上?？迫AHBsAg-ELISA兩步法概要

1、醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁1、檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目中請(qǐng)：乙型肝炎病毒表面抗原（縮寫HBsA。測(cè)定；組合項(xiàng)目申請(qǐng)：肝炎標(biāo)志物檢查組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2、 樣本采集與處理2.1 樣本采集2.1.1 常規(guī)靜脈采血約2ml,不抗凝，置普通試管中，或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿，用肝素、EDTAS枸檬酸鹽抗凝。2.1.2 檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血樣本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1.3 急診樣本采集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫樣本采集時(shí)間。2.1.4 樣本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人

2、負(fù)責(zé)樣本的接收并記錄樣本的狀態(tài)，對(duì)不合格樣本予以拒收。2.1.5 下列樣本為不合格樣本2.1.5.1 樣本量不足：少于0.3ml的全血樣本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2 對(duì)檢測(cè)結(jié)果可能有干擾的樣本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的樣本。2.1.5.3 無法確認(rèn)樣本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4 其他如標(biāo)識(shí)涂改、樣本試管破裂等。2.2 樣本保存2.2.1 接收樣本后放置1-2h后將樣本離心分離出血清或血漿，避免溶血。離心必須達(dá)到3000rpm15min,離心后的血清中不能含有顆粒物和微量纖維蛋白。2.2.2 樣本保存時(shí)間：室溫（15-25C）下可穩(wěn)定48h,普通冰箱中（2-8C）穩(wěn)定

3、7d,在-20C最多可保存4周。避免反復(fù)凍融。不可使用熱滅活的樣本。2.2.3 已完成測(cè)試的樣本保持完整的識(shí)別號(hào)，置4-8C冰箱內(nèi)保存7do2.3 樣本采集的注意事項(xiàng)采血前使受檢者保持平靜、松弛，避免劇烈活動(dòng)。醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁3.檢驗(yàn)原理本試劑盒采用抗-HBs包被反應(yīng)板，加入待測(cè)樣本，經(jīng)孵育后，加入抗-HBs-HRP；當(dāng)樣本中存在HBsA*寸，該HBsAgpf包被抗-HBs結(jié)合并與抗-HBs-HRP結(jié)合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP復(fù)合物，加入TMB®物產(chǎn)生顯色反應(yīng)

4、，反之則無顯色反應(yīng)。4 .試劑及其他用品4.1 試劑：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)），試劑盒藥品批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字S10910114（48人份）；國(guó)藥準(zhǔn)字S10910113（96人份）。未打開的試劑盒保存于2-8C,不可凍存。開啟的包被反應(yīng)板放入干燥劑密封后在4.2 試劑盒組分微孔反應(yīng)板HBsAg陽性對(duì)照顯色劑A終止液封片紙4.3 其他試劑及用品加液器：型號(hào)離心機(jī)：型號(hào)2-8C保存并盡快使用。HBsAg陰性對(duì)照酶結(jié)合物顯色劑B洗滌液（蒸儲(chǔ)水1:25稀釋）說明書溫箱（或水浴箱）：型號(hào)。洗板機(jī)：型號(hào)。酶標(biāo)儀：型號(hào)。5 .室內(nèi)質(zhì)控與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則5.1 質(zhì)控品：采用

5、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心臨床免疫室或其他單位提供的免疫質(zhì)控血清，濃度IU/ml醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁5.2質(zhì)控品重建方法：采購(gòu)來的質(zhì)控品按每周用量分裝-20C凍存，復(fù)融后充分顛倒混勻。5.3 質(zhì)控品測(cè)定：在每一次(板)樣本中測(cè)定質(zhì)控血清。5.4 質(zhì)控規(guī)則：繪制質(zhì)控圖，求出SD和CV值。6 .檢測(cè)步驟(1)洗滌液配制：將濃縮洗滌液用蒸儲(chǔ)水(或去離子水)作1:25稀釋。(2)加樣加入75微升待測(cè)樣本和陰、陽性對(duì)照于反應(yīng)孔中(共預(yù)留陰性對(duì)照3孔、陽性對(duì)照1孔、建議預(yù)留空白對(duì)照1孔。)，用封片紙覆蓋反應(yīng)板后，將

6、反應(yīng)板置37c孵育60分鐘。(3)取出反應(yīng)板，撕去封片，在已加入待測(cè)樣本和陰、陽性對(duì)照的孔中加入50微升酶結(jié)合物；在微孔震蕩器上震蕩10秒鐘，或手工輕輕震蕩10秒鐘；用封片紙覆蓋反應(yīng)板后，將反應(yīng)板置37c孵育30分鐘。(4)洗板手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置30-60秒，甩干，重復(fù)5次后，在干凈的吸水紙上拍干。洗板機(jī)洗板：采用洗板機(jī)洗板，選擇洗滌5次程序，用配置的工作濃度洗滌液注滿每孔，每次工作濃度洗滌液在反應(yīng)微孔中的停留時(shí)間為30-60秒，并確保每次吸凈無殘留，洗完后在干凈的吸水紙上拍干。(5)顯色每孔加顯色劑A液、B液各50微升，充分混勻后封板，置37c孵育30分鐘。(6)

7、終止每孔加入50微升終止液，震蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充分混勻醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁（7）比色使用酶標(biāo)儀，波長(zhǎng)450nmi（建議使用雙波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀比色，參考波長(zhǎng)630nm或630nm相近的波長(zhǎng)。）若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對(duì)照孔校零，然后讀取各孔ODfi。7 .結(jié)果判斷Cutoff值計(jì)算：COV=性對(duì)照平均ODfi+0.100當(dāng)S/CO>1.0,說明該待測(cè)樣本HBsA謝果為陽性。當(dāng)S/COV：1.0,說明該待測(cè)樣本HBsA時(shí)果為陰性。8 .檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍8.1 結(jié)果的報(bào)告8.1.

8、1 結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。8.1.2 報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的信息。8.1.3 如收到樣本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。8.2 臨界值：對(duì)臨界值樣本或陽性樣本再以雙孔重復(fù)試驗(yàn)確定它的結(jié)果。如果重復(fù)檢測(cè)都是臨界性結(jié)果的樣本建議對(duì)其進(jìn)行跟蹤檢測(cè)。9 .操作性能9.1 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒需平衡至室溫后方可使用，余者應(yīng)按前述方法保存和使用。在平衡試劑的同時(shí)，待測(cè)樣本需平衡至室溫后再行測(cè)試。9.2 使用前試劑應(yīng)搖勻。9.3 顯色過程必須封片。所有封片紙不能重復(fù)使用。9.4 結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成

9、。9.5 不同批號(hào)的試劑不可混用。9.6 洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)時(shí)常檢查加液頭，確保其暢通無堵塞；洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。洗板機(jī)的管路用純化水沖洗，以防堵塞和腐蝕。醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁9.7 待測(cè)樣本不可用NaN防腐。9.8 本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程處理10 .參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平陰性結(jié)果：提示沒有檢測(cè)到與乙型肝炎病毒感染相關(guān)的HBsA璐度水平。11 .臨床意義11.1 乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據(jù)估計(jì)全球范圍內(nèi)目前大約有3億乙型肝炎病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝臟疾病，流行病學(xué)研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細(xì)胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。11.2 感染乙型肝炎病毒后，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生各種不同模式的抗原、抗體血清學(xué)免疫應(yīng)答反應(yīng)。通過監(jiān)測(cè)這些標(biāo)志物，不僅可以診斷感染，而且還可以判斷疾病的進(jìn)程和預(yù)后。HBsA謂HBV感染后第一個(gè)出現(xiàn)的標(biāo)志物，是提示血清有潛在傳染性的最好的間接指標(biāo)。12 .結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系12.1 由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。12.2 審核者認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)定結(jié)果，對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的可靠性