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1、試題一玻璃器皿包扎實(shí)驗(yàn)要求:能熟練、規(guī)范包扎試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、移液管。實(shí)驗(yàn)用品:1、帶塞試管;2、三角瓶;3、培養(yǎng)皿;4、移液管;5、報(bào)紙;6、棉花;7、棉繩等步驟操 作 要 求評(píng) 分 標(biāo) 準(zhǔn)滿分得分備注1包扎試管(7支)結(jié)實(shí)、不松動(dòng)1分,活結(jié)1分22包培養(yǎng)皿(8套)結(jié)實(shí)、不松動(dòng)1分,平整1分23包三角瓶1只棉塞1分,活結(jié)1分24移液管1支加棉花1分,卷緊、打結(jié)1分2口答題回答要點(diǎn)2口答題: 玻璃器皿可以采用哪些滅菌方法?干熱滅菌(高溫)時(shí)間長(zhǎng)溫度高。高壓蒸汽滅菌:1、溫?zé)崴枘虦囟冉档汀?、溫?zé)岽┩噶?qiáng)3、濕熱的蒸汽有潛熱存在。試題二 細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色實(shí)驗(yàn)要求:正確制片;染色觀察正確。實(shí)
2、驗(yàn)用品:1、生物顯微鏡;2、載玻片;3、酒精燈;4、染液5、香柏油;6、洗液;7、膠頭滴管;8、接種環(huán);10、斜面菌種等。步驟操 作 要 求評(píng) 分 標(biāo) 準(zhǔn)滿分得分備注1制片涂片1分、固定1分,無菌操作1分32染色23結(jié)果正確性染色結(jié)果觀察3口答題1回答要點(diǎn)2口答題:1、涂片厚薄對(duì)結(jié)果有何影響?涂片太厚會(huì)造成菌體堆積而難以看清細(xì)胞個(gè)體形態(tài),太薄會(huì)難以在顯微鏡下找到細(xì)菌。試題三 酵母美藍(lán)染色及死活細(xì)胞鑒別實(shí)驗(yàn)要求:無菌操作正確;正確制片;正確鑒別死活細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)用品:1、酵母菌斜面;2、載玻片;3、蓋玻片;4、美藍(lán)染液;5、酒精燈;6、接種環(huán);7、生物顯微鏡等。步驟操 作 要 求評(píng) 分 標(biāo) 準(zhǔn)滿分得
3、分備注1制片水浸片1分,無菌操作1分22染色時(shí)間正確33鑒別鑒別準(zhǔn)確3口答題1回答要點(diǎn)2口答題: 1美藍(lán)染色為何能鑒別酵母細(xì)胞死活?活:還原力強(qiáng),染后無色。死:還原力弱,染后成藍(lán)色試題四 霉菌乳酸石炭酸棉蘭染色實(shí)驗(yàn)要求:正確進(jìn)行霉菌染色。實(shí)驗(yàn)用品:1、霉菌培養(yǎng)物;2、載玻片;3、蓋玻片;4、乳酸石炭酸棉蘭染液;5、解剖針等。步驟操 作 要 求評(píng) 分 標(biāo) 準(zhǔn)滿分得分備注1制片染液適量1分,挑取菌絲適量,洗孢子1分22加蓋玻片23觀察菌絲2分,孢子頭2分4口答題1回答要點(diǎn)2口答題:1、霉菌菌絲分哪2種? 基內(nèi)菌絲和氣生菌絲試題五 微生物大小測(cè)定實(shí)驗(yàn)要求:能夠用鏡臺(tái)測(cè)微尺校正目鏡測(cè)微尺;測(cè)定微生物大
4、小。實(shí)驗(yàn)用品:1、生物顯微鏡;2、鏡臺(tái)測(cè)微尺;3、標(biāo)本片;4、香柏油;5、洗液;6、擦鏡紙。步驟操 作 要 求評(píng) 分 標(biāo) 準(zhǔn)滿分得分備注1目鏡校正 低倍鏡1分、高倍鏡1分、油鏡1分32換算長(zhǎng)度低倍鏡1分10、高倍鏡1分2.5、油鏡1分133測(cè)大小高倍鏡或油鏡下測(cè)大小2口答題1回答要點(diǎn)2口答題:1、鏡臺(tái)測(cè)微尺每格多大? 10微米 2、球菌直徑、桿菌長(zhǎng)度和寬度、螺菌兩端長(zhǎng)和寬大小如何表示?目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度(um)=兩重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)*10/兩重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)試題六 微生物分離、純化技術(shù)實(shí)驗(yàn)要求:熟練掌握無菌操作技術(shù);斜面劃線轉(zhuǎn)接;平板劃線分離。實(shí)驗(yàn)用品:1、酒精燈;2、接種環(huán);3、斜
5、面菌種;4、試管斜面;5、溶化的培養(yǎng)基;6、記號(hào)筆。步驟操 作 要 求評(píng) 分 標(biāo) 準(zhǔn)滿分得分備注1無菌操作接種環(huán)滅菌1分,降溫1分22斜面劃線取試管塞1分,Z形劃線1分23倒平板倒量合適14平板劃線三區(qū)劃線1分,劃線力度1分,接種環(huán)的滅菌1分3口答題1回答要點(diǎn)2口答題:1、灼燒接種環(huán)的目的? 2、接種環(huán)溫度高會(huì)有何結(jié)果?四、微生物的五大共性個(gè)體小,面積大;吸收多,轉(zhuǎn)化快;生長(zhǎng)旺,繁殖快;適應(yīng)性強(qiáng),易變異;分布廣,種類多。最重要的共性為:個(gè)體小,面積大,這樣大的比表面積特別有利于它們和周圍環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)、能量、信息的交換。微生物的其它很多屬性都和這一特點(diǎn)密切相關(guān)。原核生物(prokaryotes)
6、指一大類細(xì)胞核無核膜包裹,只存在稱作核區(qū)的裸露DNA的原始單細(xì)胞生物,包括真細(xì)菌(eubacteria)和古生菌(archaea)兩大類。廣義的細(xì)菌。原核生物包括細(xì)菌、放線菌、立克次氏體,支原體、衣原體及藍(lán)細(xì)菌。1、細(xì)菌(bacteria)指真細(xì)菌。一類細(xì)胞細(xì)短(約0.5m,長(zhǎng)度約0.55m)、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌、多以二分裂方式繁殖和水生性較強(qiáng)的原核生物。細(xì)胞壁的功能:固定細(xì)胞外形;協(xié)助鞭毛運(yùn)動(dòng);保護(hù)細(xì)胞免受外力的損傷;為正常細(xì)胞分裂所必需;阻攔有害物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞;與細(xì)菌的抗原性、致病性和對(duì)噬菌體的敏感性密切相關(guān)肽聚糖可被溶菌酶破壞;青霉素也可干擾短肽之間肽鍵的形成從而破壞細(xì)胞壁肽聚糖的合成。
7、外膜的功能、控制細(xì)胞的透性、吸附Mg2+ 、Ca2+等并提高這些離子在細(xì)胞表面的濃度; ; 、由于LPS結(jié)構(gòu)的變化,決定細(xì)胞壁抗原多樣性(沙門氏菌屬表面抗原類型2107個(gè)),可用于傳染病的診斷和病原的地理定位;、是G-病原菌致病物質(zhì)內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ),類脂A是內(nèi)毒素的毒性中心;、是許多噬菌體在細(xì)胞表面的吸附受體。細(xì)胞膜的功能:選擇性地控制細(xì)胞內(nèi)、外的物質(zhì)的運(yùn)送、交換;維持細(xì)胞內(nèi)正常滲透壓的結(jié)構(gòu)屏障合成細(xì)胞壁各種組分和莢膜等大分子的場(chǎng)所許多酶和電子傳遞鏈組分的所在部位,進(jìn)行氧化磷酸化或光合磷酸化的產(chǎn)能基地鞭毛著生點(diǎn)和提供其運(yùn)動(dòng)所需的能量等(1)糖被(glycocalyx)包被于某些細(xì)菌細(xì)胞壁外的一
8、層厚度不定的透明膠狀物質(zhì)。莢膜細(xì)菌群體特征 菌落:光滑型菌落,表面濕潤(rùn)、光澤、粘液狀。糖被的功能保護(hù)作用:保護(hù)細(xì)菌免受干旱損壞,防止噬菌體的吸附和裂解,使致病菌免受突破主白細(xì)胞吞噬,貯藏養(yǎng)料,作為透性屏障或離子交換系介質(zhì),附著作用,細(xì)菌間的信息識(shí)別作用,堆積代謝廢物產(chǎn)鞭毛細(xì)菌種類螺旋菌和弧菌普遍生有鞭毛,除運(yùn)動(dòng)球菌屬外,球菌一般無鞭毛芽孢(endospore,spore):某些細(xì)菌在其生長(zhǎng)發(fā)育后期 , 在細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強(qiáng)的休眠體。 滲透調(diào)節(jié)皮層膨脹學(xué)說芽孢耐熱機(jī)制(一)芽孢衣(疏水性角蛋白)對(duì)多價(jià)陽離子和水分的透性很差;皮層的離子強(qiáng)度很高,會(huì)產(chǎn)生極高的滲
9、透壓去奪取芽孢核心中的水分,而造成芽孢皮層的膨脹和核心的高度失水;核心部分的生命物質(zhì)(DNA、RNA、Pr等)處于高度失水狀態(tài),各種酶活性降低,因而產(chǎn)生極強(qiáng)的耐熱性。研究芽孢的理論與實(shí)踐意:細(xì)菌分類、鑒定中的重要形態(tài)學(xué)指標(biāo);指導(dǎo)菌種保藏;制定滅菌參數(shù);提高菌種篩選率伴孢晶體(parasporal crystal 內(nèi)毒素)少數(shù)芽孢桿菌(如蘇云金芽孢桿菌)在形成芽孢的同時(shí),會(huì)在芽孢旁形成一顆菱形、方形或不規(guī)則形的堿溶性蛋白質(zhì)晶體。裂殖(fission)指一個(gè)細(xì)胞通過分裂而形成兩個(gè)子細(xì)胞的過程。一般細(xì)菌進(jìn)行橫分裂,而桿菌進(jìn)行橫分裂和縱分裂。芽殖(budding bacteria)在母細(xì)胞表面(尤其是
10、一端)先形成一個(gè)小突起,待其長(zhǎng)大到與母細(xì)胞相仿后在相互分離獨(dú)立生活的一種繁殖方式。菌落(colony):形成以母細(xì)胞為中心的一小堆肉眼可見的、有一定形態(tài)構(gòu)造等特征的子細(xì)胞集團(tuán),稱為菌落。放線菌的菌落特征菌落表面干燥、不透明、呈緊密的絨狀或堅(jiān)實(shí)、多皺、上有一薄層彩色“干粉”。菌落周圍具放射狀菌絲。菌落質(zhì)地硬而且致密,菌落小而不廣泛延伸。接種針難以挑取,有時(shí)可挑碎,有時(shí)可將整個(gè)菌落挑起。由于菌絲和孢子常具不同色素,使菌落正面、背面呈不同色澤,菌落邊緣的瓊脂平面有變形現(xiàn)象。從支原體、立克次氏體至衣原體寄生性逐步增強(qiáng)。支原體:是一類無細(xì)胞壁,介于獨(dú)立生活和細(xì)胞內(nèi)寄生的最小型原核生物。立克次氏體(Ric
11、kettsia)是一類專性寄生于真核細(xì)胞內(nèi)的G原核生物。衣原體(Chlamydia)是一類在真核細(xì)胞內(nèi)營(yíng)專性能量寄生的小型G原核生物。曾長(zhǎng)期被認(rèn)為是“大型病毒”。 假根:低等真菌匍匐菌絲與固體基質(zhì)接觸處分化出來的根狀結(jié)構(gòu)具有固著和汲取養(yǎng)料的功能 子實(shí)體:在其里面或上面可產(chǎn)生無性或有性孢子,有一定形狀和構(gòu)造的任何菌絲體組織營(yíng)養(yǎng)菌絲:密布在固體營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)內(nèi)部主要執(zhí)行吸取營(yíng)養(yǎng)物功能的菌絲體氣生菌絲:伸展到空間的菌絲體孢子絲:放線菌的氣生菌絲進(jìn)一步成熟,分化成的結(jié)構(gòu)。假菌絲: 某些酵母在繁殖過程中芽體不脫落并相連成藕節(jié)狀的細(xì)胞串生命周期:指的是上一代生物個(gè)體經(jīng)過一系列的生長(zhǎng),發(fā)育階段而產(chǎn)生下一代個(gè)體的全
12、部過程病毒:病毒是一類個(gè)體微小的,沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的,專性寄生于活細(xì)胞內(nèi)的微生物,在細(xì)胞外具有大分子特征,在活細(xì)胞內(nèi)部具有生命特征。噬菌斑:噬菌體在菌苔上形成的負(fù)菌落。溫和噬菌體:噬菌體與宿主細(xì)胞基因整合,同步復(fù)制,長(zhǎng)期共存溶源性、溶源菌(宿主)1 病毒的特征: (1)形體及其微小,一般都能通過細(xì)菌濾器;沒有細(xì)胞構(gòu)造,其主要成分僅為核酸和蛋白質(zhì);每一種病毒只含一種核酸,不是DNA 就是RNA,既無產(chǎn)能酶系也無蛋白質(zhì)和核酸合成酶系;以核酸和蛋白質(zhì)等元件的裝配實(shí)現(xiàn)其大量的繁殖;在離體條件下,能以無生命的生物大分子存在,并可長(zhǎng)期保存其侵染活力;對(duì)一般抗生素不敏感,但對(duì)于干擾素敏感;有些病毒的核酸不能整合
13、到宿主的基因組中,并誘發(fā)潛伏性感染。2 噬菌體效價(jià):每毫升試樣所含的具侵染性的噬菌體的粒子數(shù)。 方法: 1 雙層平板法: 2 電鏡直接計(jì)數(shù)法。 3 分光光度法微生物的六種營(yíng)養(yǎng)要素: 碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽和水。生長(zhǎng)因子:生長(zhǎng)因子是一類調(diào)節(jié)微生物正常代謝所必需,但不能用簡(jiǎn)單的碳,氮源自行合成的有機(jī)物?;墚愷B(yǎng)微生物:一類通過氧化有機(jī)物取得能量并以有機(jī)物為碳源的微生物?;茏责B(yǎng)微生物:一類通過氧化無機(jī)物取得能量并以CO2為唯一或主要碳源的微生物?;九囵B(yǎng)基:按大多數(shù)微生物的營(yíng)養(yǎng)需要配制一種培養(yǎng)基,稱為基本培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制非需要菌的生長(zhǎng),促進(jìn)需要菌的
14、生長(zhǎng),這種培養(yǎng)基叫選擇培養(yǎng)基。加富培養(yǎng)基:一般指在培養(yǎng)基內(nèi)加入額外的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),使需要的微生物營(yíng)養(yǎng)更充分,生長(zhǎng)的更快,這種培養(yǎng)基叫加富培養(yǎng)基。鑒別性培養(yǎng)基:一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑,從而達(dá)到只須用肉眼鑒別顏色就能方便地從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。2、細(xì)胞膜運(yùn)送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的四種方式(1) 單純擴(kuò)散:又稱被動(dòng)運(yùn)送,指疏水性雙分子層細(xì)胞膜,在無載體蛋白的參與下,單詞依靠物理擴(kuò)散方式讓許多小分子非電離分子尤其是親水性分子的被動(dòng)通過的一種物質(zhì)運(yùn)送方式。(2) 促進(jìn)擴(kuò)散:指運(yùn)質(zhì)在運(yùn)送過程中,必須借助存在于細(xì)胞膜上的底物特異載體蛋白底協(xié)助但不耗能底一類物質(zhì)擴(kuò)散運(yùn)送方式
15、。(3) 基團(tuán)移位:指一類既需特異載體蛋白的參與,又需耗能的一種物質(zhì)運(yùn)送方式。物質(zhì)在運(yùn)送前后還會(huì)發(fā)生分子結(jié)構(gòu)的變化。(4)主動(dòng)運(yùn)輸發(fā)酵:在無氧等外源氫受體的條件下,底物脫氫后所產(chǎn)生的還原力H未經(jīng)呼吸鏈傳遞而直接交給某一內(nèi)源性中間代謝物接受,以實(shí)現(xiàn)底物水平磷酸化產(chǎn)能的一類生物氧化反應(yīng)。硝化作用:氨態(tài)氮經(jīng)硝化細(xì)菌的氧化,轉(zhuǎn)變?yōu)橄跛釕B(tài)氮的過程。反硝化作用:又稱脫氮作用,指硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氣態(tài)氮化物的作用。厭氧呼吸:一類呼吸鏈末端的氫受體為外源無機(jī)氧化物(少數(shù)為無機(jī)氧化物)的生物氧化方式。10、生物固氮:指大氣中的分子氮通過微生物固氮酶的催化而還原成氨的過程。11、次生代謝產(chǎn)物:某些微生物生長(zhǎng)到穩(wěn)定期后,
16、以結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、代謝途徑明確、產(chǎn)量較大的初生代謝物作前體,通過復(fù)雜的次生代謝途徑所合成的各種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的化合物。通常,放線菌最適ph范圍為7.58.5,酵母菌的最適ph范圍為3.86.0,霉菌的最適ph范圍為4.05.8。防腐:利用某種理化因素完全抑制霉腐微生物的生長(zhǎng)繁殖,即通過制菌作用防止食品,生物制品等發(fā)生霉腐的措施。石炭酸系數(shù):指在一定時(shí)間內(nèi),被試藥劑能殺死全部供試菌的最高稀釋度與達(dá)到同效的碳酸的最高稀釋度之比。致死溫度:在一定時(shí)間內(nèi),殺死某微生物的水懸浮液群體所需的最低溫度。滅菌:采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長(zhǎng)繁殖能力的措施。消毒:一種采用較溫和的理化因素,僅殺
17、死物體或內(nèi)部一部分對(duì)人體或動(dòng)植物有害的病原菌,而對(duì)被消毒的對(duì)象基本無害的措施??股兀阂活愑晌⑸锘蚱渌顒?dòng)過程中合成的次生代謝產(chǎn)物或人工衍生物??勾x物:一類在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與細(xì)胞內(nèi)必要代謝物的結(jié)構(gòu)相似,并可干擾正常代謝活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)。磺胺類藥物作用機(jī)理:磺胺是葉酸組成部分對(duì)氨基苯甲酸的結(jié)構(gòu)類似物?;前返囊志饔檬且?yàn)楹芏嗉?xì)菌需要自己合成葉酸而生長(zhǎng)?;前穼?duì)人體細(xì)胞無毒性,因?yàn)槿巳狈膶?duì)氨基苯甲酸合成葉酸的相關(guān)酶-二氫葉酸合成酶,不能用外界提供的對(duì)氨基苯甲酸自行合成葉酸,而必須直接利用葉酸為生長(zhǎng)因子進(jìn)行生長(zhǎng)。濕熱滅菌比干熱滅菌效率高的原因答:濕熱蒸汽不但透射力強(qiáng),而且還能破壞維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)
18、和穩(wěn)定性的氫氮,從而加速這一重要生命大分子物質(zhì)的變性。1 單細(xì)胞微生物的生長(zhǎng)曲線,各期特點(diǎn),及如何利用微生物的生長(zhǎng)規(guī)律來指導(dǎo)工業(yè)生產(chǎn)(2)延滯期:生長(zhǎng)速率常數(shù)為零細(xì)胞形態(tài)變大或增長(zhǎng)細(xì)胞內(nèi)的RNA尤其是rRNA含量增高,原生質(zhì)呈嗜堿性合成代謝十分活躍,易產(chǎn)生各種誘導(dǎo)酶對(duì)外解不良條件理化因數(shù)及反應(yīng)敏感指數(shù)期:生長(zhǎng)速率常數(shù)R最大,代時(shí)最短細(xì)胞進(jìn)行平衡生長(zhǎng)酶系活躍,代謝旺盛細(xì)胞對(duì)理化因素較敏感穩(wěn)定期:生長(zhǎng)速率常數(shù)R等于零開始合成次生代謝物菌體產(chǎn)量達(dá)到最高點(diǎn),菌體產(chǎn)量與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗間呈現(xiàn)出有規(guī)律的比例關(guān)系芽孢桿菌開始形成芽孢細(xì)胞內(nèi)開始積累糖原,異染顆粒和脂肪等內(nèi)含物衰亡期:群體呈現(xiàn)負(fù)生長(zhǎng)狀態(tài)細(xì)胞發(fā)生多
19、樣化 芽孢桿菌釋放芽孢有的微生物進(jìn)一步合成或釋放對(duì)人類有益的抗生素等次生代謝物有的微生物發(fā)生自溶指導(dǎo)工業(yè)生產(chǎn):發(fā)酵工業(yè)中要盡量縮短延滯期,一般使用對(duì)數(shù)期的菌種;要盡量延長(zhǎng)對(duì)數(shù)期,采用連續(xù)發(fā)酵以保持較高的菌體密度,采取有效措施盡量使有害微生物不能進(jìn)入對(duì)數(shù)期;以收獲產(chǎn)物為目的的,要盡量延長(zhǎng)穩(wěn)定期,此時(shí)是產(chǎn)物的最佳收獲期。要盡量延緩衰亡期的到來,以防止產(chǎn)物消耗。6. 用來測(cè)定細(xì)菌生長(zhǎng)量的直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法包含哪些具體的方法,并從實(shí)際應(yīng)用、使用的局限性三方面加以具體分析答:直接計(jì)數(shù)法:特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或細(xì)胞計(jì)數(shù)板 優(yōu)點(diǎn):直觀、便捷、操作簡(jiǎn)單 缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌活菌 應(yīng)用:用于酵母、細(xì)菌、霉菌孢子等
20、懸浮液的計(jì)數(shù) 間接計(jì)數(shù)法:平板菌落計(jì)數(shù)法優(yōu)點(diǎn):可以獲得活菌的信息缺點(diǎn):操作較繁,結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得,而且測(cè)定結(jié)果易受多種因素的影響。 應(yīng)用:被廣泛用于生物制品檢驗(yàn),以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌支書或污染程度的檢測(cè)。避免出現(xiàn)細(xì)菌的耐藥性的措施:(1)第一次使用的藥物劑量要足; (2)避免在一個(gè)時(shí)期或長(zhǎng)期多次使用同種抗生素;(3)不同的抗生素(或與其他藥物)混合使用; (4)對(duì)現(xiàn)有抗生素進(jìn)行改造; (5)篩選新的更有效的抗生素。飾變:指不涉及遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)而只發(fā)生在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平上的表型變化,不遺傳?;蛲蛔?:簡(jiǎn)稱突變,是指細(xì)胞內(nèi)(或病毒粒子內(nèi))遺傳物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)或數(shù)量突然發(fā)
21、生的可遺傳的變化。感受態(tài):指受體細(xì)胞最容易接受外源DNA片段并能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)。質(zhì)粒:原核生物的質(zhì)粒指游離于原核生物核基因組以外,具有獨(dú)立復(fù)制能力的小型共價(jià)閉合環(huán)狀dsDNA分子,即cccDNA。光復(fù)活作用:帶嘧啶二聚體的DNA分子在黑暗中與光解酶結(jié)合,在可見光下酶被激活,使二聚體分解成單體。1簡(jiǎn)述艾姆氏實(shí)驗(yàn)原理:鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株在基本培養(yǎng)基的平板上不能生長(zhǎng),如果發(fā)生回復(fù)突變稱原養(yǎng)型后則可生長(zhǎng)。方法:在含待測(cè)可疑“三致”物的式樣中,加入鼠肝勻漿液,經(jīng)過一段時(shí)間保溫后,吸入濾紙片中,然后將濾紙片放于上述平板中央。結(jié)果:(1)平板上無大量菌液,說明試樣中不含誘變劑;(2
22、)紙片周圍有抑菌圈,外圍出現(xiàn)大量菌落,說明試樣中有某種高濃度的誘變劑;(3)紙片周圍出現(xiàn)大量菌落,說明試樣中有濃度適當(dāng)?shù)恼T變劑存在。優(yōu)點(diǎn):快速(約3天)、準(zhǔn)確(符合率>85%)、費(fèi)用省。3微生物基因突變的類型和特點(diǎn)類型:營(yíng)養(yǎng)缺陷型,抗性突變型,條件致死突變型,形態(tài)突變型,抗原突變型,產(chǎn)量突變型特點(diǎn):(1)自發(fā)性(2)不對(duì)應(yīng)性(3)稀有性(4)獨(dú)立性(5)可誘變性(6)穩(wěn)定(7)可逆性4菌種的衰退 定義:由于自發(fā)突變的結(jié)果,使某物種原有一系列生物性狀發(fā)生量變或質(zhì)變的現(xiàn)象。衰退的表現(xiàn):1、菌落和細(xì)胞形態(tài)改變2、生產(chǎn)性能的下降3、對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的適應(yīng)能力減弱菌種退化的原因: 1有關(guān)基因的自發(fā)突變2
23、育種后未經(jīng)很好的分離純化及染雜菌3培養(yǎng)基成分的變化及培養(yǎng)條件的改變?cè)鯓臃乐咕N的衰退現(xiàn)象:1控制傳代次數(shù)2創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件3利用不易衰退的細(xì)胞傳代 4采用有效的菌種保藏方法5比較高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)和低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)的異同篩選方法:誘變處理淘汰野生型檢出缺陷型鑒定缺陷型3、菌種保藏的基本原理是:根據(jù)微生物的生理、生化特點(diǎn),選用優(yōu)良菌株,最好是它們的休眠體,人工地創(chuàng)造適合于休眠的環(huán)境條件,即干燥、低溫、缺乏氧氣和養(yǎng)料等,使微生物的代謝活動(dòng)處于最低的狀態(tài)但又不至于死亡,從而達(dá)到保藏的目的。拮抗關(guān)系:指某種生物所產(chǎn)生的特定代謝產(chǎn)物可抑制他種生物的生長(zhǎng)發(fā)育甚至殺死它們的這種關(guān)系土壤是微生物天然培養(yǎng)基1、為微生物提供了良
24、好的源、源、能源2、為微生物提供有機(jī)物、無機(jī)鹽、微量元素3、滿足了微生物對(duì)水分的要求 4、土壤pH值范圍5.58.5之間5、溫度 :季節(jié)與晝夜溫差不大6、土壤顆粒空隙間充滿著空氣7、適宜的滲透壓 第九章 傳染與免疫傳染:指外源或內(nèi)源病原體突破其宿主的三道免疫防線,在宿主的特定部位定植、生長(zhǎng)繁殖或(和)產(chǎn)生酶及毒素,從而引起一系列病理生理的過程。侵襲力:病原體所具有的突破宿主防御功能,并在其中進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖和實(shí)現(xiàn)蔓延擴(kuò)散的能力。凝集反應(yīng):顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體在適合的條件下反應(yīng)并出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象。外毒素:在病原細(xì)菌生長(zhǎng)過程中不斷向外界環(huán)境分泌的一類毒性蛋白質(zhì)。內(nèi)毒素:在活細(xì)胞中不分泌到體外
25、,僅在細(xì)菌死亡自溶或人工裂解時(shí)才釋放的毒素,是G細(xì)菌細(xì)胞壁脂多糖組分。類毒素:用0.3-0.4甲醛溶液對(duì)外毒素進(jìn)行脫毒處理得到的失去毒性但保留抗原性的生物制品。特異性免疫:是識(shí)別自身和自身的抗原物質(zhì),并對(duì)它產(chǎn)生免疫應(yīng)答,從而保證機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)。非特異免疫:在生物長(zhǎng)期進(jìn)化過程中形成,屬于先天即有、相對(duì)穩(wěn)定、無特殊針對(duì)性的對(duì)付病原體的天然抵抗能力。沉淀反應(yīng):可溶性抗原與其相應(yīng)的抗體在合適條件下反應(yīng),并出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物現(xiàn)象。抗體:高等動(dòng)物體在抗原的刺激下,由漿細(xì)胞產(chǎn)生的一類能與相應(yīng)抗原在體內(nèi)外發(fā)生特異結(jié)合的免疫球蛋白。干擾素:高等動(dòng)物細(xì)胞在病毒或dsRNA等的刺激下,產(chǎn)生的一種具有廣譜抗病
26、毒功能的特異性糖蛋白。疫苗:即用于人工誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答或免疫耐受的抗原物質(zhì)。減毒活疫苗:是用減毒或無毒力的活病原體制成的疫苗。脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的減毒活疫苗。炎癥:是機(jī)體受到有害刺激(包括各種理化因素,但以病原微生物感染為主)時(shí)所表現(xiàn)的一系列局部和全身性防御應(yīng)答,可以看作是非特異免疫的綜合作用結(jié)果,其作用在于清除有害異物、修復(fù)受傷組織,保持自身穩(wěn)定性。第十章 微生物的分類與鑒定1.種:是一個(gè)基本分類單位,它是一大群表型特征高度相似、親緣關(guān)系極其接近、與同屬內(nèi)其他種有著明顯差異的菌株的總稱。5菌株(Strain):是指來源不同的同一個(gè)種的純培養(yǎng)物。雙名法:學(xué)名=屬名+種
27、名+(最初定名人)+后來定名人+命名時(shí)間 主要部分 次要部分(一般可省略)2.16SrRNA被公認(rèn)為是一把好的譜系分析“分子尺”,其主要依據(jù)是什么? 答:其主要依據(jù)是:它普遍存在于一切細(xì)胞內(nèi)(原核生物為16SrRNA,真核生物為18SrRNA);它們的生理功能既重要又恒定;在細(xì)胞中的含量較高;編碼rRNA的基因十分穩(wěn)定;rRNA的某些核苷酸序列非常保守;16SrRNA或18SrRNA相對(duì)分子質(zhì)量適中,信息量大,易于分析。菌種鑒定方法:在傳統(tǒng)的分類中,微生物的分類依據(jù),主要是形態(tài)特征、生理生化反應(yīng)特征、生態(tài)學(xué)特征以及血清學(xué)反應(yīng)、對(duì)噬菌體的敏感性等。六界:病毒界、原核生物界、真核原生生物界、真菌界
28、、植物界和動(dòng)物界。微生物的分類單位:界(Kingdom)、門(Phylum)、綱(Class)、目(order)、科(Family)、屬(Genus)、種(Species)菌落:單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)到一定程度,形成肉眼可見的子細(xì)胞群落。莢膜;是某些細(xì)菌在細(xì)胞壁外包圍的一層粘液性物質(zhì),一般由糖和多肽組成。子實(shí)體 在其里面或上面可產(chǎn)生無性或有性孢子,有一定形狀和構(gòu)造的任何菌絲體組織。鎖狀聯(lián)合 形成喙?fàn)钔黄鸲?lián)合后兩個(gè)細(xì)胞的方式營(yíng)養(yǎng)菌絲;密布在固體營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)內(nèi)部主要執(zhí)行吸取營(yíng)養(yǎng)物功能的菌絲體。噬菌斑 侵染細(xì)菌細(xì)胞,導(dǎo)致寄主細(xì)胞溶解死亡.在瓊脂培養(yǎng)基表面形成可見的透明小圓斑。溶源菌:含有溫和
29、噬菌體的寄主細(xì)菌稱為溶源菌溫和噬菌體:有些噬菌體在侵入細(xì)菌后,而是將它們的核酸整合在寄主染色體上,同寄主細(xì)胞同步復(fù)制,并傳給子代細(xì)胞,寄主細(xì)胞不裂解,這類噬菌體稱為溫和噬菌體。培養(yǎng)基 是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料化能異養(yǎng)型 能源和碳源都來自于有()機(jī)物,能源來自有機(jī)物的氧化分解基因轉(zhuǎn)運(yùn) 指一類需要特異性載體蛋白的參與,又能耗能的運(yùn)送方式初級(jí)代謝產(chǎn)物 是指微生物通過代謝活動(dòng)所產(chǎn)生的、自身生長(zhǎng)和繁殖所必需的物質(zhì)硝化作用:氨態(tài)氮經(jīng)硝化細(xì)菌的氧化,轉(zhuǎn)變?yōu)橄跛釕B(tài)氮的過程。反硝化作用:又稱脫氮作用,指硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氣態(tài)氮化物的作用。厭氧呼吸:一類呼吸鏈末端的氫受體為外源無機(jī)氧化物的
30、生物氧化方式。碳酸系數(shù):一定時(shí)間內(nèi),被試藥劑能殺死供試菌的最高稀釋度與達(dá)到同效的碳酸的最高稀釋度之比。滅菌:采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體的微生物永遠(yuǎn)喪失其生長(zhǎng)繁殖能力的措施??股兀阂活愑晌⑸锘蚱渌顒?dòng)過程中合成的次生代謝產(chǎn)物或人工衍生物。巴氏消毒法:是一種專用于牛奶.等不宜進(jìn)行高溫滅菌的液態(tài)食品的低溫消毒方法同步生長(zhǎng):通過同步培養(yǎng)的手段而使細(xì)胞群體中各個(gè)個(gè)體處于分裂步調(diào)一致的生長(zhǎng)狀態(tài)野生型與原養(yǎng)型菌株:野生型指從自然界分離到的任何微生物在其發(fā)生人為營(yíng)養(yǎng)缺陷突變前的原始菌株,在相應(yīng)的基本培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)。原養(yǎng)型指營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株經(jīng)回復(fù)突變或重組后產(chǎn)生的菌株,其營(yíng)養(yǎng)要求在表型上與野生型相同,
31、遺傳型均用A+B+表示。感受態(tài):指受體細(xì)胞最容易接受外源DNA片段并能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)。轉(zhuǎn)化子:受體菌直接吸收供體菌的DNA片段而形成的雜種后代,稱轉(zhuǎn)化子??剐酝蛔冎辏褐敢吧途臧l(fā)生基因突變,產(chǎn)生的對(duì)某化學(xué)藥物或致死物因子的抗性變異型。Hfr菌株:即高頻重組菌株,指F質(zhì)粒整合到染色體上的菌株。質(zhì)粒:原核生物的質(zhì)粒指游離于原核生物核基因組以外,具有獨(dú)立復(fù)制能力的小型共價(jià)閉合環(huán)狀dsDNA分子。點(diǎn)突變:一對(duì)堿基被另一對(duì)堿基置換的突變。營(yíng)養(yǎng)缺陷型:野生型菌株經(jīng)誘變劑處理后,發(fā)生了喪失某酶合成能力的突變,只能在加有該酶合成產(chǎn)物的培養(yǎng)基中才能生長(zhǎng),這類突變菌株稱為營(yíng)養(yǎng)缺陷型局限性轉(zhuǎn)導(dǎo):指通過部分
32、缺陷噬菌體把供體菌的少數(shù)特定基因攜帶到受體菌中,并與后者的基因組整合、重組,形成轉(zhuǎn)導(dǎo)子的現(xiàn)象。接合:供體菌通過性菌毛與受體菌直接接觸,把F質(zhì)?;蚱鋽y帶的不同長(zhǎng)度的核基因組片段傳遞給后者,使后者獲得若干新遺傳性狀的現(xiàn)象菌根:真菌與植物形成的特殊共生體。飾變:指外表的修飾性改變,即不涉及遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)改變只發(fā)生在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯上的表型變化條件致病菌:由于正常菌群失調(diào),原先不致病的正常菌群成員變成致病菌共生固氮作用:兩種生物形成共生關(guān)系進(jìn)行固氮?;ド簝煞N可單獨(dú)生活的生物,當(dāng)它們?cè)谝黄饡r(shí),通過各自的代謝活動(dòng)而有利于對(duì)方,或偏利于一方的生活方式。共生:兩種生物生活在一起,相互分工合作、相依為命,甚至達(dá)到難分
33、難解、合二為一的及其緊密的一種相互關(guān)系。拮抗:由某種生物所產(chǎn)生的特定代謝產(chǎn)物可抑制他種生物的生長(zhǎng)發(fā)育甚至殺死它們的一種相互關(guān)系。富營(yíng)養(yǎng)化:指水體中因氮、磷等元素含量過高而引起水體表層的藍(lán)細(xì)菌和藻類過度生長(zhǎng)繁殖的現(xiàn)象。氨化作用:指含氮有機(jī)物經(jīng)微生物的分解而產(chǎn)生氨的作用。生物固氮:指大氣中的分子氮通過微生物固氮酶的催化而還原成氨的過程。凝集反應(yīng):顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體在適合的條件下反應(yīng)并出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象。外毒素:在病原細(xì)菌生長(zhǎng)過程中不斷向外界環(huán)境分泌的一類毒性蛋白質(zhì)。沉淀反應(yīng):可溶性抗原與其相應(yīng)的抗體在合適條件下反應(yīng),并出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物現(xiàn)象。完全抗原:同時(shí)具有免疫原性和免疫反應(yīng)性的抗原
34、。不完全抗原:缺乏免疫原性而有免疫反應(yīng)性特異性免疫:是識(shí)別自身和自身的抗原物質(zhì),并對(duì)它產(chǎn)生免疫應(yīng)答,從而保證機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)。免疫:機(jī)體識(shí)別和排除抗原性異物的一種保護(hù)性功能。非特異免疫:在生物長(zhǎng)期進(jìn)化過程中形成,屬于先天即有、相對(duì)穩(wěn)定、無特殊針對(duì)性的對(duì)付病原體的天然抵抗能力??贵w:高等動(dòng)物體在抗原的刺激下,由漿細(xì)胞產(chǎn)生的一類能與相應(yīng)抗原在體內(nèi)外發(fā)生特異結(jié)合的免疫球蛋白。干擾素:高等動(dòng)物細(xì)胞在病毒或dsRNA等的刺激下,產(chǎn)生的一種具有廣譜抗病毒功能的特異性糖蛋白。菌株(Strain):是指來源不同的同一個(gè)種的純培養(yǎng)物病毒的特征: 形體及其微小,一般都能通過細(xì)菌濾器;沒有細(xì)胞構(gòu)造,其主要成分僅
35、為核酸和蛋白質(zhì);每一種病毒只含一種核酸,不是DNA 就是RNA,既無產(chǎn)能酶系也無蛋白質(zhì)和核酸合成酶系;以核酸和蛋白質(zhì)等元件的裝配實(shí)現(xiàn)其大量的繁殖;在離體條件下,能以無生命的生物大分子存在,并可長(zhǎng)期保存其侵染活力;對(duì)一般抗生素不敏感,但對(duì)于干擾素敏感;有些病毒的核酸不能整合到宿主的基因組中,并誘發(fā)潛伏性感染。霉菌的形態(tài)及功能霉菌是絲狀真菌,是菌絲體比較發(fā)達(dá)而又不產(chǎn)生大型子實(shí)體的真菌,長(zhǎng)出肉眼可見的絲狀、絨狀或蛛網(wǎng)狀的菌絲體。功能:1)工業(yè)應(yīng)用:發(fā)酵生產(chǎn)2)在食品制造方面:醬油和釀造3)科學(xué)研究4)引起工農(nóng)業(yè)產(chǎn)品霉變酵母菌,霉菌的繁殖方式: 無性繁殖:芽殖、裂殖、產(chǎn)無性孢子(節(jié)孢子、擲孢子、厚垣孢
36、子) 有性繁殖:以形成子囊和子囊孢子的方式進(jìn)行有性繁殖霉菌的繁殖方式:通過特化的氣生菌絲進(jìn)行繁殖。 簡(jiǎn)單的子實(shí)體:無性繁殖(分生孢子頭、孢子囊) 有性繁殖(擔(dān)子) 復(fù)雜的子實(shí)體:無性繁殖(分生孢子器、分生孢子座) 有性(閉囊殼、子囊盤)比較根霉和青霉形態(tài)結(jié)構(gòu)的異同 1)根霉:無隔菌絲、它的孢子是孢囊孢子;是接合菌亞門根霉屬。 青霉:有隔菌絲、它的孢子是分生孢子;半知菌亞門青霉屬 2)根霉:有假根和匍匐菌絲,根霉孢子囊基部有囊托而無囊領(lǐng)。孢子囊是根霉的無性繁殖體,內(nèi)含無數(shù)球形、卵形或不規(guī)則型的孢囊孢子。有性繁殖形成結(jié)合孢子。青霉:菌落有絨狀,絮狀,繩狀和束狀等不同形態(tài)。青霉的菌絲體產(chǎn)生長(zhǎng)而直的分
37、生孢子梗。微生物的繁殖方式 無性繁殖:裂殖,芽殖,借孢子、借菌絲繁殖,產(chǎn)無性孢子繁殖 有性繁殖:產(chǎn)子囊孢子繁殖, 菌絲體特化形式繁殖) 噬菌體的繁殖:吸附 侵入 增殖 成熟 裂解 F+,F(xiàn)-,HFR和F菌株有什么區(qū)別?F+菌株:指細(xì)胞內(nèi)存在一至幾個(gè)F質(zhì)粒,并在細(xì)胞表面著生一至幾條性菌毛的菌株。F-菌株:指細(xì)胞中無F質(zhì)粒、細(xì)胞表面也無性菌毛的菌株。Hfr菌株:由F質(zhì)粒插入到染色體DNA后形成的高頻重組菌株,這類菌株在F質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移過程中可以把部分甚至全部細(xì)菌染色體傳遞給F-細(xì)胞并發(fā)生重組。F菌株:細(xì)胞內(nèi)存在攜帶有宿主染色體基因的F質(zhì)粒的菌株細(xì)胞膜運(yùn)送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的四種方式單純擴(kuò)散:指疏水性雙分子層細(xì)胞
38、膜,在無載體蛋白的參與下,單詞依靠物理擴(kuò)散方式讓許多小分子非電離分子尤其是親水性分子的被動(dòng)通過的一種物質(zhì)運(yùn)送方式。促進(jìn)擴(kuò)散:指運(yùn)質(zhì)在運(yùn)送過程中,必須借助存在于細(xì)胞膜上的底物特異載體蛋白底協(xié)助但不耗能底一類物質(zhì)擴(kuò)散運(yùn)送方式?;鶊F(tuán)移位:指一類既需特異載體蛋白的參與,又需耗能的一種物質(zhì)運(yùn)送方式。物質(zhì)在運(yùn)送前后還會(huì)發(fā)生分子結(jié)構(gòu)的變化。pH值對(duì)微生物的影響pH能影響細(xì)胞膜上的電荷,從而影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。 pH值能影響代謝過程中酶的活性,從而影響微生物的生命活動(dòng)。 微生物的生命活動(dòng)會(huì)引起環(huán)境pH 改變。它們將糖類發(fā)酵形成有機(jī)酸,將脂肪水解成有機(jī)酸,選擇性吸收無機(jī)鹽的正電部分,則會(huì)引起培養(yǎng)基pH下降;而蛋
39、白質(zhì)的脫羧反應(yīng)形成胺類,選擇性吸收無機(jī)鹽的酸根,都會(huì)引起pH上升。 治標(biāo)的方法是通過加酸或堿進(jìn)行中和反應(yīng)。治本的方法有,過酸時(shí),加適量的氮源,提高發(fā)酵的通氣量;過堿時(shí),適當(dāng)增加碳源,降低通氣量。比較微生物營(yíng)養(yǎng)類型異同:答:人們根據(jù)微生物所能利用的能源和碳源的性質(zhì)可以將微生物分為四大營(yíng)養(yǎng)類型:1) 光能自養(yǎng)型微生物:它們具有光合色素,既能通過光合磷酸化作用產(chǎn)生ATP,又能以還原性無機(jī)化合物(如H2S,Na2SO3等)為供氫體,還原CO2而合成細(xì)胞物質(zhì)。2) 光能異養(yǎng)型微生物:它們像光能自養(yǎng)型微生物一樣能夠利用光能,但必須以外源有機(jī)化合物作為主要碳源和供氫體。3) 化能自養(yǎng)型微生物:它們能利用無機(jī)
40、化合物(如NH3、NO2-、H2、H2S、S、SO3-、Fe+等)氧化時(shí)釋放的能量,把主要碳源CO2中的碳還原成細(xì)胞有機(jī)物碳架中的碳。4) 化能異養(yǎng)型微生物:它們以有機(jī)化合物為碳源,利用有機(jī)化合物氧化過程中氧化磷酸化提供的ATP而生長(zhǎng)。這類微生物的特點(diǎn)是其能源與碳源往往分不開,同一種有機(jī)化合物的代謝即可供給能量,也可以供給碳架物質(zhì)。為什么要選用高絲氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型作為賴氨酸生產(chǎn)菌株?答:在此代謝途徑中,原料天冬氨酸通過分支代謝途徑合成賴氨酸、蘇氨酸和甲硫氨酸。其中賴氨酸是人類和動(dòng)物的必需氨基酸,但在正常的代謝過程中,由于賴氨酸對(duì)天冬氨酸激酶(AK)有反饋抑制作用,并且有分支代謝途徑的存在,細(xì)胞中的賴氨酸濃度較低。高絲氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株不能合成高絲氨酸脫氫酶,代謝分支途徑中斷。在補(bǔ)給適量高絲氨酸的條件下,細(xì)胞內(nèi)就能積累大量的賴氨酸。濕熱滅菌比干熱滅菌效率高的原因答:濕熱蒸汽不但透射力強(qiáng),而且還能破壞維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性的氫氮,從而加速這一重要生命大分子物質(zhì)的變性。微生物產(chǎn)生耐藥性的途徑有哪些?答:基因突變
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