丹參營(yíng)養(yǎng)器官中脂溶性成分的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律

1、丹參營(yíng)養(yǎng)器官中脂溶性成分的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律         作者：秦海燕，索志榮，劉文哲 【摘要】 目的測(cè)定丹參營(yíng)養(yǎng)器官中丹參酮I和丹參酮A的含量，并揭示丹參生長(zhǎng)過(guò)程中，丹參酮I和丹參酮A的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。方法采用反相高效液相色譜法，以Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 m）為色譜柱；甲醇-0.4%磷酸為流動(dòng)相，             

2、0;               作者：秦海燕，索志榮，劉文哲【摘要】  目的測(cè)定丹參營(yíng)養(yǎng)器官中丹參酮I和丹參酮A的含量，并揭示丹參生長(zhǎng)過(guò)程中，丹參酮I和丹參酮A的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。方法采用反相高效液相色譜法，以Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 m）為色譜柱；甲醇-0.4%磷酸為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為1.0 ml/min；二極管陣列檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)分別為246, 270 nm；柱溫為30。結(jié)果丹參葉

3、和莖中均未檢出丹參酮I和丹參酮A，根中丹參酮A和丹參酮I的含量變化呈“單峰”曲線，丹參酮A的含量在7月份最高，為2.94%，丹參酮I含量在5月份最高，為0.78%。結(jié)論4月至7月是丹參根中丹參酮積累的關(guān)鍵時(shí)期。 【關(guān)鍵詞】  丹參； 營(yíng)養(yǎng)器官； 丹參酮； 高效液相色譜Abstract：ObjectiveTo determine the content of TanshinoneA and tanshinone in different vegetative organs of Salvia miltiorrhiza Bge and discover the accumulation

4、of TanshinoneA and tanshinone within a whole growth period. MethodsHigh performance liquid chromatography was used. The separation was performed on Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 m）column by gradient elution . The mobile phase consisted of CH3OH - 4% aqueous phosphoric acid. The flow rate

5、 was 1.0 ml/min. The detection was done at 246, 270 nm and column temperature was 30 .ResultsThere were no tanshinone in the stem and the leaf. TanshinoneA and tanshinoneroughly assumed "the single peak" in the root within a growth period.The highest content of tanshinoneA was in July, up

6、to 2.94% and tanshinonewas in May, up to 0.78%.ConclusionApril to July is the critical period of tanshinone accumulation in Danshen root.Key words：Salvia miltiorrhiza Bge;   Vegetative organs;   Tanshinone;   High performance liquid chromatography    丹參（S

7、alvia Miltiorrhiza Bunge）為唇形科（Labiatae）鼠尾草屬多年生草本植物，傳統(tǒng)以根入藥。其活性成分可分為脂溶性的二萜醌類和水溶性的酚酸類成分，鄰醌型的丹參酮、丹參酮A在丹參中的量較高,有較強(qiáng)的生理活性,是丹參主要有效成分之一1，具有擴(kuò)張血管,降低血液黏度,抗血小板聚集,改善微循環(huán),保護(hù)心肌細(xì)胞以及抗菌消炎、抗癌等作用2。目前，關(guān)于丹參藥用成分的藥理、提取工藝、檢測(cè)方法的研究較多，但有關(guān)丹參藥用成分在整個(gè)營(yíng)養(yǎng)器官動(dòng)態(tài)變化的研究很少。本文采用高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)器（HPLCDAD），研究了丹參脂溶性成分丹參酮I和丹參酮A在根中的積累規(guī)律，旨在為丹參的種植、管理、采

8、收、品質(zhì)鑒定及控制丹參藥材質(zhì)量提供理論依據(jù)。1 儀器與試藥    HP1100高效液相色譜儀（美國(guó)Aglient公司），包括四元梯度泵（G1311A）， 二極管陣列檢測(cè)器(G1315A)；DL-180型超聲清洗器(浙江省象山縣石浦天電子儀器廠)；FZ102微型植物試樣粉碎機(jī)（河北省黃驊市齊家務(wù)振興電器廠）；Milli - QG超純水制備儀（美國(guó)Millipore公司）。    甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸為分析純。丹參酮I和丹參酮A對(duì)照品純度均大于99.5%，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。    丹參（S

9、alvia Miltiorrhiza Bunge）實(shí)驗(yàn)材料采于西北大學(xué)苗圃內(nèi)的栽培植株（2006年3月自商洛天士力丹參藥材基地移栽）。于2007-04 12期間每月20日以隨機(jī)抽樣的方式選擇丹參植株6株，摘取各樣品株的根、葉片和莖，分別整理，60的恒溫箱內(nèi)烘干至恒重，研細(xì)，過(guò)6號(hào)篩后備用。2 方法2.1 對(duì)照品溶液的配制分別精密稱取對(duì)照品丹參酮I 1.1 mg和丹參酮A2.2 mg，分別置10 ml量瓶中，用二氯甲烷甲醇（V/V = 1/9）混合溶劑溶解并定容，搖勻，得丹參酮I 濃度為0.11 mg·ml-1和丹參酮A濃度為0.22 mg·ml-1的單一成分對(duì)照品溶液，作為

10、儲(chǔ)備液，其它不同濃度的對(duì)照品溶液由儲(chǔ)備液稀釋得到。2.2 供試品溶液的制備精密稱量丹參根、莖、葉粉末約120 mg，置25 ml燒瓶中，準(zhǔn)確加入二氯甲烷甲醇（V/V = 1/9）混合溶劑10 ml，稱重，超聲提取30 min，冷卻至室溫，再稱重，用提取液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，取適量用0.45 m微孔濾膜濾過(guò)，即得丹參脂溶性成分供試品溶液。2.3 色譜條件美國(guó)Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 m）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇 0.4%磷酸，梯度洗脫，其時(shí)間程序?yàn)?1013 min，甲醇體積分?jǐn)?shù)相應(yīng)為72%87%72%，流速1.0 ml·min-

11、1；二極管陣列檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)分別為246, 270 nm；柱溫30 。丹參酮I和丹參酮A的保留時(shí)間分別為8.1，10.8 min。對(duì)照品和丹參樣品色譜圖見(jiàn)圖1。2.4 線性關(guān)系考察精密移取“2.1”項(xiàng)所配的丹參酮I和丹參酮A儲(chǔ)備液一定體積于10 ml量瓶中，稀釋，配成丹參酮I濃度分別為0.44，0.88，1.76，3.52，7.04，14.08 g·ml-1及丹參酮A濃度分別為4.4，8.8，17.6，26.4，35.2，70.4 g·ml-1的混合對(duì)照品溶液，將上述混合對(duì)照品溶液分別平行測(cè)定3次（均進(jìn)樣10.0 l），以平均峰面積Y對(duì)濃度C(g·ml-1)進(jìn)行

12、線性回歸，丹參酮I和丹參酮A回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為：Y = 74.61C - 118.86，r= 0.999 4；Y = 55.58C - 94.75，r = 0.999 6。線性范圍分別為0.44 14.08，4.4 70.4 g·ml-1。2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取丹參（6月根）脂溶性成分供試品溶液10.0 l，重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行測(cè)定，丹參酮I和丹參酮A峰面積積分值的RSD分別為1.7%，1.9%。2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 對(duì)丹參（6月根）脂溶性成分供試品溶液在8 h之內(nèi)每隔1 h進(jìn)行考察，結(jié)果丹參酮I和丹參酮A峰面積積分值的RSD分別為2.1%，2.1%（n = 9）。2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱量丹參（6月根）粉末約200 mg共6份，按“2.2”項(xiàng)操作制備脂溶性成分供試品溶液，進(jìn)行測(cè)