荊芥揮發(fā)油對(duì)LPS所致大鼠急性肺損傷模型肺組織中NF-κB IκB

1、荊芥揮發(fā)油對(duì)LPS所致大鼠急性肺損傷模型肺組織中NF-B， IB， 作者：解宇環(huán) 沈映君 金沈銳 徐世軍 【摘要】 目的觀察荊芥揮發(fā)油（VOHS）對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的急性肺損傷（ALI）大鼠模型肺組織中核因子-B(NF-B)，IB-，IL1-和TNF-含量的影響，探討荊芥揮發(fā)油抗炎作用的細(xì)胞信號(hào)調(diào)控轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。方法雄性SD大鼠60只隨機(jī)分 作者：解宇環(huán) 沈映君 金沈銳 徐世軍【摘要】 目的觀察荊芥揮發(fā)油（VOHS）對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的急性肺損傷（ALI）大鼠模型肺組織中核因子-B(NF-B)，IB-，IL1-和TNF-含量的影響，探討荊芥揮發(fā)油抗炎作用的細(xì)胞信號(hào)調(diào)控轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。方法雄性SD

2、大鼠60只隨機(jī)分為6組，分別為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組（地塞米松），荊芥揮發(fā)油高、中、低劑量組。尾靜脈注射LPS(1.0 mg/kg體重)或生理鹽水，6h后處死動(dòng)物，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定肺組織NF-B p65、磷酸化IB-、IL1-和TNF-含量。結(jié)果與模型對(duì)照組比較，VOHS高、中、低劑量組均可顯著降低大鼠肺組織中的NF-B p65和磷酸化IB-含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05， P0.01, P0.001），同時(shí)VOHS各劑量組也可顯著降低大鼠肺組織中IL1-和TNF-含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01，P0.001）。結(jié)論荊芥揮發(fā)油抗炎作用機(jī)制之一可能是抑制IB-

3、磷酸化降解和NF-B活性，進(jìn)而減少炎癥相關(guān)細(xì)胞因子IL1-，TNF-的合成和釋放。 【關(guān)鍵詞】 急性肺損傷 脂多糖 荊芥揮發(fā)油 抗炎機(jī)制Abstract:ObjectiveTo investigate the effects of the volatile oil of Herba Schizonepetae on level ofNF-B , IB， IL1- and TNF- in lung tissue of ALI rats induced by LPS ,so to explore the modulator mechanisms of the volatile oil of Her

4、ba Schizonepetae in signal transduction of inflammation. MethodsSixty male rats were randomly divided into six groups: normal control group, model group,LPS+Dex group and three volatile oil of Herba Schizonepetae groups. LPS was injected intravenously to prepare ALI model. The level of NF-B ,IB , IL

5、1- and TNF- in lung homogenates were measured by ELISA. ResultsThe level of NF-B in rat lungs significantly increased after LPS stimulation than that of the normal group (P0.05， P0.01, P0.001); the Volatile oil of Herba Schizonepetae groups could decrease the level of NF-B ,IB , IL1- and TNF- in rat

6、 lungs of the model groups（P0.01，P0.001）.ConclusionThe volatile oil of Herba Schizonepetae can inhibit the IB- phosphorylation and NF-B activivty, then reduce the synthetise and release of cytokines(IL1-,TNF-). This may be one of the mechanism that VOHS has the effect of anti-inflammation .Key words

7、:Acute lung injury; Lipopolysaccharide; The volatile oil of Herba Schizonepetae; Mechanism of anti-inflammation荊芥為常用解表藥，前期的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)其揮發(fā)油對(duì)多種炎癥動(dòng)物模型均具有良好的抗炎作用1,2。核因子-B對(duì)前炎癥因子IL1和TNF的基因表達(dá)調(diào)節(jié)起重要作用,而NF-B的活化受NF-B抑制蛋白IB的調(diào)控3，荊芥揮發(fā)油能否通過(guò)干預(yù)NF-B信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑達(dá)到抗炎作用，目前尚無(wú)研究報(bào)道。本研究應(yīng)用脂多糖（LPS）復(fù)制大鼠急性肺損傷（ALI)模型，通過(guò)觀察荊芥揮發(fā)油 (VOHS) 對(duì)大鼠肺組

8、織中核因子B p65，IB-，IL1-和TNF-含量的影響進(jìn)一步探討荊芥揮發(fā)油抗炎作用機(jī)制。1 材料1.1 荊芥揮發(fā)油荊芥(Herba Schizonepetae)購(gòu)自成都市中藥材公司，由我校中藥鑒定教研室王光志博士鑒定符合現(xiàn)行中國(guó)藥典藥用標(biāo)準(zhǔn)，按中國(guó)藥典2005版部附錄D揮發(fā)油測(cè)定法中甲法提取，得淡黃色澄明油狀液體，氣味芳香，揮發(fā)油含量為1.2%，無(wú)水硫酸鈉充分脫水后，密閉貯存于棕色瓶中,4冰箱保存?zhèn)溆茫瑢?shí)驗(yàn)時(shí)用0.5%吐溫-80溶液配制使用。前期實(shí)驗(yàn)測(cè)得VOHS小鼠灌胃給藥LD50為1.10 ml/kg，實(shí)驗(yàn)中所用VOHS劑量約為L(zhǎng)D50的1/10,1/20,1/40。1.2 動(dòng)物健康SD

9、雄性大鼠（SPF級(jí)），體重180220 g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK（川）2004-12。1.3 試劑LPS（E. Coli 0111：B4）Sigma公司產(chǎn)品；地塞米松磷酸鈉注射液，西南藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)66040099；Rat NF-B p65 ELISA Kit， Rat IB- ELISA Kit，批號(hào)0504； Rat IL1-ELISA Kit，批號(hào)0509；Rat TNF- ELISA Kit，批號(hào)0509，以上均由上?？党缮镉邢薰咎峁?.4 儀器Multiskan MK3酶標(biāo)儀, Thermo公司；JY96-超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，寧波新芝科

10、器研究所。2 方法與結(jié)果2.1 LPS致大鼠ALI模型的制備取SD雄性大鼠（SPF級(jí)）60只，按體重分層，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組（地塞米松），VOHS高、中、低劑量組，每組10只。除陽(yáng)性對(duì)照組第5天予地塞米松腹腔注射1次給藥外，其他組均連續(xù)灌胃給藥5 d，1次/d，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌相同體積的生理鹽水。末次給藥后1 h，每鼠尾靜脈注射LPS 1.0 mg/kg體重，6 h后處死動(dòng)物，在無(wú)菌條件下取出肺臟，用無(wú)菌濾紙吸干肺臟表面的血液后錫箔紙包裹，-70保存。2.2 肺組織總蛋白的抽提及指標(biāo)的檢測(cè)稱取肺組織250 mg,并加入預(yù)冷的蛋白質(zhì)抽提試劑，以超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)低速粉碎細(xì)胞，低溫冷凍離心14 000 r/min,15 min后，取上清液，按BCA法測(cè)定蛋白濃度。用ELISA Kit，參照試劑盒說(shuō)明測(cè)定活化