菠菜中草酸的提取及含量測定

1、菠菜中草酸的提取及含量測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)會沉淀法提取操作，進(jìn)一步熟悉過濾，離心，提取等操作，掌握均勻沉淀法的原理。2 學(xué)習(xí)文獻(xiàn)資料的查閱方法，學(xué)會制定實(shí)驗(yàn)方案，綜合運(yùn)用各種分析方法解決實(shí)際問題。3學(xué)習(xí)食品采樣方法，綜合分析菠菜中草酸的含量分布情況。二、實(shí)驗(yàn)原理草酸是一種二元羧酸 , 是植物體內(nèi)普遍存在的一種組分 , 在菠菜、莧菜、生菜等許多蔬 菜作物體內(nèi) 都有較高的含量。 從環(huán)境毒理學(xué)和食品營養(yǎng)學(xué)角度看 , 草酸在蔬菜作物可食部位 的大量累積會影響到人 類的身體健康。本實(shí)驗(yàn)采用靈敏度較高的比色法測菠菜中草酸含量。采用 722 型分光光度計(jì)法測定，F(xiàn)e 在 pH 值 1.8? 2.5 的 KC

2、I- HCI 緩沖液中與磺基水楊酸 （SSAL ）和草酸均生成絡(luò)合物,Fe3 +和草酸的絡(luò)合物能使 Fe 3+與磺基水楊酸的紫色絡(luò)合物顏色變淺，測定 Fe3+的磺基水楊酸絡(luò)合物的吸光度 , 隨著草酸量的增加而降低 , 據(jù)此可計(jì)算出樣品中草酸根的含量。三、儀器與試劑儀器部分：榨汁機(jī)， 722 型分光光度計(jì) ，水浴鍋，電子天平 ，臺秤，100mL 容量瓶 3 個(gè)， 250mL 容量瓶 4個(gè)， 200mL 燒杯 2 個(gè)， 500mL 燒杯 2個(gè)，離心機(jī)及離心管， 長頸漏斗，鐵架臺， 濾 紙。試劑部分：新鮮菠菜，磺基水楊酸（分析純）（s）, FeCl3 （s），草酸鈉 （s），KCI（s），12moI

3、/L濃鹽酸， 0.5mol/L 稀鹽酸，去離子水 ， pH 試紙。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）樣品制備1 鐵標(biāo)準(zhǔn)液的配制 （0.5 mg/ mL ）:稱取 0 .4 g FeCl 3于 500mL 燒杯中 ，加去 250mL 離子 水溶 解。2磺基水楊酸 （ SSAL ） 的配制 （ 0 .5% ） ：稱取 0 .5 g 磺基水楊酸 （ 分析純） 于 100 mL 容 量瓶中 ， 加水稀釋至刻度。3 草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液的配制 （ 2 mg/ mL ） : 稱取 0 .2 000 g 草酸鈉于 200 mL 燒杯中 ， 加去離 子 水， 稍加熱 ， 使其溶解 ， 移入 100 mL 容量瓶用去離子水定容。4.

4、緩沖液的配制 （pH 值 2）:稱取 3.7g 左右 KCl 于 500 mL 燒杯中 ，加去離子水少量 ，在 水浴鍋 上微熱溶解 ，加 12mol/L 濃鹽酸用 pH 試紙使 pH 值為 2移入 250 mL 容量瓶中 ，用去離 子水稀釋至刻 度。5. 草酸的待測液制備： 將菠菜在去離子水中洗滌 2 次， 晾干。 稱取菠菜可 食部分 100 g, 加入 100 mL 水，壓榨 2? 3 min, 每 2g 勻漿折算為 1 g 試樣，稱取 1份勻漿 50 g，用 100 mL 水 洗入 250 mL 容量瓶，加入 0.5mL 濃度為 0.5mol/L 的 HCI 溶液，澄清，臵于 70? 80

5、 C水浴 上加 熱 30 min ， 其間搖動(dòng)數(shù)次 ，取出冷卻 ， 加水至刻度 ，搖勻過濾。將濾液經(jīng) 10000r/min 離心 10min , 得到的即是草酸待測液。6. 比色法測定菠菜中草酸含量的條件研究 2 該最大吸收波長即為測定時(shí)所要選擇的最佳波長508nm 。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 按照以上確定的條件 , 按下列順序：加液: 2mL Fe 3+, 20mL 緩沖液 ， 1.2 mL 磺基水楊酸 , 從容量瓶中依次取出已經(jīng)配制的 Na2C2O4 溶液體積為 ：0、0.1、0. 2、0. 4、0. 8 mL, 再用蒸餾水定容至 100mL 容量瓶中。顯 色 30min 后，以蒸 餾水為參比液 ，

6、 在 508nm 波長處進(jìn)行比色測定。根據(jù)測定結(jié)果（見表一），繪制草酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線 ，通過計(jì)算機(jī)擬合 ， 獲得該標(biāo)準(zhǔn)曲線 A 關(guān)于 x 的方程。其中式中 ， x 為顯色體 系的草酸的質(zhì)量濃度（ mg/mL ） , A 為吸光度。7. 菠菜中的待測液中草酸含量的測定：用菠菜待測液替換草酸根溶液，依次取 0,0.2, 0. 4, 0.6 mL 用蒸餾水定容至 100mL 容量瓶中。顯色 30min 后，以蒸餾水為參比液 ，在 510 nm 波長處進(jìn)行比色測定其余按照制作標(biāo)準(zhǔn)曲 線相同的 方法 ， 進(jìn)行顯色反應(yīng) ， 并測定其吸光度 ， 填入表二。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 ， 計(jì)算待測液中草酸含量。五、實(shí)

7、驗(yàn)數(shù)據(jù)處理FeCl 3： 0 .4 g磺基水楊酸 ：0.5gNa2C2O4： 0.2275gKCl : 3.7534gNa2C2O4 濃度的計(jì)算 ，以第二份為例 ：3 -3x=0.2275 g x 10 /100mL x 0.1mL/50mL=4.55 x 10 mg/mLX量 組 1 別、Fe 3+溶液- 的體積 /( mL)緩沖液的體 積 /(mL)磺基水楊酸 的體積 /(mL)Na2C2O4 的濃 度 x /(mg/mL)吸光度A2201.200.2702201.24.55 x 10-30.2192201.29.10 x 10-30.206n2201.2-21.82 x 1020.116

8、2201.23.64 x 10-20.049表一用 origin 軟件繪制的草酸含量標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度 A 與草酸的質(zhì)量濃度 x(mg/mL) 的線性方程A=0.25397-6.00549x菠菜草酸代替草酸鈉得到的吸光度波長 (nm)508508508508菠菜待測液體積0.000.200.400.60吸光度0.2310.2100.1650.161由 A=0.25397-6.00549x當(dāng)體積為 0.20mL 時(shí) ,A=0.2100.210=0.25397-6.00549x得 x=0.00732mg/mL草酸質(zhì)量 w=x x 50mL/0.2mL x 250mL=475.5mg 實(shí)際取了 25g

9、菠菜 ，所以 100g 菠菜含草酸的質(zhì)量m=wx 100g/25=1.83g六、誤差分析1 雜質(zhì)過程中 ， 菠菜未完全榨汁 ， 造成草酸不能盡數(shù)提取 ， 從而造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果比真實(shí)結(jié)果 偏低一點(diǎn)。2. pH 對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大影響 ，而實(shí)驗(yàn)過程中 pH 與反應(yīng)的最適 pH 有一定偏差。3. 在顯色過程中 ， 未等到顯色完全 ，就進(jìn)行了比色測定 ，導(dǎo)致偏差。4?移取溶液過程中由于無1mL 吸量管 ，造成測量結(jié)果不夠精確。七、注意事項(xiàng)1. 比色實(shí)驗(yàn)的選擇 ：在顯色 30min 后進(jìn)行比色較合適。2. 在比色測定時(shí) ， 都是要以蒸餾水為參比溶液 ，注意不能用 1 號溶液作為參比。3. 加液時(shí)要按順序加入，

10、分光分度計(jì)使用之前要預(yù)熱。4. 用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測草酸含量時(shí)注意草酸的濃度要在線性范圍內(nèi)。5. 要使吸光度控制在 0.05? 0.8,這樣才能提高準(zhǔn)確度。6. 為了使草酸提取完全 ，應(yīng)將菠菜的榨汁在 70? 80C下水浴加熱 ，并加入適量鹽酸。 參考文獻(xiàn)：1 曾芳，劉忠珍，許桂芝，王榮輝，歐俊 . 蔬菜中不同形態(tài)草酸的提取測定 期刊論文 - 食品科學(xué) 2009(16)2 段立珍 ， 汪建飛 ， 趙建榮 . 比色法測定菠菜中草酸含量的條件研究3 NOONAN S C ， SAVAGE G P. Oxalate content of foods and its effect on humansJ. Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition ， 1999 ，