黃曲霉限量測(cè)定方法驗(yàn)證方案(HPLC)

1、 含量測(cè)定方法驗(yàn)證文件編碼： MS TM 600110 廣東和翔制藥有限公司2017年3月含量測(cè)定方法驗(yàn)證目錄驗(yàn)證方案驗(yàn)證報(bào)告驗(yàn)證證書黃曲霉毒素含量測(cè)定方法驗(yàn)證方案起草、審核、批準(zhǔn)表起草部門起草人簽名日期質(zhì)管部年 月 日審核部門審核人簽名日期質(zhì)管部年 月 日批準(zhǔn)部門批準(zhǔn)人簽名日期質(zhì)管部年 月 日驗(yàn)證方案驗(yàn)證方案目錄1 驗(yàn)證原則和目的2 范圍3 驗(yàn)證依據(jù)4 驗(yàn)證組織及職責(zé)5 驗(yàn)證時(shí)間6 驗(yàn)證前確認(rèn)6.1 實(shí)施人員確認(rèn)6.2 驗(yàn)證所需文件確認(rèn)6.3 儀器設(shè)備確認(rèn)6.4 色譜條件確認(rèn)6.5 試劑試藥確認(rèn)6.6 溶液制備方法7 驗(yàn)證內(nèi)容及過程7.1準(zhǔn)確度7.2 重復(fù)性8 驗(yàn)證中偏差/變更處理9 培訓(xùn)1

2、0 驗(yàn)證報(bào)告的書寫1 驗(yàn)證原則和目的建立黃曲霉毒素含量限量測(cè)定的檢驗(yàn)方法驗(yàn)證，在實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作，確保新開發(fā)的檢驗(yàn)方法、轉(zhuǎn)移應(yīng)用的檢驗(yàn)方法有效實(shí)施，以驗(yàn)證該檢驗(yàn)方法是否適用于藥材、飲片及制劑中的黃曲霉毒素含量測(cè)定。2 范圍本驗(yàn)證方案適用于采用高效液相色譜儀應(yīng)用光化學(xué)衍生法對(duì)黃曲霉毒素標(biāo)樣進(jìn)行測(cè)定的檢驗(yàn)方法驗(yàn)證。3 驗(yàn)證依據(jù)中國藥典2015版四部通則中黃曲霉毒素測(cè)定法，中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則。藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(2010年修訂)4 驗(yàn)證組織及職責(zé)4.1 驗(yàn)證小組人員姓名部門職務(wù)驗(yàn)證分工質(zhì)管部組長負(fù)責(zé)驗(yàn)證各項(xiàng)工作的安排。負(fù)責(zé)監(jiān)督驗(yàn)證的實(shí)施過程。負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)。質(zhì)

3、管部組員負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及驗(yàn)證報(bào)告的審核。負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證中出現(xiàn)的問題提出指導(dǎo)意見。質(zhì)管部組員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證方案起草與實(shí)施，對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性負(fù)責(zé)，負(fù)責(zé)起草驗(yàn)證報(bào)告。質(zhì)管部組員負(fù)責(zé)匯總數(shù)據(jù)、整理驗(yàn)證報(bào)告。4.2 驗(yàn)證小組職責(zé)驗(yàn)證方案和報(bào)告的起草、審核、批準(zhǔn)該驗(yàn)證方案由檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)起草驗(yàn)證方案，驗(yàn)證方案經(jīng)質(zhì)管部等部門主管領(lǐng)導(dǎo)進(jìn)行審核，最終由質(zhì)量經(jīng)理批準(zhǔn)。驗(yàn)證過程實(shí)施完成后，驗(yàn)證報(bào)告由驗(yàn)證方案起草人負(fù)責(zé)匯總，并經(jīng)質(zhì)管部等部門主管領(lǐng)導(dǎo)進(jìn)行審核，最終由質(zhì)量經(jīng)理批準(zhǔn)。驗(yàn)證方案的培訓(xùn)驗(yàn)證方案起草人在驗(yàn)證方案經(jīng)質(zhì)量經(jīng)理批準(zhǔn)后及驗(yàn)證方案實(shí)施前，對(duì)本次驗(yàn)證相關(guān)人員組織培訓(xùn)工作，由質(zhì)管部主管領(lǐng)導(dǎo)負(fù)責(zé)該次驗(yàn)證方案的培訓(xùn)工作

4、，并將該次的培訓(xùn)記錄交至人力資源部歸檔。確認(rèn)的組織實(shí)施和確認(rèn)過程中的變更和偏差 該次驗(yàn)證工作組織實(shí)施由質(zhì)管部主管領(lǐng)導(dǎo)負(fù)責(zé)，質(zhì)管部負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證過程中的變更和偏差進(jìn)行確認(rèn)。5 驗(yàn)證時(shí)間 2012年7月6 驗(yàn)證前確認(rèn)6.1 實(shí)施人員確認(rèn)姓名部門要求確認(rèn)結(jié)果質(zhì)管部需經(jīng)過相關(guān)內(nèi)容的培訓(xùn)。是 否質(zhì)管部需經(jīng)過相關(guān)內(nèi)容的培訓(xùn)。是 否質(zhì)管部經(jīng)過充分的培訓(xùn)，熟悉高效液相色譜儀的使用方法及分析方法的操作步驟。是 否質(zhì)管部經(jīng)過充分的培訓(xùn)，熟悉高效液相色譜儀的使用方法及分析方法的操作步驟。是 否6.2 驗(yàn)證所需文件資料、應(yīng)齊全。相關(guān)的文件草案應(yīng)具備。文件名稱文件編碼存放地點(diǎn)確認(rèn)結(jié)果高效液相色譜儀、柱后衍生儀操作及養(yǎng)護(hù)規(guī)程

5、TS OP 206300質(zhì)管中心有 無6.3 儀器設(shè)備確認(rèn) 儀器名稱型號(hào)要求確認(rèn)結(jié)果高效液相色譜儀LC1260已經(jīng)過校驗(yàn)并在有效期內(nèi)是 否電子分析天平已經(jīng)過校驗(yàn)并在有效期內(nèi)是 否超聲波清洗機(jī)已經(jīng)過校驗(yàn)并在有效期內(nèi)是 否普瑞邦柱后衍生器已經(jīng)過校驗(yàn)并在有效期內(nèi)是 否玻璃儀器需徹底清洗并經(jīng)檢定，一般玻璃儀器要保證潔凈。是 否TGL-15B高速臺(tái)式離心機(jī)已經(jīng)過校驗(yàn)并在有效期內(nèi)是 否泵流操作架、雙孔超靜音氣泵、寧波新芝高速分散器已經(jīng)過校驗(yàn)并在有效期內(nèi)是 否6.4 色譜條件確認(rèn)項(xiàng)目要求確認(rèn)結(jié)果色譜柱4.6×150mm symmetry® C18 柱，5m是 否PriboFast

6、4;黃曲霉素總量免疫親合柱是否在有效期內(nèi)是 否檢測(cè)器熒光檢測(cè)器是 否檢測(cè)波長激發(fā)波長=360nm（或365nm），發(fā)射波長ex=450nm。是 否進(jìn)樣量5ul、l0ul、l5ul、20ul、25ul是 否流速0.8 ml/min是 否柱溫30是 否流動(dòng)相甲醇-乙腈-水(60：:30：10)是 否6.5 試劑試藥確認(rèn)內(nèi)容要求確認(rèn)結(jié)果試劑試藥乙腈：色譜純甲醇：色譜純水：1級(jí)純化水是 否對(duì)照品黃曲霉毒素（G1、G2、B1、B2）（中國藥品生物制品檢定所）是 否供試品根據(jù)藥典制備的黃曲霉毒素標(biāo)樣是 否6.5溶液制備方法6.5.1對(duì)照品溶液制備方法精密量取黃曲霉毒素混合對(duì)照品溶液（黃曲霉毒素B1、黃曲霉

7、毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2標(biāo)示濃度分別為1.Og/ml、0.3g/ml、1.0g/ml、0.3g/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為貯備溶液。精密量取貯備溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。7 驗(yàn)證內(nèi)容及過程7.1準(zhǔn)確度7.1.1 驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)校正曲線線性方程至少達(dá)到0.999% 操作步驟1 進(jìn)對(duì)照品溶液五次，記錄色譜圖，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。表1 黃曲霉毒素G1進(jìn)樣情況進(jìn)樣次數(shù)12345保留時(shí)間進(jìn)樣體積進(jìn)樣量峰面積表2 黃曲霉毒素G2進(jìn)樣情況進(jìn)樣次數(shù)12345保留時(shí)間進(jìn)樣體積進(jìn)樣量峰面積表3 黃曲霉毒素B1進(jìn)樣情況進(jìn)樣次數(shù)12345保留時(shí)間進(jìn)樣

8、體積進(jìn)樣量峰面積表4 黃曲霉毒素B2進(jìn)樣情況進(jìn)樣次數(shù)12345保留時(shí)間進(jìn)樣體積進(jìn)樣量峰面積7.1.3 驗(yàn)證結(jié)果與評(píng)價(jià) 黃曲霉毒素G2的線性方程為 ，相關(guān)系數(shù)為 ，截距為 ，黃曲霉毒素G1的線性方程為 ，相關(guān)系數(shù)為 ，截距為 ，黃曲霉毒素B2的線性方程為 ，相關(guān)系數(shù)為 ，截距為 ，黃曲霉毒素B1的線性方程為 ，相關(guān)系數(shù)為 ，截距為 ，表明它的進(jìn)樣量與峰面積均呈線性關(guān)系。方法的線性和范圍符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。7.2重復(fù)性7.2.1 驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)7.以主峰計(jì)算色譜柱理論塔板數(shù)不低于1500。7.主峰rsd不大于2.0%。7.主峰與最近雜質(zhì)峰分離度不低于1.5。7.2.2 操作步驟由同一個(gè)分析人員，在相同的條

9、件下，對(duì)同一樣品進(jìn)行多次試驗(yàn)，按照規(guī)定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，用5個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。7.2.3驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià)供試品峰拖尾因子 ，理論塔板數(shù) ，各個(gè)組分峰之間的分離度均大于1.5，重復(fù)進(jìn)樣的保留時(shí)間RSD為 。方法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)符合標(biāo)準(zhǔn)。黃曲霉毒素G2測(cè)定次數(shù)12345保留時(shí)間平均值RSD%理論塔板數(shù)平均值RSD%分離度平均值RSD%黃曲霉毒素G1測(cè)定次數(shù)12345保留時(shí)間平均值RSD%理論塔板數(shù)平均值RSD%分離度平均值RSD%黃曲霉毒素B2測(cè)定次數(shù)12345保留時(shí)間平均值RSD%理論塔板數(shù)平均值RSD%分離度平均值RSD%黃曲霉毒素B1測(cè)定次數(shù)12345保留時(shí)間平均值RSD%理論塔板數(shù)平均值RSD%分離度平均值RSD%8 驗(yàn)證中偏差/變更處理驗(yàn)證過程中如果出現(xiàn)偏差和變更，應(yīng)立即通知驗(yàn)證小組并對(duì)偏差和變更進(jìn)行詳細(xì)記錄，分析偏差產(chǎn)生的根本原因、進(jìn)行影響分析并提出解決方法。所有偏差和變更得到有效處理后，并且已被質(zhì)管部批準(zhǔn)，驗(yàn)證方可進(jìn)入下一步驟。原始的偏差處理處理單和變更處理單經(jīng)過批準(zhǔn)后必須附在最終