HPLC法測(cè)定蘑菇粉等中水溶性維生素的含量

1、    HPLC法測(cè)定蘑菇粉等中水溶性維生素的含量        摘要本文探討了應(yīng)用HPLC法對(duì)食物中的水溶性維生素測(cè)定的一種方法。樣品采用稀鹽酸提取，經(jīng) Bondapak C18柱分離，流動(dòng)相為甲醇-水體系中加入0.1 molL NaAc，0.02三乙胺用HAC調(diào)pH為4.18，254 nm處紫外測(cè)定。梯度洗脫，樣品中7種水溶性維生素完全分離并定量測(cè)定?；厥章蕿?1.6104.2，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3.90，線性相關(guān)系數(shù)在0.9950以上。關(guān)鍵詞HPLC食品水溶性維生素The

2、 Determination of the Water-Soluble Vitamins inFood by High Performance Liquid ChromatographyHuang Hongxia（Fujian station of Food Inspection，F(xiàn)uzhou）AbstractThe water-soluble vitamines（，1、2，6，12，nicotinic acid and nicotinamide）in food samples were separated on a -Bondapak C18 column with a mobile pha

3、se containing methanolwater（with 0.1 molL NaAc-HAc， triethylamine，）and UV-254 nm detcction.The recovery was 91.6%，。KeywordsHPLCFoodVitamin維生素是維持人體細(xì)胞正常功能所必需的物質(zhì)，其中有一些維生素人體內(nèi)不能合成，只能從食物或營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑中攝取、目前市場(chǎng)上各種強(qiáng)化維生素的食物不斷出現(xiàn)，需要建立快速準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。傳統(tǒng)的維生素B1、B2的測(cè)定較多采用熒光分析法1，2。高效液相色譜分析，尤其是離子色譜法測(cè)定各種水溶性維生素近來(lái)報(bào)道較多3，4，5。由于離子對(duì)試劑價(jià)格

4、昂貴，成本高，不易推廣應(yīng)用。本文采用稀鹽酸對(duì)食物中水溶性維生素進(jìn)行提取，在甲醇-水體系中加入鹽類6對(duì)7種維生素進(jìn)行分離和測(cè)定，方法簡(jiǎn)便，快速，重視性好?，F(xiàn)報(bào)告于下。1實(shí)驗(yàn)部分1.1試劑甲醇、醋酸鈉、鹽酸、三乙胺均為分析純?cè)噭?。維生素標(biāo)準(zhǔn)液。維生素C，B1，B2，B6，B12，菸酸，菸酰胺均為生化試劑（純度>97）。用蒸餾水分別溶解以上維生素標(biāo)準(zhǔn)品，使其濃度大約為1 ml相當(dāng)于1 mg作為儲(chǔ)備液（維生素C分析前配制）。使用前分別吸取維生素C，B6，B2 0.2 ml；維生素B1，菸酸、菸酰胺0.05 ml；維生素B12 0.05 ml于10 ml容量瓶，用水定容制成混合標(biāo)樣。1.2儀器與測(cè)

5、試條件Waters液相色譜儀，M440紫外檢測(cè)器，M730數(shù)據(jù)處理機(jī)。色譜條件色譜柱： Bondapak C18 3.9×300 mm；流動(dòng)相：A：甲醇，B：水（0.1 molL NaAc-HAc，0.02三乙胺，pH4.18）。梯度洗脫（見表1）。流速：1 mlmin；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；靈敏度：0.05 AUFS。表1梯度洗脫洗脫時(shí)間（min）0101025甲醇比例（）18281.3實(shí)驗(yàn)步驟精密稱取25 g樣品，加入50 ml 0.1 molL HCl于70水浴中提取30 min。冷卻后，用NaAc測(cè)pH值為4.18左右。定容至100 ml，過(guò)濾，濾液經(jīng)0.45 濾膜過(guò)濾后備

6、作進(jìn)樣，進(jìn)樣量為20 l。 2結(jié)果2.1按2.3條件分別分離混合外標(biāo)標(biāo)液（見1）和食品中水溶性維生素（見2）。在該條件下樣品及標(biāo)樣均能得到較好的分離。1混合標(biāo)液色譜分離1.Vit.C，2.菸酸，3.Vit B1，4.Vit B612，7.Vit B22蘑菇粉樣品色譜分離中1，2，37同12.2回收率試驗(yàn)在蘑菇粉樣品中加入被測(cè)組分，進(jìn)行回收試驗(yàn)，結(jié)果（見表2），平均回收率為91.6104.2。2.3重復(fù)性試驗(yàn)取樣品（部分被測(cè)組分模擬加入）在2.3條件下，重復(fù)進(jìn)行6次試驗(yàn)，結(jié)果(見表3)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3.90。表2回 收 率 試 驗(yàn) 結(jié) 果名稱原有量（mg）添加量（mg）測(cè)定量（mg）回收率維

7、生素C菸酸維生素B1維生素B6菸酰胺維生素B2表3重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果（n6）名稱X-（mg100 g）標(biāo)準(zhǔn)偏差（mg100 g）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（）維生素C菸酸*維生素B1*維生素B6菸酰胺*s維生素B12維生素B22.4線性關(guān)系分別取525 l混合標(biāo)液進(jìn)樣，以峰面積為縱座標(biāo)，以進(jìn)樣體積（l）為橫座標(biāo)，求得線性回歸方程和線性相關(guān)系數(shù)（見表4）。表4線性關(guān)系名稱線性回歸方程相關(guān)系數(shù)（r）維生素C菸酸維生素B1維生素B6菸酰胺維生素B12維生素B22.5采用本方法對(duì)不同樣品測(cè)定結(jié)果（見表5）。 表5不同樣品測(cè)試結(jié)果樣名維生素C（mg100 g）菸酸（mg100 g）維生素B1（mg100 g）維生素B6（

8、mg100 g）菸酰胺（mg100 g）維生素B2（mg100 g）巴西蘑菇粉正分子核酸粉788梅奧核酸粉靈芝粉鮮蓮籽汁較大嬰兒奶粉3討論3.1流動(dòng)相pH不同對(duì)保留時(shí)間的影響（見3），當(dāng)pH在4.18時(shí)7種水溶性維生素能達(dá)到明顯分離。3水溶性維生素的保留時(shí)間與流動(dòng)相B中的pH的關(guān)系中符號(hào)同13.2流動(dòng)相中甲醇含量對(duì)維生素分離的影響實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)甲醇比例為10時(shí)，維生素B1、B6重疊，當(dāng)甲醇比例10時(shí)，維生素B1先于維生素B6出峰。當(dāng)甲醇比例10時(shí)維生素B6先于維生素B1出峰。而對(duì)保留時(shí)間較長(zhǎng)的維生素B2、B12兩峰甲醇含量必須增至28時(shí)才出峰。3.3流動(dòng)相中三乙胺的影響在流動(dòng)相中添加三乙胺是為了

9、減少堿性維生素的拖尾，不加三乙胺，維生素B1、B6峰嚴(yán)重拖尾。3.4維生素提取劑的選擇考慮到7種水溶性維生素中維生素C的穩(wěn)定性最差，故我們僅作了室溫（25）下，12 h內(nèi)維生素C分別在0.1 molL鹽酸，3偏磷酸，3草酸，3三氯乙酸4種不同提取劑中的穩(wěn)定性試驗(yàn)。結(jié)果表明，0.1 molL鹽酸、3偏磷酸較為理想，3草酸次之，而3三氯乙酸對(duì)維生素C并無(wú)穩(wěn)定作用，只是能較完全地沉淀樣品中的蛋白質(zhì)，而0.1 molL鹽酸，3偏磷酸也具有明顯沉淀蛋白作用。考慮到偏磷酸的試劑峰影響維生素C測(cè)定。故選用0.1 molL鹽酸作為水溶性維生素的提取劑。作者單位：福建省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站參考文獻(xiàn)1GBT 1239099 食物中硫胺素、核黃素的測(cè)定法2Rashid I.et al：食品中Vit B1,B2的LC測(cè)定 J Food Sci 1980；45，7443王秀英；高效液相色譜法測(cè)定天然海藻中的多種水溶性維生素 色譜 1