胃腸外營(yíng)養(yǎng)添加精氨酸對(duì)結(jié)直腸癌術(shù)后患者細(xì)胞免疫功能的影響

1、胃腸外營(yíng)養(yǎng)添加精氨酸對(duì)結(jié)直腸癌術(shù)后患者細(xì)胞免疫功能的影響         08-07-26 17:05:00     作者：劉新純    編輯：studa20【摘要】  目的：探討胃腸外營(yíng)養(yǎng)(TPN)添加精氨酸(Arg)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后淋巴細(xì)胞免疫功能的影響及臨床意義。方法：對(duì)56例結(jié)直腸癌患者術(shù)后進(jìn)行了TPN支持的前瞻性研究，檢測(cè)無脂TPN、常規(guī)TPN和常規(guī)TPN中添加Arg營(yíng)養(yǎng)支持前后患者外周血的T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+

2、和CD8+T細(xì)胞亞群）和NK細(xì)胞百分比的變化以及外周血中IL2、IL4以及IFNr水平的變化。結(jié)果：無脂TPN、常規(guī)TPN支持前后患者外周血的CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞以及NK細(xì)胞水平無明顯變化，IL2、IL4以及IFNr水平無明顯變化；常規(guī)TPN中添加Arg營(yíng)養(yǎng)支持后患者外周血的CD4+和NK細(xì)胞百分比明顯增加，CD8+T細(xì)胞亞群明顯減少，CD4/CD8比值也較術(shù)前明顯升高，外周血中IL2、IL4以及IFNr水平明顯增加。結(jié)論：常規(guī)TPN不能糾正結(jié)直腸癌患者術(shù)后的細(xì)胞免疫抑制狀態(tài)，但TPN添加Arg則可促進(jìn)CD4+的Th1細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞增加，外周血IL2和IFNr生成增加，提示TPN

3、添加Arg對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后的細(xì)胞免疫有上調(diào)作用。 【關(guān)鍵詞】  胃腸外營(yíng)養(yǎng) 精氨酸 結(jié)直腸癌 免疫功能    The influence of total parenteral nutrition added with arginine on cellular immune function of colonic cancer after operation      Abstract  Objective:To explore the influence of total parentera

4、l nutrition(TPN) added with arginine on the cellular immune function of colonic cancer after radical operation.Methods: There were 56 cases of colonic cancer supported with TPN who were divided into 3 groups (TPN without fat, routine TPN and TPN added with arginine), whose data were designed and ana

5、lysed prospectively. The percent of T lymphocyte subpopulation and national killer cell (NK) in peripheral blood was detected, and so was the level of IL2, IL4 and IFNr in peripheral blood. Results: There was no marked change about CD4+ T cell, CD8+ T cell and NK in peripheral blood after TPN withou

6、t fat and routine TPN, and so was the level of IL2, IL4 and IFNr. After TPN added with arginine, there was significant increase of CD4+ T cell, the ratio of CD4+ T/CD8+T and NK in peripheral blood, and so was the level of IL2 and IFNr. On the contrast, the percent of CD8+ T cell and the level of IL4

7、 in peripheral blood decreased significantly after TPN added with arginine. Conclusion: Routine TPN can not correct the cell mediated immunity suppression after radical operation of colonic cancer. But TPN added with arginine can augment the percent of Th1 subpopulation and NK, and increase the leve

8、l of IL2 and IFNr in peripheral blood, which denote that arginine can upregulate the cell mediated immunity of colonic cancer after operation.    Key words   Total Parenteral Nutrition；Arginine；Colonic Cancer；Cell Mediated Immunity    精氨酸(arginine, Arg)是人體半必需的

9、二元氨基酸，同時(shí)Arg亦是一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的小分子化學(xué)物質(zhì)，具有內(nèi)分泌促分泌功能1。另外，Arg可以在體內(nèi)轉(zhuǎn)換生成瓜氨酸和一氧化氮（NO），通過上述兩個(gè)機(jī)制來發(fā)揮免疫上調(diào)作用2, 3。我們?cè)诮Y(jié)直腸癌患者術(shù)后的胃腸外營(yíng)養(yǎng)(TPN)中添加Arg，觀察其對(duì)淋巴細(xì)胞免疫功能的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。    1  對(duì)象與方法    1.1  研究對(duì)象：選擇2001年1月至2006年6月我院胃腸外科收治并經(jīng)結(jié)腸鏡及病理學(xué)證實(shí)的56例結(jié)直腸癌患者，其中結(jié)腸癌32例，直腸癌24例。男38例，女18例，年齡3177歲，平均(56.4&

10、#177;5.6)歲，中位年齡55.5歲。    1.2  入選標(biāo)準(zhǔn)：56例患者均符合下列條件而被納入本研究：肝腎功能正常，無伴隨代謝性、感染性和腸道炎性疾病；未用類固醇激素和免疫抑制劑；無腸道外惡性腫瘤性疾病以及無化療放療史；臨床病理分期為期的結(jié)直腸癌。所有患者在隨機(jī)抽簽分組進(jìn)入本研究前，均予以知情談話并征得同意。    1.3  分組：56例患者隨機(jī)分為3組(拆信封法)：組(n17)，使用無脂TPN；組（n18），使用含MCT/LCT(中/長(zhǎng)鏈脂肪乳劑)的TPN；組：實(shí)驗(yàn)組，n21，使用含MCT/LCT和Arg

11、的TPN。3組患者在年齡、體重、術(shù)式及結(jié)直腸癌分期方面均相近，具可比性。組(空白對(duì)照組)：另隨機(jī)選取年齡和性別相近的符合本研究入選標(biāo)準(zhǔn)的非免疫相關(guān)的胃腸道良性疾病患者共24例，測(cè)定其入院淋巴細(xì)胞免疫功能作為正常參照值。    1.4  靜脈營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法：3組患者術(shù)前均在醫(yī)院固定膳食，于氣管插管吸入加靜脈復(fù)合麻醉下手術(shù)，術(shù)中經(jīng)鎖骨下靜脈置放中心靜脈留置導(dǎo)管。術(shù)后第1天經(jīng)中心靜脈留置管(44例)或經(jīng)外周靜脈(12例)行TPN支持治療，共6 d。氮源為10%復(fù)方氨基酸(蘇州，華瑞公司)；脂肪乳劑為10%和20% Lipofundin(Braun，德國(guó))；糖為5

12、0%、10%和5%葡萄糖溶液；并補(bǔ)充足夠維生素、電解質(zhì)和微量元素，能量和氮量均按營(yíng)養(yǎng)計(jì)算尺計(jì)算，熱卡為125146 J/kg·d，氮為0.200.25 g/kg·d，脂肪乳劑占非蛋白熱卡的35%40%4。LArg由上海生物化學(xué)制藥廠提供，Arg為25 g/d。以上營(yíng)養(yǎng)制劑以“全合一”方式混合于三升袋中，16 h內(nèi)輸完。分別于手術(shù)前1 d和術(shù)后TPN結(jié)束后第2天取患者外周空腹靜脈血進(jìn)行免疫檢測(cè)。    1.5  檢測(cè)指標(biāo)和操作方法    無菌取靜脈學(xué)2 mL，肝素抗凝處理，600 rpm離心10 min，棄

13、上清，細(xì)胞團(tuán)內(nèi)培養(yǎng)液少于25 L。加入FITC或PE標(biāo)記的CD80、CD86和CD11c等表面分子的單克隆抗體15 L，混合均勻，4下避光反應(yīng)30 min。PBS洗滌2次后，棄上清，加入1 mL的1%甲醛，固定30 min。加樣槍將熒光標(biāo)記抗體結(jié)合的細(xì)胞加入BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的檢測(cè)孔內(nèi)，檢測(cè)淋巴細(xì)胞CD4、CD8和CD11c等表面分子的表達(dá)以了解外周血內(nèi)淋巴細(xì)胞的比例變化情況5。數(shù)據(jù)以表達(dá)率的95%可信區(qū)間作為衡量表達(dá)情況的標(biāo)準(zhǔn)。    外周血予以5000 rpm離心10 min后，吸取上清，4冰箱保存?zhèn)錂z。用俘獲抗體包被96孔板，4孵化過夜。

14、吸干孔內(nèi)液體，每孔加300 L洗滌液，共洗滌3次。每孔加200 L的Assay Diluent封閉，室溫下孵化1 h。吸干封閉液后洗滌板孔。除空白孔外，分別將不同濃度（2倍連續(xù)稀釋）標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)血清加入相應(yīng)的反應(yīng)孔中（100 L/孔），每個(gè)標(biāo)本設(shè)3個(gè)復(fù)孔。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，置37孵箱孵育2 d。重復(fù)吸干、洗滌板孔5次。除空白孔外，每孔加入抗體工作液100 L，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，置室溫孵育1 h。重復(fù)吸干、洗滌板孔5次。除空白孔外，每孔加入酶結(jié)合物工作液100 L，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，置室溫下孵箱孵育30 min。重復(fù)吸干、洗滌板孔7次。每孔加底物溶液100 L，室溫下孵箱孵育15 m

15、in。每孔加終止液50 L。反應(yīng)完畢后，即刻在酶標(biāo)儀上讀取樣本孔及標(biāo)準(zhǔn)品孔的OD450nm值和OD570nm值，以二者差值和對(duì)應(yīng)的細(xì)胞因子濃度的常用對(duì)數(shù)值，分別作縱、橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣本的細(xì)胞因子濃度6。    1.6  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理    3組患者以及一組非結(jié)直腸癌住院患者的計(jì)量資料的描述采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），組間均數(shù)比較應(yīng)用獨(dú)立t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，予以t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，設(shè)定為0.05。所有數(shù)據(jù)均在計(jì)算機(jī)SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件上進(jìn)行運(yùn)算。 &

16、#160;  2  結(jié)  果    2.1  一般情況：56例結(jié)直腸癌患者均成功地實(shí)施了結(jié)直腸癌根治術(shù)，其中行右半結(jié)腸癌根治術(shù)21例，左半結(jié)腸癌根治術(shù)17例，Dixon術(shù)18例。1例Dixon術(shù)后吻合口漏，保守治療后自愈，1例右半結(jié)腸癌根治術(shù)后發(fā)生切口感染，引流后二期愈合，術(shù)中及術(shù)后無其它并發(fā)癥發(fā)生。常規(guī)行TPN監(jiān)測(cè)，未發(fā)生代謝及導(dǎo)管并發(fā)癥。6例患者術(shù)中輸血治療，輸濃縮紅細(xì)胞量均少于200 mL。    2.2  T淋巴細(xì)胞亞群變化：見表1。    經(jīng)單因

17、素方差分析，各組患者的CD4、CD8、CD4/CD8以及NK變化存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t2.96，P0.05）。    患者、組患者手術(shù)TPN后CD4、CD4/CD8、NK水平均較術(shù)前有所下降，但經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，下降無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t1.50，P0.05）；、組患者手術(shù)TPN后CD8水平較術(shù)前無明顯變化（t1.24，P0.05）；經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，組患者的CD4水平增加，增加存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t3.06，P0.05)，CD4/CD8比值也較術(shù)前明顯升高(t2.32，P0.05)，NK百分比升高未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t1.12，P0.05）。    與組相

18、比，、以及組的術(shù)前CD4和NK水平均降低，經(jīng)單因素方差分析，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t2.42，P0.05)；組以及組患者TPN后CD4和NK水平仍低于組結(jié)果(t2.65，P0.05)，組患者TPN后CD4和NK水平和組相比，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t1.64，P0.05)。表1  4組患者淋巴細(xì)胞亞群變化 注：*和術(shù)前相比較，P0.05；*和組及組手術(shù)+TPN前后相比較，P0.05    2.3  外周血IL2、IL4以及IFNr水平變化：見表2。    經(jīng)單因素方差分析，各組患者外周血IL2、IL4以及IFNr水平變化存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t2.59，P0.05）。    患者、組患者外周血IL2、IL4以及IFNr水平在TPN前后比較未發(fā)現(xiàn)明顯變化，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t1.15，P0.05）；組患者的外周血IL2與IFNr水平在