植物細(xì)胞工程復(fù)習(xí)題(整理)

1、植物細(xì)胞工程復(fù)習(xí)資料名詞解釋細(xì)胞工程: 廣義在離體、無菌條件下，在人工培養(yǎng)基及適宜條件下，對(duì)植物器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等進(jìn)行培養(yǎng)，促使其長(zhǎng)成完整植株的技術(shù)。 狹義應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)方法，借助工程學(xué)的試驗(yàn)方法或技術(shù)，在細(xì)胞水平上研究改造生物遺傳特性和生物學(xué)特性，以獲得特定的細(xì)胞、細(xì)胞產(chǎn)品或新生物體的有關(guān)理論和技術(shù)方法的學(xué)科。廣義的細(xì)胞工程包括所有的生物組織、器官及細(xì)胞離體操作和培養(yǎng)技術(shù)，狹義的細(xì)胞工程則是指細(xì)胞融合和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。植物細(xì)胞的全能性: 生物體的每個(gè)細(xì)胞都具有該物種全部遺傳信息和離體培養(yǎng)條件下發(fā)育成完整植株的潛在能力。體細(xì)胞雜交: 將不同來源（種、屬間）的體細(xì)胞原生質(zhì)體在

2、誘導(dǎo)劑誘發(fā)下融合形成雜種細(xì)胞，并進(jìn)一步分化形成雜種植物體，進(jìn)而形成新物種或新品種的技術(shù)。固體培養(yǎng)：將外植體接種在加有凝固劑的培養(yǎng)基上進(jìn)行靜止培養(yǎng)的技術(shù)。超低溫保存：將植物細(xì)胞或組織經(jīng)防凍處理后，在-196條件下的低溫保存的一整套技術(shù)。細(xì)胞固定化培養(yǎng)：將游離的細(xì)胞包埋在多糖或多聚化合物制備成的網(wǎng)狀支持物中、培養(yǎng)液呈流動(dòng)狀態(tài)進(jìn)行無菌培養(yǎng)的技術(shù)。外植體：用于培養(yǎng)的離體組織或器官。如下胚軸、葉片、胚、根等。繼代培養(yǎng)：把培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到相同的、新鮮培養(yǎng)基中的過程。一般每隔4-6周進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)。 繼代也不能過于頻繁。植物體細(xì)胞胚胎：體細(xì)胞在離體培養(yǎng)下未經(jīng)受精過程，但經(jīng)歷類似合子胚胎發(fā)生和發(fā)育的過程，從而形

3、成類似合子胚的結(jié)構(gòu)?；ㄋ幖盎ǚ叟囵B(yǎng)：離體條件下對(duì)植物的花粉或花藥進(jìn)行培養(yǎng)獲得單倍體植株的技術(shù)。接種：將外植體種植于培養(yǎng)基上的過程。人工種子：又稱合成種子或體細(xì)胞種子。任何一種經(jīng)人工種皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖體均可稱之為人工種子。離體快繁（微繁）：通過無菌培養(yǎng)方法進(jìn)行的營(yíng)養(yǎng)繁殖。愈傷組織：由外植體脫分化形成的一團(tuán)無序的、分生狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。器官形成：培養(yǎng)條件下的組織或細(xì)胞團(tuán)（愈傷組織）分化形成不定根、不定芽等器官的過程。植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)：在離體條件下，將愈傷組織或或小細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)游離細(xì)胞置于液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)促進(jìn)細(xì)胞增殖的技術(shù)。脫分化：成熟細(xì)胞或分化細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)的

4、過程。再分化：脫分化的組織(愈傷組織)在適宜條件下繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)重新分化形成完整植株的過程不定芽：從非正常出芽的位置上經(jīng)誘導(dǎo)而形成的芽。如從根、葉和愈傷組織上誘導(dǎo)的芽。不定根：從非根組織上產(chǎn)生的根。如從莖、葉和愈傷組織上誘導(dǎo)的根。如玉米的不定根；離體培養(yǎng)葉片上產(chǎn)生的根。離體授粉：離體條件下，使胚珠或子房完成授粉、受精形成種子、幼苗的過程。條件培養(yǎng)基: 含有植物細(xì)胞培養(yǎng)上清液或靜止細(xì)胞的培養(yǎng)基。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)周期：植板率：每個(gè)平板接種細(xì)胞總數(shù)中形成細(xì)胞團(tuán)的百分率。 植板率=每平板形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù)/每平板接種的細(xì)胞總數(shù) *100% 簡(jiǎn)述題、填空、選擇、計(jì)算題第一章細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)是什么？細(xì)胞的全能性植

5、物細(xì)胞工程的奠基人? 當(dāng)時(shí)有什么重大發(fā)現(xiàn)?三個(gè)重要人物：White（美）,高特里特（法）,諾比考特（Nobecourt）；兩個(gè)重要發(fā)現(xiàn)：B族V和IAA顯著促進(jìn)其生長(zhǎng)植物激素控制器官學(xué)說？是誰提出的? Skoog 和Miller提出了植物激素控制器官形成學(xué)說：生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的相對(duì)濃度可以控制器官分化，比值高時(shí)促進(jìn)生根，比值低時(shí)促進(jìn)莖芽的分化，二者濃度相當(dāng)時(shí)，形成愈傷組織。植物細(xì)胞組織培養(yǎng)的過程？一、配制培養(yǎng)基二、滅菌三、接種四、培養(yǎng)五、馴化移栽細(xì)胞工程的主要內(nèi)容？1.器官、組織、細(xì)胞培養(yǎng) -離體或體外培養(yǎng)；2.細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）；3.細(xì)胞核移植技術(shù)；4.胚胎移植技術(shù)（胚胎工程）；5.染色體

6、導(dǎo)入技術(shù)（染色體工程）；6.轉(zhuǎn)基因生物與生物反應(yīng)器；7.干細(xì)胞與組織工程細(xì)胞工程的主要特征？（1）培養(yǎng)條件可以人為控制，不受季節(jié)限制，可以工廠化生產(chǎn)產(chǎn)品。 （2）無菌培養(yǎng)環(huán)境。排除了微生物如真菌、細(xì)菌以及害蟲等的侵入，能保證產(chǎn)品質(zhì)量。（3）繁殖系數(shù)大，培養(yǎng)周期短。（4）通常打破了正常的植物發(fā)育過程和格局；（5）在細(xì)胞水平上進(jìn)行遺傳操作。植物細(xì)胞工程在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中有哪些應(yīng)用？1、用于植物遺傳育種種質(zhì)資源離體保存；花粉花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體；胚乳培養(yǎng)產(chǎn)生三倍體；胚培養(yǎng)拯救雜種胚克服遠(yuǎn)緣雜交障礙；原生質(zhì)體培養(yǎng)進(jìn)行體細(xì)胞雜交；植物體細(xì)胞無性系變異誘導(dǎo)和篩選；植物基因轉(zhuǎn)移。2、優(yōu)質(zhì)植物的快速繁殖與脫毒；3、細(xì)

7、胞培養(yǎng)生產(chǎn)名貴藥物。4、基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用第二章植物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室必備的設(shè)備條件? 超凈工作臺(tái)，天平，冰箱，培養(yǎng)室，高壓滅菌器，培養(yǎng)容器，藥品超凈工作臺(tái)的類型及結(jié)構(gòu)?氣流水平型凈化工作臺(tái)氣流垂直型凈化工作臺(tái)植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)有哪些？一洗滌技術(shù)二滅菌、消毒技術(shù)三、無菌操作技術(shù) 四、培養(yǎng)條件及其控制技術(shù)五、觀察分析技術(shù)六、培養(yǎng)基配制技術(shù)七、外植體選擇、消毒技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)有哪些？固體培養(yǎng): 將外植體接種在加有凝固劑的培養(yǎng)基上進(jìn)行靜止培養(yǎng)的技術(shù)。液體培養(yǎng)：外植體懸浮在未加凝固劑的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的方法。繼代培養(yǎng)：把培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到相同的、新鮮培養(yǎng)基中的過程。一般每隔4-6周進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)。 繼代也不能過

8、于頻繁.如何控制培養(yǎng)條件？1.化學(xué)條件：培養(yǎng)基成分及激素。滲透壓pH值:不同植物對(duì)培養(yǎng)基最適pH值要求不同，大多在5-6.5左右，一般培養(yǎng)基要求5.82.生物條件：植物材料、外植體來源、大小、細(xì)胞密度等。3.物理?xiàng)l件： 溫度：培養(yǎng)室一般所用的溫度是25±2。低于15或高于35，對(duì)生長(zhǎng)都是不利的。光： 光強(qiáng)（100030001x）、光質(zhì)（白、藍(lán)、綠、紅）、光周期 （10-16h）氣體：液培振蕩；固培通氣性好的瓶蓋或瓶塞。濕度：培養(yǎng)基中的濕度為100%。培養(yǎng)室內(nèi)RH70-80。固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)各自的特點(diǎn)？固體培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便易行，所占空間小。一般實(shí)驗(yàn)室均可進(jìn)行。缺點(diǎn)：養(yǎng)分濃度差,造成培養(yǎng)

9、物生長(zhǎng)緩慢，愈傷組織生長(zhǎng)不均衡。氣體交換不暢。生長(zhǎng)過程中排出的有害物質(zhì)，對(duì)培養(yǎng)物產(chǎn)生危害。液體培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：A、不使用凝固劑，節(jié)約生產(chǎn)成本 B 、營(yíng)養(yǎng)吸收充分植物組織培養(yǎng)的滅菌方法有哪些？物理方法：物理滅菌干熱、濕熱、灼燒、紫外線、過濾除菌等?；瘜W(xué)方法：消毒劑、抗菌素滅菌各種物品、用具（培養(yǎng)基玻璃器皿接種工具工作服、帽子、口罩接種室、培養(yǎng)室、超凈臺(tái)酶液、激素（ZT、ABA、IAA）、抗生素、天然物質(zhì)培養(yǎng)材料操作者的雙手）的消毒滅菌方法？培養(yǎng)基：濕熱滅菌法玻璃器皿、接種工具：干熱滅菌法工作服、帽子、口罩、超凈臺(tái)：照射滅菌接種室、培養(yǎng)室：熏蒸滅菌酶液、激素、抗生素、天然物質(zhì)：抗菌素滅菌(?)培養(yǎng)材料：

10、藥劑滅菌操作者的雙手：消毒劑培養(yǎng)基的主要組成？1.無機(jī)物：大量，微量2.有機(jī)物：維生素，氨基酸 肌醇碳源 天然復(fù)合物3.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)：生長(zhǎng)素類;細(xì)胞分裂素類;赤霉素類;脫落酸;乙烯4.瓊脂5.水6.其它成分：活性炭碳源種類及作用？種類：蔗糖，使用濃度在1050g/L， 果糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等。作用：提供能源;調(diào)節(jié)滲透壓?；钚蕴?、瓊脂的作用？瓊脂：固定培養(yǎng)物活性炭：吸附作用；易于生根。常用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類及作用？如何溶解? 生長(zhǎng)素：常用種類:IAA（吲哚-3-乙酸），IBA（吲哚-3-丁酸），2，4-D（二氯苯氧乙酸）NAA（萘乙酸）生理作用:促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和

11、細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)形成愈傷組織、促進(jìn)根的分化。與細(xì)胞分裂素配合使用誘導(dǎo)芽分化和胚狀體發(fā)生?；钚皂樞?誘導(dǎo)愈傷：2，4-D>NAA ；誘導(dǎo)生根： IBA > IAA；溶 解:95%乙醇或1N NaOH(KOH)，后者的效果最好。細(xì)胞分裂素（CTK）：常用種類:BAP（芐氨基嘌呤），6-BA（芐基腺嘌呤），ZT（玉米素，KT（激動(dòng)素 糠基嘌呤）；生理作用:促進(jìn)細(xì)胞的分裂和器官分化、誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成、延緩組織的衰老并增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成。活性順序:誘導(dǎo)芽分化時(shí)因植物而異。溶 解:1N HCl 溶解，ZT用95%乙醇較好如何計(jì)算營(yíng)養(yǎng)成分及激素母液的吸取量？分哪幾類母液？直接稱取法根據(jù)試劑特

12、性一般將母液分五種： 量元素母液；微量元素母液；Fe鹽；有機(jī)物；激素或植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)基的配制程序？1稱量藥品2溶解3調(diào)節(jié)pH 4溶化瓊脂5過濾分裝6包扎標(biāo)記7滅菌8倒平板培養(yǎng)基的滅菌程序？1、加水 2、裝鍋3、蓋緊鍋蓋加熱4、排冷氣5、升壓保溫（0.1MPa，121，15-20min）6、降壓排氣7、出鍋 ，平放 。植物材料的來源？1、田間栽培或采集野生植物2、溫室栽培植物 3、實(shí)驗(yàn)室制作無菌苗外植體如何進(jìn)行選擇原則？選擇優(yōu)良的種質(zhì) 選擇健壯的植株 選擇最適的時(shí)期 選取適宜的大小為什么實(shí)驗(yàn)室常用無菌苗作為外植體的來源？外植體的消毒程序？ 流水沖洗外植體70%乙醇（浸泡或涂擦幾秒-1分鐘）消

13、毒劑（如0.1%的升汞5-10分鐘）無菌水3-5次用于接種。第三章植物細(xì)胞全能性表達(dá)的條件和階段？表達(dá)全能性的兩個(gè)條件和階段離體要把這些細(xì)胞從植物體的抑制性影響下解脫出來；刺激給予適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、環(huán)境條件和激素的刺激。必要條件階段 脫分化 再分化（結(jié)果使細(xì)胞全能性得以表達(dá)）。器官形成途徑?1.直接發(fā)生(器官型)：特點(diǎn)：繁殖系數(shù)高。遺傳穩(wěn)定性強(qiáng)。適合于苗木和以品種繁殖為目的的快速繁殖。2.間接發(fā)生(器官發(fā)生型) 。特點(diǎn)：出芽數(shù)量多，但有變異的可能。3.體細(xì)胞胚胎發(fā)生體細(xì)胞胚胎與合子胚的區(qū)別? 1.沒有真正的胚柄2.子葉常不規(guī)范。3.體積小4.無休眠體細(xì)胞胚胎和不定芽的區(qū)別？1.雙極性結(jié)構(gòu)2.與外

14、植體或愈傷組織無維管束聯(lián)系3.起源于單細(xì)胞。體細(xì)胞胚胎發(fā)生特點(diǎn)？1.胚狀體產(chǎn)生的數(shù)量多，速度快，增殖率及成苗率高2.胚狀體發(fā)生不同步體細(xì)胞胚胎再生植株的應(yīng)用? 1、種質(zhì)資源保存。2、制作人工種子。3、基因工程的受體材料。愈傷組織的類型？胚性和非胚性愈傷組織影響植物離體形態(tài)發(fā)生的因素？1、外植體植物種類和基因型生理狀態(tài)外植體大小極性的作用母體植株健壯 培養(yǎng)時(shí)間2、培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)成分,激素,培養(yǎng)基的性質(zhì),滲透壓等)3、物理?xiàng)l件(溫度,光,水,氣)第四章大多數(shù)植物離體快繁所用外植體是什么？為什么？其培養(yǎng)階段？離體快繁所用的外植體是不定芽,原因：繁殖速率高，數(shù)量大，同時(shí)能保持該植物種的遺傳穩(wěn)定性培養(yǎng)階段

15、：1）起始培養(yǎng)階段2）增殖培養(yǎng)階段3）生根培養(yǎng)階段4）馴化移栽階段植物脫毒方法及脫毒苗的鑒定方法？植物脫毒方法1.莖尖或莖尖分生組織培養(yǎng)法2.熱處理法3.微尖嫁接離體培養(yǎng)法4.珠心組織培養(yǎng)法5.愈傷組織培養(yǎng)法脫毒苗的鑒定方法1.直接檢測(cè)法 2.指示植物法 3.抗血清鑒定法4.電子顯微鏡檢測(cè) 5.分子檢測(cè)莖尖或分生組織培養(yǎng)脫毒的意義及原理？植株脫除病毒的意義：1、脫毒的種苗用于生產(chǎn)能大幅度提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)。2、可有效地解決因病毒引起的品種退化問題。3、便于進(jìn)行國(guó)際間種質(zhì)交換.4、減少環(huán)境污染，有利于保護(hù)環(huán)境.莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒的原理：1)能量競(jìng)爭(zhēng) 2)傳導(dǎo)抑制3)激素抑制 4)酶缺乏 5)抑

16、制因子試管苗的生長(zhǎng)環(huán)境？試管苗生長(zhǎng)的環(huán)境高恒溫、高濕、弱光照、無菌胚培養(yǎng)的類型？成熟胚培養(yǎng)（營(yíng)養(yǎng)需求簡(jiǎn)單）幼胚培養(yǎng)（營(yíng)養(yǎng)需求全面，需調(diào)節(jié)滲透壓）單倍體人工加倍方法及其影響因素？單倍體植株的加倍方法：（1）自然加倍（2）人工加倍秋水仙素人工加倍的影響因子：濃度，處理時(shí)間，處理溫度，處理部位未授粉胚珠及子房培養(yǎng)的目的？獲得單倍體植株花粉、花藥培養(yǎng)的意義？1、加速雜種純合，縮短育種年限。2、排除顯、隱性基因的干擾，提高選擇效率。3、與誘變育種結(jié)合加快獲得新品種的進(jìn)程。 4、單倍體在遠(yuǎn)緣雜交中的利用5、利用單倍體對(duì)栽培品種進(jìn)行純化6、理想的轉(zhuǎn)基因受體。7、基礎(chǔ)理論研究胚胎培養(yǎng)及離體受粉、受精、體細(xì)胞雜

17、交分別解決育種中存在的什么問題?胚胎培養(yǎng):.克服遠(yuǎn)緣雜交的不育性，獲得稀有雜種植物。如幼胚培養(yǎng)。 .打破種子休眠，提早結(jié)實(shí)，縮短育種年限。如蘋果種子的成熟胚培養(yǎng)。.促進(jìn)生活力低下或無生活力的種子萌發(fā)，胚的發(fā)育。如銀杏種子的胚培養(yǎng)。.測(cè)定種子生活力。如休眠種子的胚培養(yǎng)。.獲得三倍體或單倍體植株。.用于胚胎學(xué)理論研究。離體授粉：1、克服自交不親和性，進(jìn)行作物改良。2、克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性。體細(xì)胞雜交1.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性，創(chuàng)造新物種、新種質(zhì)。2.通過原生質(zhì)體進(jìn)行外源基因?qū)搿?.研究細(xì)胞膜、細(xì)胞器、染色體的行為。第五章細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的特點(diǎn)及意義？細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的特點(diǎn)：1.改善營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)。2.細(xì)胞自身

18、毒害小。3.改善氣體交換。4.能大量提供均勻的植物細(xì)胞。5.細(xì)胞增殖速度快，適應(yīng)于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。6.成本較高。需要特殊設(shè)備。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的意義：1.快速繁殖2.人工種子3.制備原生質(zhì)體4.突變體篩選5.次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)植物細(xì)胞次生產(chǎn)物積累特性？生長(zhǎng)偶聯(lián)型產(chǎn)物合成與細(xì)胞生長(zhǎng)成正比。中間型產(chǎn)物僅在細(xì)胞生長(zhǎng)下降時(shí)合成。非生長(zhǎng)偶聯(lián)型產(chǎn)物合成在細(xì)胞生長(zhǎng)停止以后。植物單細(xì)胞培養(yǎng)方法？1、平板培養(yǎng)2、看護(hù)培養(yǎng)3、微室培養(yǎng)4、條件培養(yǎng)法植物細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)體系的建立？ 高產(chǎn)細(xì)胞株誘導(dǎo)和篩選； 種子細(xì)胞增殖與放大培養(yǎng)。 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的技術(shù)要求1、培養(yǎng)細(xì)胞遺傳穩(wěn)定，產(chǎn)物的產(chǎn)量恒定2、細(xì)胞生長(zhǎng)及生物合成速度

19、快。在較短的時(shí)間內(nèi)能得到較高產(chǎn)量的終產(chǎn)物。3、代謝產(chǎn)物應(yīng)在細(xì)胞中積累而不被迅速分解，最好能將其釋放到培養(yǎng)基中。植物細(xì)胞大規(guī)模的培養(yǎng)方式？有哪些培養(yǎng)系統(tǒng)?植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的培養(yǎng)方式1、成批培養(yǎng)2、半連續(xù)培養(yǎng)3、連續(xù)培養(yǎng)植物細(xì)胞大規(guī)模的培養(yǎng)系統(tǒng)1、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)2、固定化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)植物細(xì)胞兩相培養(yǎng)技術(shù)的意義？1.減少由于產(chǎn)物的積累在胞內(nèi)形成的反饋抑制，有利于提高產(chǎn)物含量。2.有利于產(chǎn)物向胞外分泌、分離純化。3.對(duì)于易水解的產(chǎn)物，能夠及時(shí)移走代謝物，防止代謝物的水解。4.可以實(shí)現(xiàn)連續(xù)培養(yǎng)，從而大大降低生產(chǎn)成本。開發(fā)利用藥用植物生產(chǎn)有效成分的方法有哪些？各有何利弊？最有效的途徑是什么？1、化學(xué)合

20、成（有毒副作用）2、直接從野生藥用植株中分離提?。ㄆ茐纳鷳B(tài)環(huán)境）。3、從大田栽培藥用植物中分離提?。篈.生產(chǎn)周期很長(zhǎng)，占地面積大。B.繁殖系數(shù)小、耗種量大的藥用植物。C.因病毒危害導(dǎo)致一些藥用植物退化，嚴(yán)重影響產(chǎn)量和品質(zhì)。D.含量降低。利用細(xì)胞工程開發(fā)藥用植物生產(chǎn)有效成分，其意義：A.細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物，便于工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。B.離體快繁生產(chǎn)替代資源，保護(hù)自然資源。 C.不受季節(jié)、氣候和地域限制，可常年生產(chǎn)。 D.不占用耕地，提高生產(chǎn)效率。E.控制藥材質(zhì)量，改良藥材品質(zhì)。 G.發(fā)展新型生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)。第六章常用于分離原生質(zhì)體的材料有哪些？葉片，愈傷組織植物原生質(zhì)體制備、植株再生程序？1、植物材

21、料來源2、預(yù)處理3、分離4、純化5、活力測(cè)定6、培養(yǎng)7、植株再生原生質(zhì)體再生植株的階段有哪些？1、細(xì)胞壁的再生2、細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)3、愈傷組織形成4、愈傷組織分化及植株再生分離原生質(zhì)體的滲透壓穩(wěn)定劑有哪些？常用的滲透壓穩(wěn)定劑：甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡糖糖、鹽類（KCL、MgSO4·7H2O）等原生質(zhì)體培養(yǎng)的意義？原生質(zhì)體培養(yǎng)的意義1.可建立單細(xì)胞無性系；2.是遺傳轉(zhuǎn)化及細(xì)胞器轉(zhuǎn)移的良好受體；3.是體細(xì)胞雜種形成的重要環(huán)節(jié)；4.是分離植物細(xì)胞器的理想材料；5.是基礎(chǔ)研究的良好實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。植物原生質(zhì)體融合的方法？1、PEG誘導(dǎo)融合2、電融合PEG融合的原理及其特點(diǎn)？PEG分子具有輕微的負(fù)極性

22、，可與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成H鍵，從而在原生質(zhì)體之間形成分子橋，在高Ga2+和高PH作用下使原生質(zhì)體發(fā)生粘連進(jìn)而促使原生質(zhì)體融合，同時(shí)PEG能增加類脂膜的流動(dòng)性，促使原生質(zhì)體的核、細(xì)胞器發(fā)生融合。優(yōu)點(diǎn): 融合成本低。 融合子產(chǎn)生的異核率較高。融合過程不受物種限制。缺點(diǎn): 融合過程繁瑣。PEG可能對(duì)細(xì)胞有毒害。電融合原理及特點(diǎn)？電融合原理：利用改變電場(chǎng)誘導(dǎo)原生質(zhì)體彼此連接成串，再施以瞬間強(qiáng)脈沖使質(zhì)膜發(fā)生可逆性電擊穿，促使原生質(zhì)體融合的方法。特點(diǎn)1、融合效率高（60%）,適于大規(guī)模融合。2、對(duì)原生質(zhì)體傷害較小,可直接進(jìn)行培養(yǎng)。3、融合技術(shù)操作簡(jiǎn)便。植物體細(xì)胞雜交的程序及意義？體細(xì)胞雜交的程序：1、原生質(zhì)體分離2、原生質(zhì)體純化3