也是適用的。（二）、非標(biāo)準(zhǔn)方法1、標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法此類方法系指由申報(bào)者提出的可取代標(biāo)準(zhǔn)方法的替代方法。申報(bào)者在決定采用此類方法時(shí)應(yīng)持慎重的態(tài)度，并需提供表明新方法等同于或優(yōu)于原方法的依據(jù)以及全面的驗(yàn)證資料，包括兩種方法的比較性資料。2、來自參考文獻(xiàn)的方法是指在專業(yè)雜志或著作上發(fā)表并介紹的方法，一般要認(rèn)真對待此類方法，并需進(jìn)行全面的驗(yàn)證。應(yīng)說明參考文獻(xiàn)的出處，

8、附原文及譯文。3、自己建立的方法對于某些產(chǎn)品，尤其是創(chuàng)新性產(chǎn)品來講，由于缺少可參考的方法，通常需要自己建立一種新的分析方法，對于這類方法需進(jìn)行全面而嚴(yán)格的驗(yàn)證。四、分析方法生物制品質(zhì)控分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性與技術(shù)方法本身（包括方法的原理和方法的技術(shù)特點(diǎn)等）密切相關(guān)，所以應(yīng)首先詳述分析方法，包括：（一）、分析方法的原理闡明分析方法的原理。（二）、供試品應(yīng)說明如何取樣，包括每次測定時(shí)取樣的數(shù)量、如何取用（單支或多支混合）等。（三）、測試用儀器及參數(shù)列出所有測試用儀器及儀器的相關(guān)參數(shù)。（四）、測試用試劑列出所有測試用的試劑和規(guī)格，并說明其來源。如果某些試劑為自制或?qū)Σ少彽脑噭┻M(jìn)行了加工處理，則應(yīng)詳

9、述制備或處理過程。（五）、標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的配備詳述標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的來源和配備過程。標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的來源應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定。（六）、供試品的配備詳述待測樣品的配備過程（七）、測試過程按實(shí)驗(yàn)步驟詳述整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程，說明關(guān)鍵步驟的實(shí)驗(yàn)條件。（八）、計(jì)算盡可能以表格的形式顯示所獲取的數(shù)據(jù)，說明數(shù)據(jù)的處理方法，提供計(jì)算公式，并說明計(jì)算方法的出處及采用依據(jù)。（九）、結(jié)果報(bào)告說明結(jié)果報(bào)告的形式（十）、判定標(biāo)準(zhǔn)提供判定標(biāo)準(zhǔn)，說明判定標(biāo)準(zhǔn)的制定依據(jù)。五、分析方法的驗(yàn)證質(zhì)控分析方法的驗(yàn)證就是根據(jù)方法的需要測定該方法的專屬性、準(zhǔn)確性、精密度、線性、范圍、檢測限度、定量限度、耐用性等幾個(gè)指標(biāo)中的一個(gè)或幾個(gè)，用于不同檢測

10、目的的試驗(yàn)方法需進(jìn)行不同參數(shù)的測定，下表為各種檢測方法通常需測定的參數(shù)： 在對不同檢測方法進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，可根據(jù)檢測目的、方法的原理、方法的技術(shù)特點(diǎn)、被檢物的成分等設(shè)計(jì)具體的驗(yàn)證方案，以下為一般性的技術(shù)要求或建議。（一）、專屬性生物學(xué)測定方法的專屬性與測定方法及產(chǎn)品組成密切相關(guān)，所以應(yīng)首先從測試原理、測試用材料和供試品組成等方面分析方法的專屬性，進(jìn)而再進(jìn)行必要的驗(yàn)證。由于生物制品的性質(zhì)和組成多樣，檢定方法各不相同，難以提出統(tǒng)一的專屬性驗(yàn)證要求。下面以生物技術(shù)產(chǎn)品常用的幾種檢定方法為例，進(jìn)行具體分析及說明。1、如采用免疫印跡試驗(yàn)進(jìn)行生物制品的鑒別，應(yīng)首先對所使用抗體的特異性進(jìn)行分析；若供試品中還存在

11、其它組分，則應(yīng)進(jìn)一步驗(yàn)證被檢測物中其它物質(zhì)能否引起非特異性免疫反應(yīng)。2、如采用細(xì)胞測定方法檢測生物活性，應(yīng)首先說明被測物質(zhì)與特定的細(xì)胞應(yīng)答之間的相關(guān)性，如二者的相關(guān)性較好，則一般認(rèn)為該方法的特異性較好。為表明細(xì)胞測定方法的特異性，可進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，如加入抗體或特異抑制劑的封閉實(shí)驗(yàn)等。如果成品中加入了可能影響活性測定的輔料，應(yīng)進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證以排除此種影響。3、如采用 ELISA 法檢測重組產(chǎn)品的殘余宿主蛋白含量，可采用與表達(dá)體系相同的宿主細(xì)胞的蛋白作為免疫原制備抗體，若采用與產(chǎn)品相似工藝進(jìn)行處理后再免疫動物，則所獲得抗體的特異性更好。另外，產(chǎn)品中存在的大量目的蛋白可能影響殘余宿主蛋白的測定，

12、應(yīng)進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證以排除此種影響。（二）、準(zhǔn)確性對于化學(xué)藥品一般可采用填加和回收實(shí)驗(yàn)來測定，即對已知量的供試品進(jìn)行測定，比較測定值和真實(shí)值之間的差異。但對于生物制品而言，由于沒有純的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，往往難以獲得確切的準(zhǔn)確性數(shù)據(jù)，所以一般不需要準(zhǔn)確地測出該參數(shù)。然而，仍有一些問題與生物活性測定方法的準(zhǔn)確性密切相關(guān)，值得研究者注意。生物制品的生物學(xué)活性為相對活性，一般與同時(shí)進(jìn)行測定的標(biāo)準(zhǔn)品/參考品進(jìn)行比較而得，所以應(yīng)對單位有一個(gè)適當(dāng)?shù)亩x或以適用的標(biāo)準(zhǔn)品/參考品作為對照經(jīng)計(jì)算而得。為得到準(zhǔn)確的測定結(jié)果，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：1、必須同時(shí)測定供試品和標(biāo)準(zhǔn)品/參考品的劑量反應(yīng)曲線，而且兩條曲線必須具有平行性，即供試品

13、和標(biāo)準(zhǔn)品/參考品的活性成分僅是量的不同而沒有質(zhì)的區(qū)別。如果兩條曲線不具備平行性，則說明供試品和標(biāo)準(zhǔn)品/參考品中的活性成分可能不同或者該測試系統(tǒng)不具有適用性，這種情況下，將難以準(zhǔn)確計(jì)算出相對活性的結(jié)果。2、應(yīng)盡可能使供試品隨機(jī)分布及保證測試系統(tǒng)的平衡性。需對引起系統(tǒng)偏差的某些因素進(jìn)行分析排除，如不同的試驗(yàn)平板、平板的不同位置（如邊緣效應(yīng)）、檢測次序、動物實(shí)驗(yàn)中的籠子效應(yīng)等。（三）、精密度與理化測定方法相比，各種生物學(xué)測定方法的變異均較大，且不同類制品的生物學(xué)測定方法的變異也不同。對精密度的要求可根據(jù)產(chǎn)品的性質(zhì)、用途以及測定方法的特點(diǎn)有所區(qū)別。在測定方法與生物活性、藥理作用或效力相關(guān)性較好的情況下

14、，應(yīng)盡可能采用變異較小的測定方法。由于生物活性（或效價(jià)）測定是生物制品質(zhì)控中的主要指標(biāo)，該方法的可靠性會直接影響產(chǎn)品的可控性，所以對生物活性測定方法的精密度驗(yàn)證工作應(yīng)非常重視。如果在成品檢定項(xiàng)目中生物活性指標(biāo)是唯一的測定有效成分含量水平的指標(biāo)，則必須采用定量的測定方法，并盡可能減少方法的變異。對于不同測定方法，其精密度可有較大不同，一般情況下，酶法：小于 20%;結(jié)合試驗(yàn):小于 20%;細(xì)胞試驗(yàn):小于 30%;動物試驗(yàn):小于 50%。對于一些尚不成熟的試驗(yàn)方法或某些特殊方法（如噬斑試驗(yàn)），其方法變異可能會更大些。當(dāng)然，對于方法精密度的可接受標(biāo)準(zhǔn)還應(yīng)從多方面進(jìn)行考慮。比如，有些藥物的臨床效應(yīng)（包

15、括療效及不良反應(yīng)）對給藥劑量的變化非常敏感，這時(shí)需對生物活性測定方法的精密度提出更高的要求。（四）、線性應(yīng)在分析方法的范圍內(nèi)評價(jià)檢測結(jié)果與供試品中被分析物濃度（或含量）的線性關(guān)系?？捎盟ㄗh的方法，直接對標(biāo)準(zhǔn)品、供試品進(jìn)行測定。應(yīng)以信號對被分析物的濃度作圖，根據(jù)圖形是否呈線性進(jìn)行評價(jià)。如果有線性關(guān)系，可用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法估算試驗(yàn)結(jié)果。在某些情況下為使分析指標(biāo)和供試品濃度呈線性關(guān)系，可在回歸分析前對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換。應(yīng)提供相關(guān)系數(shù)、Y 軸上的截距、回歸線的斜率等數(shù)據(jù)，還可以分析實(shí)測值與回歸線的偏差（離散性），以助于對線性作出評價(jià)。對于某些生物學(xué)測定方法，在任何轉(zhuǎn)換后均不能證明呈線性，或呈線性關(guān)

16、系的范圍較小，在這種情況下，分析的響應(yīng)值可用供試品中被分析物的濃度（含量）的適當(dāng)函數(shù)表示?？梢圆捎们€擬合方法，通過測定全范圍曲線，在標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的矯正下，依 ED50 或 IC50值計(jì)算活性單位。應(yīng)提供擬合曲線方程及各參數(shù)，并提供相關(guān)系數(shù)。（五）、范圍具體的范圍一般根據(jù)檢測的目的而設(shè)定，并通常從線性研究中得到。驗(yàn)證時(shí)所設(shè)定的范圍應(yīng)至少包括了檢定標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的范圍，如標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定成品生物活性應(yīng)為標(biāo)示量的 80120，則驗(yàn)證的范圍可設(shè)定為標(biāo)示量的 70130。確定范圍的方法為：供試品濃度（含量）在范圍末端和范圍內(nèi)時(shí)，均能獲得滿意的線性、精密度和準(zhǔn)確性。 對于生物制品的生物活性測定而言，精密度、線性

17、和范圍是非常重要的驗(yàn)證參數(shù)。為減少驗(yàn)證工作的繁雜性，可將范圍研究與精密度、線性研究合并進(jìn)行（參見推薦的驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案）。（六）、耐用性在研制階段即應(yīng)進(jìn)行耐用性的評估，它應(yīng)能表明在方法的參數(shù)有微小改變時(shí)該分析方法仍然是可靠的。參數(shù)的改變可以是對溫度、濕度、培養(yǎng)時(shí)間、試劑的 pH 等進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，根據(jù)具體情況，可針對一個(gè)或幾個(gè)關(guān)鍵的參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。在每種試驗(yàn)條件下，均需對準(zhǔn)確性、精密度或其它參數(shù)進(jìn)行測定。生物學(xué)測定結(jié)果對分析條件往往比較敏感，耐用性研究的結(jié)果將建立一系列系統(tǒng)適用性參數(shù)，以確保在每一次實(shí)際測定中該方法都是有效的。（七）、檢測限度檢測限度的測定可以通過直觀法、信噪比法等測定。直觀法：對一

18、系列已知濃度分析物的供試品進(jìn)行分析，并以能測得被分析物的最小量來建立。信噪比法：將已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低量。一般可接受的信噪比為 3：1 或 2：1。（八）、定量限度定量限度的測定也可以通過直觀法、信噪比法等測定。直觀法：對一系列已知濃度被分析物的供試品進(jìn)行分析，在準(zhǔn)確性和精密度都符合要求的情況下，來確定被分析物能被定量的最小量。信噪比法：將已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低量。一般可接受的信噪比為 10：1。六、綜合分析 根據(jù)方法的來源、測試原理、方法的技術(shù)特點(diǎn)以及具體的驗(yàn)證結(jié)果等，對于質(zhì)

19、控分析方法 的準(zhǔn)確性和可靠性進(jìn)行綜合分析， 并評價(jià)由擬定的質(zhì)控分析方法構(gòu)成的制檢規(guī)程能否基本控 制產(chǎn)品質(zhì)量。 七、名詞解釋 準(zhǔn)確性（Accuracy）：分析方法的準(zhǔn)確性是指測定值與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值的一致性或 接近程度。 精密度（Precision）：分析方法的精密度是指在規(guī)定條件下對均質(zhì)供試品多次取樣進(jìn)行一 系列檢測結(jié)果的接近程度，一般表示為變異系數(shù)（CV），變異系數(shù)即是測定值的標(biāo)準(zhǔn)差 和測定值均數(shù)的比值。 精密度可以從三個(gè)層面考慮，即重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。 重復(fù)性（Repeatability）：是指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間隔的精密度。 中間精密度（Intermediate

20、precision）：是指在試驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，如不同日期、不同分 析者、不同儀器、不同批號或來源的實(shí)驗(yàn)材料等情況下的精密度。 重現(xiàn)性（Reproducibility）：是指不同實(shí)驗(yàn)室間的精密度，需通過多個(gè)實(shí)驗(yàn)室之間的協(xié)作 研究得到。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。 線性（Linearity）：分析方法的線性是指在給定的范圍內(nèi)檢測結(jié)果與供試品中被分析物的 成比例關(guān)系。 范圍（Range）：分析方法的范圍是能達(dá)到一定的準(zhǔn)確性、精密度和線性時(shí)被分析物的較 高和較低濃度（量）的一個(gè)區(qū)間。 專屬性（Specificity）：分析方法的專屬性是指當(dāng)制品中含有其它組分，如雜質(zhì)、降解物、 添

21、加物（如緩沖液、賦形劑、穩(wěn)定劑）等存在時(shí)，準(zhǔn)確可靠測定供試品的能力。 耐用性（Robustness）：分析方法的耐用性是指試驗(yàn)參數(shù)被有意進(jìn)行微小改變時(shí)，測量結(jié) 果不受影響的能力，用于說明通常使用條件下該分析方法的可靠性。 檢測限度（Detection limit）：分析方法的檢測限度是指供試品中的被分析物能夠被檢測到 的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。 定量限度（Quantitation limit）：分析方法的定量限度是指準(zhǔn)確性和精密度都能達(dá)到要求時(shí) 能夠定量測定供試品中被分析物的最低量。 八、參考文獻(xiàn) 1、ICH. Q2a Test on Validation of Analytical Pr

22、ocedures 2、ICH. Q2b Validation of Analytical Procedures ：Methodology 3、FDA. Analytical Procedures and Methods Validation Chemistry, Manufacturing, and Controls Documentation 4、WHO. WHO Guide to Good Manufacturing Practice Requirements，Part2：Validition 5、Heath AB.Statistical Validity of Bioassays.Dev

23、 Biol Stand，1999，97：151156 6、Lansky D.Validition of Bioassays for Quality Control. Dev Biol Stand，1999，97：157168 7、中國生物制品標(biāo)準(zhǔn)化委員會辦公室.2000. 國外生物制品管理和標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)） 8、王軍志.生物技術(shù)藥物研究開發(fā)和質(zhì)量控制.北京：科學(xué)出版社，2002 年.第 128 頁第 136 頁 九、附錄：推薦的驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案 以下為部分參數(shù)的驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案，供研究者參考： （一）、精密度 1、 重復(fù)性 目的：確定在同一個(gè)試驗(yàn)內(nèi)同一個(gè)供試品在測量范圍內(nèi)的不同濃度時(shí)測定的精密度。 步驟：配

24、制 3 個(gè)稀釋度的供試品（測量范圍內(nèi)的高、中、低濃度） 每一個(gè)稀釋度重復(fù)測定 10 次 計(jì)算每一濃度測定結(jié)果的均值和 SD 計(jì)算每一濃度的 CV 值 2、 中間精密度 目的：確定在不同試驗(yàn)間對測量范圍內(nèi)同一個(gè)供試品在不同濃度時(shí)測定的精密性。 步驟：配制 3 個(gè)稀釋度的供試品（測量范圍內(nèi)的高、中、低濃度） 在 3 個(gè)試驗(yàn)中對每一個(gè)稀釋度重復(fù)測定 3 次 測定不同工作日間的變化，測定不同批號的 試驗(yàn)材料間的變化，測定不同實(shí)驗(yàn)員間的變化等等 計(jì)算每一試驗(yàn)中每一濃度測定結(jié)果的均值和 SD 計(jì)算試驗(yàn)間每一濃度的 CV 值 （二）、線性和范圍 目的：測定觀測值響應(yīng)關(guān)系的擬合度 步驟：在測量范圍內(nèi)配制 6-

25、8 個(gè)稀釋度 每一稀釋度測定 3 次，每次重復(fù)測定 3 份 進(jìn)行回歸分析并計(jì)算試驗(yàn)的相關(guān)系數(shù) r 十、起草說明 （一）、起草背景 在我國生物藥物研究的起步階段， 由于各方面條件的限制， 對于質(zhì)控方法驗(yàn)證工作不夠重 視， 而且以往申報(bào)的品種大多為較成熟的生物制品， 有國內(nèi)外已上市產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)作為參 考， 所以對于檢定方法的驗(yàn)證工作也并未加以強(qiáng)調(diào)。 然而隨著國內(nèi)生物技術(shù)研究水平的提高 以及生物藥物研發(fā)工作的進(jìn)一步開展， 質(zhì)控分析方法的驗(yàn)證工作已日益凸現(xiàn)其重要性和必要 性。 2002 年頒布施行的藥品注冊管理辦法中，增加了關(guān)于檢定方法驗(yàn)證的資料項(xiàng)目要求， 但是對于如何進(jìn)行質(zhì)控方法的驗(yàn)證工作尚無明確

26、的規(guī)定。 因此， 進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)此項(xiàng)工作的重要 性并明確有關(guān)技術(shù)規(guī)范，是我們審評工作的當(dāng)務(wù)之急。 （二）、起草的指導(dǎo)思想和一般原則 鑒于目前國內(nèi)相關(guān)的研究基礎(chǔ)較薄弱， 在起草本技術(shù)審評一般原則時(shí)， 主要關(guān)注了一些重 點(diǎn)和難點(diǎn)的問題， 所提要求以適量和適度為原則， 以解決或初步解決目前質(zhì)控中存在的主要 問題為目的，并力求具有實(shí)用性和可操作性。 生物制品質(zhì)控中采用的方法包括理化分析方法和生物學(xué)測定方法（bioassay）。其中，理 化分析方法的驗(yàn)證原則與化學(xué)藥品基本相同， 所以可參照 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證 技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行，當(dāng)然在進(jìn)行具體驗(yàn)證時(shí)，還需要結(jié)合生物制品的特點(diǎn)考慮。生物制品 主要在生

27、物學(xué)測定驗(yàn)證工作方面具有一定特殊性，所以為突出重點(diǎn)、避免重復(fù)，本技術(shù)審評 一般原則僅對生物學(xué)測定方法的驗(yàn)證工作進(jìn)行了討論。 尤其是在生物活性測定方面， 由于目 前存在的問題較多，所以本原則將生物活性測定的驗(yàn)證工作作為重點(diǎn)進(jìn)行闡述。 生物制品具有多樣性和復(fù)雜性的特點(diǎn)， 質(zhì)控分析方法也會各有特色， 所以在起草本技術(shù)審 評一般原則時(shí)，不求適用于每一個(gè)生物制品，在很多方面只是提出了一些基本的原則，或舉 一些典型的例子進(jìn)行分析和說明。 研制單位可根據(jù)這些原則， 結(jié)合自身產(chǎn)品和測定方法的特 點(diǎn)，確定具體的驗(yàn)證方案。如進(jìn)行的相關(guān)研究工作與本原則（不包括推薦的驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案） 不符，只要能提供較充分的理由和依據(jù)

28、，在審評時(shí)也可被接受。 （三）、有關(guān)數(shù)據(jù)和資料來源的說明 關(guān)于質(zhì)控分析方法的驗(yàn)證，ICH、FDA 等均出臺了相關(guān)的指導(dǎo)原則，中國藥典也已 收載了藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證內(nèi)容， 但上述指導(dǎo)原則主要針對化學(xué)藥品而言， 很多內(nèi)容 和要求不完全適用于生物制品，尤其不太適用于生物學(xué)測定方法。WHO 的相關(guān)文件主要是 針對生物學(xué)測定方法的，但缺少具體的方法和內(nèi)容，其驗(yàn)證原則與化學(xué)藥基本一致。 本原則參考了國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，在此基礎(chǔ)上，根據(jù)生物學(xué)測定方法自身的特點(diǎn)、目前國內(nèi) 生物制品質(zhì)控分析方法中存在的主要問題以及國內(nèi)研究水平的實(shí)際等， 闡述了有關(guān)方法驗(yàn)證 中的主要關(guān)注點(diǎn)，對于每一個(gè)驗(yàn)證參數(shù)，提出了一般性的建

29、議和要求。 （四）、主要內(nèi)容設(shè)置說明 由于生物學(xué)測定方法的準(zhǔn)確性和可靠性與方法來源和方法本身密切相關(guān)， 所以作為驗(yàn)證工 作的前提，應(yīng)首先提供方法的來源及具體測定方法。另外，分析方法的驗(yàn)證工作最終是為了 保證產(chǎn)品的質(zhì)量可控，以此為目的，各種質(zhì)控分析方法之間存在著一定的內(nèi)在聯(lián)系，所以在 評價(jià)驗(yàn)證工作時(shí)，需對各種方法及其驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合分析和評價(jià)。基于此種考慮，本原則 的基本內(nèi)容中除分析方法的驗(yàn)證之外，還列出了方法的來源、分析方法和綜合分析等內(nèi)容。 對于生物活性測定而言，精密度、線性和范圍是非常重要的驗(yàn)證參數(shù)，所以本原則不但提 出了一般性的驗(yàn)證要求，而且附上了推薦的驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案（參照 WHO 的建議

30、），供研制 單位參考。 （五）、關(guān)于幾個(gè)驗(yàn)證參數(shù)的說明 1、精密度 由于各種生物活性測定方法的變異均較大， 所以精密度往往不太理想。 對于一些新建立的 活性測定方法而言， 測定結(jié)果不穩(wěn)定、 難以進(jìn)行定量及無法準(zhǔn)確標(biāo)示等問題已成為質(zhì)控中的 主要問題。針對上述情況，本技術(shù)審評一般原則擬強(qiáng)調(diào)，作為測定有效成分含量水平的生物 活性指標(biāo)，需采用定量的測定方法，并盡可能減少方法的變異。參照國外的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對各 種測定方法，提出了一般的變異范圍。 經(jīng)課題研究組討論認(rèn)為，本原則中所提出的變異范圍，一般情況下均可以做到。對于個(gè)別 難以做到的， 可結(jié)合制品特性及其臨床效應(yīng)等進(jìn)行綜合評估。 經(jīng)廣泛征求企業(yè)界的意見后認(rèn) 為，對于部分創(chuàng)新性產(chǎn)品來講，活性測定方法的建立有很大難度，在研究之初方法的變異往 往較大，可能會超出本原則中的 CV 范圍，從鼓勵創(chuàng)新的角度考慮可予適當(dāng)靈活考慮，但 應(yīng)基本不影響對于產(chǎn)品安全有效和可控性的評價(jià)。 鑒于生物學(xué)測定方法的多樣性和復(fù)雜性， 本原則的正文中未對精密度測定