黃曲霉限量測定方法驗證方案(HPLC)

1、 含量測定方法驗證文件編碼： MS TM 600110 廣東和翔制藥有限公司2017年3月含量測定方法驗證目錄驗證方案驗證報告驗證證書黃曲霉毒素含量測定方法驗證方案起草、審核、批準表起草部門起草人簽名日期質(zhì)管部年 月 日審核部門審核人簽名日期質(zhì)管部年 月 日批準部門批準人簽名日期質(zhì)管部年 月 日驗證方案驗證方案目錄1 驗證原則和目的2 范圍3 驗證依據(jù)4 驗證組織及職責(zé)5 驗證時間6 驗證前確認6.1 實施人員確認6.2 驗證所需文件確認6.3 儀器設(shè)備確認6.4 色譜條件確認6.5 試劑試藥確認6.6 溶液制備方法7 驗證內(nèi)容及過程7.1準確度7.2 重復(fù)性8 驗證中偏差/變更處理9 培訓(xùn)1

2、0 驗證報告的書寫1 驗證原則和目的建立黃曲霉毒素含量限量測定的檢驗方法驗證，在實驗過程中嚴格按照標準操作，確保新開發(fā)的檢驗方法、轉(zhuǎn)移應(yīng)用的檢驗方法有效實施，以驗證該檢驗方法是否適用于藥材、飲片及制劑中的黃曲霉毒素含量測定。2 范圍本驗證方案適用于采用高效液相色譜儀應(yīng)用光化學(xué)衍生法對黃曲霉毒素標樣進行測定的檢驗方法驗證。3 驗證依據(jù)中國藥典2015版四部通則中黃曲霉毒素測定法，中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則。藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(2010年修訂)4 驗證組織及職責(zé)4.1 驗證小組人員姓名部門職務(wù)驗證分工質(zhì)管部組長負責(zé)驗證各項工作的安排。負責(zé)監(jiān)督驗證的實施過程。負責(zé)驗證方案及驗證報告的批準。質(zhì)

3、管部組員負責(zé)驗證方案及驗證報告的審核。負責(zé)對驗證中出現(xiàn)的問題提出指導(dǎo)意見。質(zhì)管部組員負責(zé)檢驗方法的驗證方案起草與實施，對所測數(shù)據(jù)準確性負責(zé)，負責(zé)起草驗證報告。質(zhì)管部組員負責(zé)匯總數(shù)據(jù)、整理驗證報告。4.2 驗證小組職責(zé)驗證方案和報告的起草、審核、批準該驗證方案由檢驗人員負責(zé)起草驗證方案，驗證方案經(jīng)質(zhì)管部等部門主管領(lǐng)導(dǎo)進行審核，最終由質(zhì)量經(jīng)理批準。驗證過程實施完成后，驗證報告由驗證方案起草人負責(zé)匯總，并經(jīng)質(zhì)管部等部門主管領(lǐng)導(dǎo)進行審核，最終由質(zhì)量經(jīng)理批準。驗證方案的培訓(xùn)驗證方案起草人在驗證方案經(jīng)質(zhì)量經(jīng)理批準后及驗證方案實施前，對本次驗證相關(guān)人員組織培訓(xùn)工作，由質(zhì)管部主管領(lǐng)導(dǎo)負責(zé)該次驗證方案的培訓(xùn)工作

4、，并將該次的培訓(xùn)記錄交至人力資源部歸檔。確認的組織實施和確認過程中的變更和偏差 該次驗證工作組織實施由質(zhì)管部主管領(lǐng)導(dǎo)負責(zé)，質(zhì)管部負責(zé)對驗證過程中的變更和偏差進行確認。5 驗證時間 2012年7月6 驗證前確認6.1 實施人員確認姓名部門要求確認結(jié)果質(zhì)管部需經(jīng)過相關(guān)內(nèi)容的培訓(xùn)。是 否質(zhì)管部需經(jīng)過相關(guān)內(nèi)容的培訓(xùn)。是 否質(zhì)管部經(jīng)過充分的培訓(xùn)，熟悉高效液相色譜儀的使用方法及分析方法的操作步驟。是 否質(zhì)管部經(jīng)過充分的培訓(xùn)，熟悉高效液相色譜儀的使用方法及分析方法的操作步驟。是 否6.2 驗證所需文件資料、應(yīng)齊全。相關(guān)的文件草案應(yīng)具備。文件名稱文件編碼存放地點確認結(jié)果高效液相色譜儀、柱后衍生儀操作及養(yǎng)護規(guī)程

5、TS OP 206300質(zhì)管中心有 無6.3 儀器設(shè)備確認 儀器名稱型號要求確認結(jié)果高效液相色譜儀LC1260已經(jīng)過校驗并在有效期內(nèi)是 否電子分析天平已經(jīng)過校驗并在有效期內(nèi)是 否超聲波清洗機已經(jīng)過校驗并在有效期內(nèi)是 否普瑞邦柱后衍生器已經(jīng)過校驗并在有效期內(nèi)是 否玻璃儀器需徹底清洗并經(jīng)檢定，一般玻璃儀器要保證潔凈。是 否TGL-15B高速臺式離心機已經(jīng)過校驗并在有效期內(nèi)是 否泵流操作架、雙孔超靜音氣泵、寧波新芝高速分散器已經(jīng)過校驗并在有效期內(nèi)是 否6.4 色譜條件確認項目要求確認結(jié)果色譜柱4.6×150mm symmetry® C18 柱，5m是 否PriboFast

6、4;黃曲霉素總量免疫親合柱是否在有效期內(nèi)是 否檢測器熒光檢測器是 否檢測波長激發(fā)波長=360nm（或365nm），發(fā)射波長ex=450nm。是 否進樣量5ul、l0ul、l5ul、20ul、25ul是 否流速0.8 ml/min是 否柱溫30是 否流動相甲醇-乙腈-水(60：:30：10)是 否6.5 試劑試藥確認內(nèi)容要求確認結(jié)果試劑試藥乙腈：色譜純甲醇：色譜純水：1級純化水是 否對照品黃曲霉毒素（G1、G2、B1、B2）（中國藥品生物制品檢定所）是 否供試品根據(jù)藥典制備的黃曲霉毒素標樣是 否6.5溶液制備方法6.5.1對照品溶液制備方法精密量取黃曲霉毒素混合對照品溶液（黃曲霉毒素B1、黃曲霉

7、毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2標示濃度分別為1.Og/ml、0.3g/ml、1.0g/ml、0.3g/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為貯備溶液。精密量取貯備溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。7 驗證內(nèi)容及過程7.1準確度7.1.1 驗證合格標準校正曲線線性方程至少達到0.999% 操作步驟1 進對照品溶液五次，記錄色譜圖，計算相關(guān)系數(shù)。表1 黃曲霉毒素G1進樣情況進樣次數(shù)12345保留時間進樣體積進樣量峰面積表2 黃曲霉毒素G2進樣情況進樣次數(shù)12345保留時間進樣體積進樣量峰面積表3 黃曲霉毒素B1進樣情況進樣次數(shù)12345保留時間進樣

8、體積進樣量峰面積表4 黃曲霉毒素B2進樣情況進樣次數(shù)12345保留時間進樣體積進樣量峰面積7.1.3 驗證結(jié)果與評價 黃曲霉毒素G2的線性方程為 ，相關(guān)系數(shù)為 ，截距為 ，黃曲霉毒素G1的線性方程為 ，相關(guān)系數(shù)為 ，截距為 ，黃曲霉毒素B2的線性方程為 ，相關(guān)系數(shù)為 ，截距為 ，黃曲霉毒素B1的線性方程為 ，相關(guān)系數(shù)為 ，截距為 ，表明它的進樣量與峰面積均呈線性關(guān)系。方法的線性和范圍符合驗證標準。7.2重復(fù)性7.2.1 驗證合格標準7.以主峰計算色譜柱理論塔板數(shù)不低于1500。7.主峰rsd不大于2.0%。7.主峰與最近雜質(zhì)峰分離度不低于1.5。7.2.2 操作步驟由同一個分析人員，在相同的條

9、件下，對同一樣品進行多次試驗，按照規(guī)定的色譜條件進行測定，用5個測定結(jié)果進行評價。7.2.3驗證結(jié)果及評價供試品峰拖尾因子 ，理論塔板數(shù) ，各個組分峰之間的分離度均大于1.5，重復(fù)進樣的保留時間RSD為 。方法的系統(tǒng)適用性試驗符合標準。黃曲霉毒素G2測定次數(shù)12345保留時間平均值RSD%理論塔板數(shù)平均值RSD%分離度平均值RSD%黃曲霉毒素G1測定次數(shù)12345保留時間平均值RSD%理論塔板數(shù)平均值RSD%分離度平均值RSD%黃曲霉毒素B2測定次數(shù)12345保留時間平均值RSD%理論塔板數(shù)平均值RSD%分離度平均值RSD%黃曲霉毒素B1測定次數(shù)12345保留時間平均值RSD%理論塔板數(shù)平均值RSD%分離度平均值RSD%8 驗證中偏差/變更處理驗證過程中如果出現(xiàn)偏差和變更，應(yīng)立即通知驗證小組并對偏差和變更進行詳細記錄，分析偏差產(chǎn)生的根本原因、進行影響分析并提出解決方法。所有偏差和變更得到有效處理后，并且已被質(zhì)管部批準，驗證方可進入下一步驟。原始的偏差處理處理單和變更處理單經(jīng)過批準后必須附在最終