HPLC法測定壯藥劍葉龍血樹中7-羥基-4′-甲氧基黃烷和紫檀茋

1、中草藥Chinese Traditional and Herbal Drugs第 44 卷 第 17 期 2013 年 9 月· 2471·HPLC法測定壯藥劍葉龍血樹中7-羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋閔建國1, 3 ，周艷林2, 3，鄒準(zhǔn) 3，尹文清1*，劉華鋼2 ，鄒節(jié)明3*1. 廣西師范大學(xué)藥用資源化學(xué)與藥物分子工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林5410042. 廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧 5300213. 桂林三金藥業(yè)股份有限公司，廣西桂林 541004摘要：目的建立一種同時測定壯藥劍葉龍血樹中7-羥基 -4 -甲氧基黃烷和紫檀茋的方法。方法采用 HPLC 法，色譜

2、柱為 YMC pack ODS-AQ C 18（150 mm×4.6 mm ，5 m），乙腈 -0.2% 磷酸（ 3664）為流動相，檢測波長分別為281、306 nm，柱溫 35 。結(jié)果7-羥基 -4-甲氧基黃烷、 紫檀茋分別在0.407 61.528 5 g（ r0.999 8）、1.640 8 6.153 0 g（r 0.999 7）內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率分別為97.88%、97.10%，RSD 分別為 0.82%、0.59%。結(jié)論該方法操作簡便、重復(fù)性好，可用于劍葉龍血樹及其提取物的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞： 劍葉龍血樹；中圖分類號： R286.0227- 羥基 -4-甲

3、氧基黃烷；紫檀茋；質(zhì)量控制；HPLC文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號： 0253 - 2670(2013)17 - 2471 - 03DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.17.024Simultaneous determination of 7-hydroxy-4 -methoxyflavane and pterostilbene in Zhuang Medicine Dracaena cochinchinensis by HPLCMIN Jian-guo 1, 3, ZHOU Yan-lin 2, 3, ZOU Zhun 3 , YIN Wen-qing 1, LI

4、U Hua-gang 2, ZOU Jie-ming 31. Key Laboratory for Chemistry and Molecular Engineering of Medicinal Resources, Guangxi Normal University, Guilin 541004, China2. School of Pharmaceutical Sciences, Guangxi Medical University, Nanning 530021, China3. Guilin Sanjin Pharmaceutical Co., Ltd., Guilin 541004

5、, ChinaAbstract:ObjectiveTo establish a method for the determination of 7-hydroxy-4-methoxyflavane and pterostilbene inZhuangMedicine Dracaena cochinchinensis. Methods The determination was developed on C18 column. Acetonitrile-0.2% phosphoric acid (36 : 64) was used as mobile phase and the detectiv

6、e wavelength was set at 281 and 306 nm, respectivelyResults. The linear ranges of7-hydroxy-4 -methoxyflavane and pterostilbene were 0.407 6 1.528 5 g ( r = 0.999 8) and 1.640 8 6.153 0 g ( r = 0.999 7),respectively. The average recovery was 97.88% (RSD = 0.82%) and 97.10% (RSD = 0.59%), respectively

7、.ConclusionThe methodis simple and accurate, which could be used for the quality control of D. cochinchinensis and its extract.Key words: Dracaena cochinchinensis (Lour.) S. C. Chen; 7-hydroxy-4 -methoxyflavane; pterostilbene; quality control; HPLC劍葉龍血樹是百合科植物劍葉龍血樹代研究表明劍葉龍血樹主要含有黃酮類、二苯乙烯Dracaena cochi

8、nchinensis (Lour.) S. C. Chen 的含脂類、甾醇類、皂苷類等化合物，具有抗菌、抗炎、木材，收載于廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)第抗氧化、鎮(zhèn)痛、止血、活血等藥理作用2 。有關(guān)原1 卷，壯藥名為榧勒壟，具有活血散瘀、定痛止血、藥材劍葉龍血樹的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究報道較少，而斂瘡生肌等功效，用于跌打損傷、瘀血作痛、婦女有關(guān)其提取物龍血竭的質(zhì)量控制也多集中在測定二氣血凝滯、外傷出血和膿瘡久不收口1 ；主產(chǎn)于廣氫查耳酮的代表性成分龍血素A 和龍血素 B 3 ，對西、云南石灰?guī)r地區(qū)，用作提取龍血竭的原料?，F(xiàn)其中低極性代表性成分黃烷類、二苯乙烯類的質(zhì)量收稿日期： 2013-05-14基金項(xiàng)

9、目： 廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目（桂科攻0630002-2M ，10124000-15）；廣西醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)人才小高地資助項(xiàng)目（0802）作者簡介： 閔建國，男，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)與質(zhì)量控制。Tel: (0773)5843106 E-mail:67493023*通信作者尹文清Tel:(0773)5826789 E-mail:yinwq0000鄒節(jié)明Tel:(0773)5842588 E-mail:zjm· 2472·中草藥Chinese Traditional and Herbal Drugs第 44 卷 第 17 期 2013 年 9 月控制研究尚未見報道。研究表明紫檀茋

10、具有顯著的抑菌和抗氧化作用，也是劍葉龍血樹藥材及其提取物中的主要成分4 。本實(shí)驗(yàn)以分離純化得到的7-羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋為對照品， 采用高效液相色譜建立其測定方法，可以更全面評價藥材及相關(guān)提取物的質(zhì)量。1 儀器與試藥Waters 2695 高效液相色譜儀， DAD 二極管列陣檢測器（ Waters，美國）； BUG 40 超聲儀（必能信，上海 Branson）。劍葉龍血樹均采自廣西崇左，經(jīng)桂林三金藥業(yè)股份有限公司鐘小清工程師鑒定為劍葉龍血樹Dracaena cochinchinensis (Lour.) S. C. Chen 的含脂木 材 （ 批 號 20080901 、 20090

11、101 、 20090201 、20090301 、 20110901 、 20110902 、 20110903 、20120201）；紫檀茋、 7-羥基 -4-甲氧基黃烷對照品均為自制（質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于 98%）。乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱： YMC pack ODS-AQ C18（150 mm × 4.6mm， 5 m）；流動相：乙腈 -0.2% 磷酸（ 36 64）；體積流量： 1 mL/min ； 7- 羥基 -4 -甲氧基黃烷檢測波長為 281 nm ，紫檀茋檢測波長為306 nm ；柱溫：35 ；在上述色譜條件下， 7-羥基 -4

12、-甲氧基黃烷和紫檀茋對應(yīng)的保留時間為35.8 min 和 41.7 min ，分離度良好，色譜圖見圖1。2A101020304050B2101020304050t / min1-7-羥基 -4 -甲氧基黃烷2- 紫檀茋1-7-hydroxy-4 -methoxyflavane 2-pterostilbene圖 1 混合對照品 (A) 及劍葉龍血樹 (B) 的 HPLC 色譜圖Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A) and D. cochinchinensis (B)2.2對照品溶液的制備分別精密稱取 60 干燥至恒

13、質(zhì)量的 7-羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋適量，置棕色量瓶中，加甲醇超聲溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品儲備溶液（質(zhì)量濃度分別為 1.019 mg/mL 和 2.051 mg/mL ）。分別吸取 7- 羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋的儲備液各 1 mL 和 2 mL 移至 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為混合對照品溶液。2.3供試品溶液的制備精密稱取劍葉龍血樹粉末（過3 號篩）約 0.5 g，置具塞錐形瓶中，加入三氯甲烷20 mL，稱其質(zhì)量，超聲處理 45 min，放冷，稱其質(zhì)量，加三氯甲烷補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL ，蒸干，殘?jiān)眉状? mL 使溶解，作為供

14、試品溶液。2.4線性關(guān)系考察精密吸取混合對照品溶液4 、6、8、10、15 L注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得 7-羥基 -4-甲氧基黃烷回歸方程為： Y 1.074× 105X 1.129× 105（ r 0.999 8）；紫檀茋回歸方程為：Y 6.878× 107 X 2.566 × 105（ r 0.999 7 ）。結(jié)果表明， 7- 羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋分別在 0.407 61.528 5 g 和 1.640 86.153 0g 與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.5精密度試驗(yàn)精密稱取劍葉龍血樹粉末（過 3 號篩

15、）約 0.5 g，制備供試品溶液，進(jìn)樣10 L ，重復(fù)進(jìn)樣6 次，測定 7- 羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋的峰面積，分別計算質(zhì)量分?jǐn)?shù)，測得質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD 分別為 0.03%、0.12%。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取劍葉龍血樹粉末 （過 3 號篩）約 0.5 g，制備供試品溶液， 室溫下放置， 分別于 0、4、8、16、24、48 h 精密吸取供試品溶液10 L ，測定 7-羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋的峰面積值，并分別計算質(zhì)量分?jǐn)?shù)，測得其質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD 值分別為1.03% 、0.41%，表明供試品溶液在48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.7 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批劍葉龍血樹粉末（過3號篩）6份，

16、分別制備供試品溶液， 分別測定并計算7-羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋的量，測得樣品中7-羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.329%、1.685%， RSD 分別為 1.36%、 1.04%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。中草藥 Chinese Traditional and Herbal Drugs第 44卷第 17期2013年 9 月· 2473·2.8加樣回收率試驗(yàn)取較多非測定成分，干擾目標(biāo)成分的檢測，故選擇精密稱取已測定的劍葉龍血樹粉末（過 3 號篩）三氯甲烷作為提取溶劑，經(jīng)超聲處理能夠有效地提0.25 g，平行 6 份，置具塞錐形瓶中， 分別精密加入

17、取目標(biāo)成分。7-羥基 -4-甲氧基黃烷 （ 0.917 mg/mL ）對照品溶液 1由于待測成分的極性相對較小，經(jīng)不同流動相mL 和紫檀茋 （2.138 mg/mL ）對照品溶液2 mL ，制配比，發(fā)現(xiàn)以乙腈 -0.2% 磷酸（36 64）作為流動相，備供試品溶液，測定并計算加樣回收率，7- 羥基 -4-目標(biāo)峰的分離度良好、保留時間合適。甲氧基黃烷和紫檀茋的平均回收率分別為97.88%、紫外光譜掃描發(fā)現(xiàn)，紫檀茋、 7- 羥基 -4-甲氧基97.10%， RSD 分別為 0.82%、 0.59%。黃烷最大吸收波長分別為306、281 nm ，若在單一2.9樣品測定波長下測定，對吸收峰影響較大，故

18、利用DAD 檢取各批次劍葉龍血樹粉末 （過 3 號篩）約 0.5 g，測器，采取變換波長法，分別在各自最大吸收波長各 3份，精密稱定，按“ 2.3”項(xiàng)下方法制備供試品下測定。溶液，分別測定其中 7-羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋劍葉龍血樹在受到真菌侵染后才形成的樹脂，的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表1。是自身應(yīng)激反應(yīng)而產(chǎn)生的植物防衛(wèi)素，其主要成分表 1 7- 羥基 -4-甲氧基黃烷和紫檀茋的質(zhì)量分?jǐn)?shù)( n = 3)類型包括二氫查耳酮、黃烷、異黃烷、二苯乙烯等Table 1 Determinationof 7-hydroxy-4 -methoxyflavane化合物，研究發(fā)現(xiàn)紫檀茋是其中主要抗氧化活性成and pterostilbene in samples ( n = 3)分。本研究建立的低極性成分7-羥基 -4-甲氧基黃烷批次 7- 羥基 -4-甲氧基黃烷 / %紫檀茋/%和紫檀茋的測定方法，可為建立劍葉龍血樹藥材及20080901 0.3291.69其提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。20090101 0.3411.5320090201 0.3171.65參考文獻(xiàn)20090301 0.3251.781廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)S. 2008.20110901 0.2171.122何 蘭 , 王竹紅 , 屠鵬飛 , 等. 龍