旋覆花中鞣質(zhì)的含量測定

1、                   作者：萬祺 龍凌云 裴月湖 單俊杰【摘要】  目的測定旋覆花水提物中鞣質(zhì)的含量。方法采用干酪素法和絡合滴定法進行鞣質(zhì)含量測定。結(jié)果干酪素法測定旋覆花中鞣質(zhì)含量為5.96%，RSD1.68%（n=3）；絡合滴定法測得含量為8.32%，RSD2.09%（n=3）。結(jié)論 該兩種分析方法簡便、準確，可用于旋覆花中鞣質(zhì)的含量測定。 【關鍵詞】  旋覆花 鞣質(zhì) 干酪素 絡

2、合滴定Abstract：ObjectiveTo determine the content of tannins in aqueous-extract in the flower of Inula japonica Thunb. Methods The casein method and complexometric titration were used to determine the content of tannins.Results The active tannin in the flower of Inula japonica was 5.96% by the casein me

3、thod, and RSD=1.68% (n=3)； the total tannin of the flower was 8.32% by complexometric titration, and RSD=2.09% (n=3). ConclusionThe two methods are simple and accurate,and can be used to determine the content of tannin in Inula japonica Thunb.Key words：Inula japonica Thunb.；  Tannin；  Case

4、in；  Complexometric titration    旋覆花為菊科植物旋覆花Inula japonica Thunb.或歐亞旋覆花Inula britannica L.的干燥頭狀花序，具有降氣、消痰、行水、止嘔等功效。中醫(yī)臨床多用于風寒咳嗽、痰飲蓄結(jié)、胸膈痞滿、喘咳痰多、嘔吐噫氣、心下痞硬等癥狀1。旋覆花中主要有倍半萜內(nèi)酯、三萜、甾體、黃酮和揮發(fā)油等成分24，目前尚無旋覆花中鞣質(zhì)方面的報道。本實驗室研究發(fā)現(xiàn)旋覆花（Inula japonica Thunb）水提物具有明顯降血糖和降血脂作用5，檢識反應表明水提物中主要含有黃酮、蒽醌、糖類和鞣質(zhì)等

5、成分。其中用三氯化鐵反應鑒定旋覆花中鞣質(zhì)，反應呈暗綠色，表明含有鄰二酚羥基黃酮和兒茶素類縮合鞣質(zhì)。本實驗擬采用干酪素法和絡合滴定法測定其中鞣質(zhì)的含量。    鞣質(zhì)含量測定方法有多種，其中最常用的有皮粉法、高錳酸鉀法、干酪素法、絡合滴定法、比色法和分光光度法。本實驗選擇干酪素法是基于干酪素能選擇性結(jié)合有生理活性的鞣質(zhì)，從而測定生理活性鞣質(zhì)的含量，而無活性的鞣酐等鞣質(zhì)不被測定6。絡合滴定法是利用鞣質(zhì)分子中多個鄰位酚羥基可作為多基配體與一個中心離子絡合，形成環(huán)狀螯合物，在不同pH值下發(fā)生沉淀反應，通過用EDTA反滴定過量金屬離子來確定總鞣質(zhì)的含量。該法準確度和精確度高7

6、。 因此擬采用該兩種方法對旋覆花中鞣質(zhì)進行定量分析。1  器材1.1  藥材旋覆花（Inula japonica Thub.）購于北京同仁堂藥材公司，產(chǎn)地河北省。1.2  試劑鞣酸（AR，北京化學試劑公司），干酪素（Sigma公司），基準氧化鋅（北京益利精細化學有限公司）。鉻黑T（北京市旭東化工廠 ），EDTA-2Na（ 北京欣經(jīng)科生物技術有限公司），F(xiàn)olin試劑（鎢酸鈉 50 g，加入85磷酸40 ml和蒸餾水375 ml，混合，加熱回流3 h，冷后加水稀釋至500 ml，避光保存。），0.1 mol/L醋酸醋酸鈉緩沖液（pH =5.0），其他試劑均為分析純。

7、1.3  儀器紫外可見分光光度計（上海尤尼柯公司，型號2802PC），電子天平（十萬分之一，賽多利斯，BP211D ） 。2  方法2.1  旋覆花水提物的制備旋覆花花序1 kg，加入95%乙醇8 L室溫浸泡48 h。過濾，殘渣再重復操作1次。醇提后的殘渣揮干乙醇后，用10 L蒸餾水室溫浸泡24 h。過濾，殘渣再用水重復操作1次。合并水提液，50減壓濃縮，濃縮液冷凍干燥獲得水提物。2.2  干酪素法82.2.1  標準曲線的繪制精確稱取鞣酸（真空干燥至恒重）43.84 mg置于200 ml容量瓶中，加入30%甲醇水溶液定容，搖勻，得到溶液I。精

8、密吸取溶液I1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml分別置于 10 ml容量瓶中，分別用30%甲醇補齊至5 ml。然后再加入0.1 mol/L醋酸醋酸鈉緩沖液（pH=5.0）至刻度，搖勻。精密吸取5個不同濃度標準溶液 1 ml分別置于10 ml容量瓶中，加入Folin試劑0.5 ml，再加入2%NaCO3溶液至刻度，混勻。顯色后于720 nm處測定吸光度，以蒸餾水作空白對照。計算回歸方程。2.2.2  樣品鞣質(zhì)的含量測定精確稱取樣品145.01 mg于50 ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并定容。精密吸取樣品溶液2 ml于25 ml棕色容量瓶中，加入0.1 mol/L醋酸醋酸鈉緩沖液（

9、pH=5.0）10 ml，再加30%甲醇定容，得到溶液II。精密吸取II溶液10 ml置于已盛有干酪素500 mg的50 ml棕色容量瓶中，振蕩1 h，過濾，得溶液III。分別吸取II和III溶液1 ml，置于10 ml棕色容量瓶中，各加入Folin試劑0.5 ml，再加2%NaCO3溶液至刻度，搖勻。室溫放置12 min后，以蒸餾水作空白對照，在波長720 nm處測定吸光度，為A1和A2。由兩吸光度之差（A）代入回歸方程，計算活性鞣質(zhì)的含量。2.3  絡合滴定法92.3.1  0.05 mol/L EDTA-2Na的標定稱取18.6 g EDTA-2Na于1 000 ml

10、錐形瓶中，加蒸餾水1 000 ml溶解，搖勻，備用。 精密稱取干燥至恒重的基準氧化鋅0.120 g，加入3 ml稀鹽酸使溶解，再加水25 ml，滴入1滴0.025%甲基紅乙醇溶液 ，再滴加氨試液至溶液顯微黃色。加水25 ml，氨氯化銨緩沖液（pH=10）10 ml，鉻黑T指示劑少許。用EDTA2Na滴定至溶液由紫色變?yōu)榧兯{色，并將滴定結(jié)果用空白校正。每毫升EDTA-2Na標準液相當于4.069 mg氧化鋅。-     The paper shows that flavanones are abundant in longan nucleuses. It is si

11、gnificant to make full use of longan necleuses. It has a brilliant prospect in developing this natural resources. 【參考文獻】  1Cai Changhe, Tang Xiaolang,Zhang Aiyu, etc. longan fruit pulp nutritional therapy value and its development application prospectJ. Food Science, 2002, 23 (8): 328.2Xu

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