不同川芎藥材中川芎嗪及阿魏酸含量及指紋圖譜研究

1、JournalofChineseMedicinalMaterials第31卷第8期2008年8月1113栽培與育種不同川芎藥材中川芎嗪及阿魏酸含量及指紋圖譜研究朱長(zhǎng)福,石全信,嚴(yán)玉平,劉世威,孫立亞,劉芳菊,同利琪(11河北醫(yī)科大學(xué),河北石家莊050091;21石家莊樂仁堂藥業(yè)有限公司,河北石家莊050051;31河北瑞生藥業(yè)有限公司,河北石家莊050035)摘要目的:,以考察兩種川芎質(zhì)量。方法:采用Waters。過奶芎,灌縣產(chǎn)的老芎含量最高;。結(jié)論:老芎與奶芎的差別較大,關(guān)鍵詞川芎;奶芎;川芎嗪;HPLC;中圖分類號(hào):R28212:A:100124454(2008)0821113203231

2、3DmationandFingerprintAnalysisofTetramethylpyrazineandFerulicAcidinLigusticumchuanxiongZHUChang2fu,SHIQuan2xin,YANYu2ping,LIUShi2wei,SUNLi2ya,LiuFang2ju,TONGLi2qi(11HebeiMedicineUniversity,Shijiazhuang050091;31HebeiRuishengPharmaceuticalCo.Ltd,Shijiazhuang050035,China)AbstractObjective:Todetermineth

3、econtentsoftetramethylpyrazine(TMP)andferulicacidinLigusticumchuanxiongfromdifferentproducingareasandseasons1Methods:ThecontentsofTMPandferulicacidweredeterminedbyHPLC,andthenanalyzedbyChromatographicFingerprints1Results:ThecontentsofTMPandferulicacidfromdifferentseasonswereobviouslydifferentfromeac

4、hother1Itwasmuchhigherin“l(fā)aoxiong”thanthatin“naixiong”1Thesimilarityoffingerprintswashighifthesampleswerecollectedfromthesameseason,orthesameareas,butnotdifferentseasons.Conclusions:ThecontentsofTMPandferulicacidweredifferentfromdifferentproducingareas1TheevidentvarietyofLigusticumchuanxiongsfingerp

5、rintsfromdifferentcollectingseasons,LaoxiongandNaixiong,wasnotrelevantforclinicaluseasthesamemedicine1KeywordsLigusticumchuanxiongHort1;Naixiong;Tetramethylpyrazine(TMP);FerulicAcid;HPLC;Fingerprint2321ShijiazhuangLerentangPharmaceuticalCo.Ltd,Shijiazhuang050051;傘形科川芎LigusticumchuanxiongHort1的干燥根莖,為

6、中醫(yī)臨床活血行氣、祛風(fēng)止痛之要藥。傳統(tǒng)使用的川芎均指老芎。通常在無性繁殖過程中,于大寒后立春前,采挖壩區(qū)未成熟的根莖稱“奶芎”,1運(yùn)上山育苓。奶芎也主要出口日本,也有些農(nóng)戶將奶芎在藥材市場(chǎng)作川芎或奶芎出售。此時(shí)距川芎(老芎)收獲期尚有4個(gè)月左右,奶芎則擾亂藥材市2場(chǎng),嚴(yán)重影響川芎藥用的質(zhì)量。老芎與奶芎是否有明顯區(qū)別,筆者測(cè)定了灌縣、都江堰、彭州及江西九江的川芎、奶芎中川芎嗪和阿魏酸含量,并建立指紋圖譜及相似度比較。1儀器與材料211川芎嗪21111色譜條件:色譜柱為依利特HypersilODS2(416mm×150mm,5m),流動(dòng)相甲醇21%醋酸(2080),流速110ml/min

7、,檢測(cè)波長(zhǎng)322nm,柱溫l。30,進(jìn)樣量2021112供試品溶液的制備3:分別取粉碎、過30目篩的6個(gè)樣品粉末1g,精密稱定,加稀乙醇10ml,超聲提取1h,過濾,殘留物用2ml稀乙醇洗滌,過濾,合并濾液,定容至10ml,經(jīng)0145m微孔濾膜過濾,作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備:精密稱取干燥至恒重的鹽酸川芎嗪對(duì)照品適量,加甲醇制成1819g/ml的對(duì)照品溶液。21113標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:稱川芎嗪對(duì)照品3166mg,置10ml容量瓶,用甲醇定容為A液(含川芎嗪28816g/ml),取A液5ml,置100ml容量瓶,用甲醇定容為B液。分別取B液0125、0175、1125、3通訊作者:同利琪。11

8、14JournalofChineseMedicinalMaterials第31卷第8期2008年8月1175、2125ml置于10ml容量瓶,用甲醇定容后混勻,按上述條件,各進(jìn)樣20l,測(cè)定,計(jì)算得回歸方232015程:y=1184598E+1142754Ex,r=019997,進(jìn)樣量在0100885g0107965g線性良好。21114加樣回收率試驗(yàn):精密稱取已知川芎嗪含量的川芎6份,加入川芎嗪對(duì)照品,同法制備供試液,測(cè)定,計(jì)算回收率為99112%,RSD=1178%。21115樣品測(cè)定結(jié)果:6種樣品供試液進(jìn)樣20l,按上述條件測(cè)定。結(jié)果見表1。212阿魏酸21211色譜條件:色譜柱為依利特

9、Hypersil液進(jìn)樣10l。記錄圖譜30min。用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件處理數(shù)據(jù),將3種老芎及3種奶芎計(jì)6種川芎藥材的色譜圖分別比較并多點(diǎn)校正與匹配,得到可全面反映多個(gè)色譜圖特征的對(duì)照模式色譜圖(見圖13)。以此模式為基準(zhǔn),計(jì)算每個(gè)色譜圖的相似度。表1編號(hào)134566樣品()樣品質(zhì)量(g)川芎嗪含量(%),老芎江西九江,老芎日本種子,奶芎川彭州,奶芎江西九江,奶芎柱溫35,流速1ml/min,波長(zhǎng)322,:甲醇2水236%乙酸(30673)l。4212121g精密稱定,95%(V/V)乙醇10ml,放置過夜,20min,過濾,揮干溶劑后加20ml水溶解,再分別以20、20、10m

10、l乙酸乙酯萃取3次,合并萃取液,揮干,殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml,經(jīng)0145m微孔濾膜過濾,即得。注:“日本種子”指用日本的川芎種子在都江堰種植的材料對(duì)照品溶液制備:精密稱取干燥至恒重的阿魏酸對(duì)照品適量,加甲醇制成011mg/ml的對(duì)照品溶液。21213標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密稱取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品約50mg,加甲醇少量使溶解,加水定容為100ml,精密量取20ml置100ml棕色量瓶,加水稀釋至刻度,搖勻,即得011mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別吸取該溶液014、018、112、116、210ml,置10ml量瓶,用水稀釋至刻度,搖勻,吸取上述溶液各10l進(jìn)樣,測(cè)定得回歸方程為:y=728472+3

11、2882153x,r=0199914,進(jìn)樣量在40200g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。21214加樣回收率測(cè)定:精密稱取已知阿魏酸含圖13種不同產(chǎn)地老芎指紋圖譜S11灌縣S21都江堰S31九江R1對(duì)照品量的川芎樣品5份,每份約0145g,加入阿魏酸對(duì)照品適量(按11的比例加入),按供試品溶液制備方法制備并進(jìn)行測(cè)定,加樣回收率為99190%,RSD為2131%。21215樣品測(cè)定結(jié)果:分別取6種川芎樣品溶液,進(jìn)樣10l,記錄圖譜,計(jì)算結(jié)果(見表1):不同川芎圖23種不同產(chǎn)地奶芎指紋圖譜S11日本種子S21彭州S31九江R1對(duì)照品藥材(老芎、奶芎)中川芎嗪及阿魏酸的含量,老芎均遠(yuǎn)高于奶芎,灌縣老芎最高。3

12、指紋圖譜的建立311色譜條件照阿魏酸測(cè)定色譜條件和供試液指紋圖譜和相似度計(jì)算結(jié)果,3個(gè)不同產(chǎn)地的老芎樣品相似度較為接近,相似值在0195以上;3個(gè)不同產(chǎn)地奶芎樣品相似度也較為接近,其中都江堰的日本種子奶芎與九江產(chǎn)奶芎樣品最為相似,其相似度在0195以上;由6種不同產(chǎn)地、不同品種的川芎藥材指紋圖譜及相似度計(jì)算比較可以看出老芎與奶芎之間的相似性較差,它們之間的相似值均低于0195。制備法,內(nèi)標(biāo)物為上述阿魏酸對(duì)照液;理論塔板數(shù)n=6758123,保留時(shí)間為30min。312方法與結(jié)果分別取上述6種川芎藥材提取JournalofChineseMedicinalMaterials第31卷第8期2008年

13、8月1115412通過6份川芎藥材提取液的有效部位指紋圖譜中包括川芎嗪和阿魏酸在內(nèi)的12個(gè)以上主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間分析,其RSD均小于3%,表明主要色譜峰的總面積可以反映有效部位在不同樣本中的絕對(duì)含量,以阿魏酸作為指標(biāo)峰所建立的川芎有效部位定性鑒別的指紋圖譜,可以鑒別真?zhèn)?評(píng)價(jià)中藥材、,有參考價(jià)值。圖36種不同產(chǎn)地川芎藥材指紋圖譜S11灌縣S21都江堰S31九江S41S51S61九江R1對(duì)照品11天津藥學(xué),2005,17):26412陳閡軍,吳永江,范曉暉,等1色譜指紋圖譜分析技術(shù)用4討論411(含老芎及奶芎),川芎嗪的含量差異較大。于鑒別中藥川芎產(chǎn)地1中國(guó)中藥雜志,2003,28(7):6

14、06261013劉圓,賈敏如1奶芎、山川芎與川芎藥材質(zhì)量研究1中文獻(xiàn)有關(guān)川芎中川芎嗪含量報(bào)道,從千萬分之幾到5千分之幾,相差萬倍,不排除確有川芎嗪含量異常高的品種,但亦不能排除因測(cè)試干擾所致。阿魏酸對(duì)照溶液不穩(wěn)定,隨著時(shí)間延長(zhǎng),色譜中雜質(zhì)峰明顯增高,同時(shí)發(fā)現(xiàn)不同溶劑對(duì)樣品分解有明顯的影響,在甲醇中分解較快,而采用甲醇溶解加水定容,分解較慢。藥材,2003,26(9):623262514宋金春,胡傳芹,劉紅,等1川芎高效液相指紋圖譜的建立1中國(guó)藥房,2005,16(9):716271815孫新國(guó),王濤,朱景申1逆流萃取2反相高效液相色譜法測(cè)定川芎中川芎嗪的含量1同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,30(

15、3):20922101(2007-11-29收稿2008-04-08修回)中藥材雜志來稿要求來稿以科研論文、經(jīng)驗(yàn)總結(jié)、簡(jiǎn)報(bào)、譯文等形式均可?？蒲姓撐募敖?jīng)驗(yàn)總結(jié)必須觀點(diǎn)明確,有分析,有結(jié)論,避免材料堆積1羅列,字?jǐn)?shù)一般在4000字以內(nèi)(包括圖表)。簡(jiǎn)報(bào)及會(huì)議消息,字?jǐn)?shù)一般在1000字以內(nèi)。譯文可節(jié)譯或全譯,要求鄱譯準(zhǔn)確,文字流暢。凡2000字以上的文章,請(qǐng)作者寫好200字左右的摘要,放在正文之前。研究論文,請(qǐng)附上英文標(biāo)題、英文摘要及關(guān)鍵詞2(一般35個(gè))。稿件力求語(yǔ)句通順,簡(jiǎn)明精煉,用A4紙打印清楚;外文用印刷體書寫或打字;表格要簡(jiǎn)煉,兩端開口,不用縱線,欄頭左上3角不用斜線,除欄頭外,表身中不用或少用橫線;插圖用繪畫紙黑墨水筆正確繪制,要求黑