胃腸外營養(yǎng)添加精氨酸對結直腸癌術后患者細胞免疫功能的影響

1、胃腸外營養(yǎng)添加精氨酸對結直腸癌術后患者細胞免疫功能的影響         08-07-26 17:05:00     作者：劉新純    編輯：studa20【摘要】  目的：探討胃腸外營養(yǎng)(TPN)添加精氨酸(Arg)對結直腸癌患者術后淋巴細胞免疫功能的影響及臨床意義。方法：對56例結直腸癌患者術后進行了TPN支持的前瞻性研究，檢測無脂TPN、常規(guī)TPN和常規(guī)TPN中添加Arg營養(yǎng)支持前后患者外周血的T淋巴細胞亞群（CD4+

2、和CD8+T細胞亞群）和NK細胞百分比的變化以及外周血中IL2、IL4以及IFNr水平的變化。結果：無脂TPN、常規(guī)TPN支持前后患者外周血的CD4+T細胞、CD8+T細胞以及NK細胞水平無明顯變化，IL2、IL4以及IFNr水平無明顯變化；常規(guī)TPN中添加Arg營養(yǎng)支持后患者外周血的CD4+和NK細胞百分比明顯增加，CD8+T細胞亞群明顯減少，CD4/CD8比值也較術前明顯升高，外周血中IL2、IL4以及IFNr水平明顯增加。結論：常規(guī)TPN不能糾正結直腸癌患者術后的細胞免疫抑制狀態(tài)，但TPN添加Arg則可促進CD4+的Th1細胞亞群和NK細胞增加，外周血IL2和IFNr生成增加，提示TPN

3、添加Arg對結直腸癌患者術后的細胞免疫有上調作用。 【關鍵詞】  胃腸外營養(yǎng) 精氨酸 結直腸癌 免疫功能    The influence of total parenteral nutrition added with arginine on cellular immune function of colonic cancer after operation      Abstract  Objective:To explore the influence of total parentera

4、l nutrition(TPN) added with arginine on the cellular immune function of colonic cancer after radical operation.Methods: There were 56 cases of colonic cancer supported with TPN who were divided into 3 groups (TPN without fat, routine TPN and TPN added with arginine), whose data were designed and ana

5、lysed prospectively. The percent of T lymphocyte subpopulation and national killer cell (NK) in peripheral blood was detected, and so was the level of IL2, IL4 and IFNr in peripheral blood. Results: There was no marked change about CD4+ T cell, CD8+ T cell and NK in peripheral blood after TPN withou

6、t fat and routine TPN, and so was the level of IL2, IL4 and IFNr. After TPN added with arginine, there was significant increase of CD4+ T cell, the ratio of CD4+ T/CD8+T and NK in peripheral blood, and so was the level of IL2 and IFNr. On the contrast, the percent of CD8+ T cell and the level of IL4

7、 in peripheral blood decreased significantly after TPN added with arginine. Conclusion: Routine TPN can not correct the cell mediated immunity suppression after radical operation of colonic cancer. But TPN added with arginine can augment the percent of Th1 subpopulation and NK, and increase the leve

8、l of IL2 and IFNr in peripheral blood, which denote that arginine can upregulate the cell mediated immunity of colonic cancer after operation.    Key words   Total Parenteral Nutrition；Arginine；Colonic Cancer；Cell Mediated Immunity    精氨酸(arginine, Arg)是人體半必需的

9、二元氨基酸，同時Arg亦是一種具有免疫調節(jié)作用的小分子化學物質，具有內分泌促分泌功能1。另外，Arg可以在體內轉換生成瓜氨酸和一氧化氮（NO），通過上述兩個機制來發(fā)揮免疫上調作用2, 3。我們在結直腸癌患者術后的胃腸外營養(yǎng)(TPN)中添加Arg，觀察其對淋巴細胞免疫功能的影響，現報告如下。    1  對象與方法    1.1  研究對象：選擇2001年1月至2006年6月我院胃腸外科收治并經結腸鏡及病理學證實的56例結直腸癌患者，其中結腸癌32例，直腸癌24例。男38例，女18例，年齡3177歲，平均(56.4&

10、#177;5.6)歲，中位年齡55.5歲。    1.2  入選標準：56例患者均符合下列條件而被納入本研究：肝腎功能正常，無伴隨代謝性、感染性和腸道炎性疾??；未用類固醇激素和免疫抑制劑；無腸道外惡性腫瘤性疾病以及無化療放療史；臨床病理分期為期的結直腸癌。所有患者在隨機抽簽分組進入本研究前，均予以知情談話并征得同意。    1.3  分組：56例患者隨機分為3組(拆信封法)：組(n17)，使用無脂TPN；組（n18），使用含MCT/LCT(中/長鏈脂肪乳劑)的TPN；組：實驗組，n21，使用含MCT/LCT和Arg

11、的TPN。3組患者在年齡、體重、術式及結直腸癌分期方面均相近，具可比性。組(空白對照組)：另隨機選取年齡和性別相近的符合本研究入選標準的非免疫相關的胃腸道良性疾病患者共24例，測定其入院淋巴細胞免疫功能作為正常參照值。    1.4  靜脈營養(yǎng)實驗方法：3組患者術前均在醫(yī)院固定膳食，于氣管插管吸入加靜脈復合麻醉下手術，術中經鎖骨下靜脈置放中心靜脈留置導管。術后第1天經中心靜脈留置管(44例)或經外周靜脈(12例)行TPN支持治療，共6 d。氮源為10%復方氨基酸(蘇州，華瑞公司)；脂肪乳劑為10%和20% Lipofundin(Braun，德國)；糖為5

12、0%、10%和5%葡萄糖溶液；并補充足夠維生素、電解質和微量元素，能量和氮量均按營養(yǎng)計算尺計算，熱卡為125146 J/kg·d，氮為0.200.25 g/kg·d，脂肪乳劑占非蛋白熱卡的35%40%4。LArg由上海生物化學制藥廠提供，Arg為25 g/d。以上營養(yǎng)制劑以“全合一”方式混合于三升袋中，16 h內輸完。分別于手術前1 d和術后TPN結束后第2天取患者外周空腹靜脈血進行免疫檢測。    1.5  檢測指標和操作方法    無菌取靜脈學2 mL，肝素抗凝處理，600 rpm離心10 min，棄

13、上清，細胞團內培養(yǎng)液少于25 L。加入FITC或PE標記的CD80、CD86和CD11c等表面分子的單克隆抗體15 L，混合均勻，4下避光反應30 min。PBS洗滌2次后，棄上清，加入1 mL的1%甲醛，固定30 min。加樣槍將熒光標記抗體結合的細胞加入BeckmanCoulter流式細胞儀的檢測孔內，檢測淋巴細胞CD4、CD8和CD11c等表面分子的表達以了解外周血內淋巴細胞的比例變化情況5。數據以表達率的95%可信區(qū)間作為衡量表達情況的標準。    外周血予以5000 rpm離心10 min后，吸取上清，4冰箱保存?zhèn)錂z。用俘獲抗體包被96孔板，4孵化過夜。

14、吸干孔內液體，每孔加300 L洗滌液，共洗滌3次。每孔加200 L的Assay Diluent封閉，室溫下孵化1 h。吸干封閉液后洗滌板孔。除空白孔外，分別將不同濃度（2倍連續(xù)稀釋）標準品、待測血清加入相應的反應孔中（100 L/孔），每個標本設3個復孔。用封板膠紙封住反應孔，置37孵箱孵育2 d。重復吸干、洗滌板孔5次。除空白孔外，每孔加入抗體工作液100 L，用封板膠紙封住反應孔，置室溫孵育1 h。重復吸干、洗滌板孔5次。除空白孔外，每孔加入酶結合物工作液100 L，用封板膠紙封住反應孔，置室溫下孵箱孵育30 min。重復吸干、洗滌板孔7次。每孔加底物溶液100 L，室溫下孵箱孵育15 m

15、in。每孔加終止液50 L。反應完畢后，即刻在酶標儀上讀取樣本孔及標準品孔的OD450nm值和OD570nm值，以二者差值和對應的細胞因子濃度的常用對數值，分別作縱、橫坐標，繪制標準曲線，從標準曲線求出樣本的細胞因子濃度6。    1.6  統(tǒng)計學處理    3組患者以及一組非結直腸癌住院患者的計量資料的描述采用均數±標準差（±s），組間均數比較應用獨立t檢驗進行比較，予以t檢驗，計數資料采用單因素方差分析進行統(tǒng)計學比較，設定為0.05。所有數據均在計算機SPSS10.0統(tǒng)計軟件上進行運算。 &

16、#160;  2  結  果    2.1  一般情況：56例結直腸癌患者均成功地實施了結直腸癌根治術，其中行右半結腸癌根治術21例，左半結腸癌根治術17例，Dixon術18例。1例Dixon術后吻合口漏，保守治療后自愈，1例右半結腸癌根治術后發(fā)生切口感染，引流后二期愈合，術中及術后無其它并發(fā)癥發(fā)生。常規(guī)行TPN監(jiān)測，未發(fā)生代謝及導管并發(fā)癥。6例患者術中輸血治療，輸濃縮紅細胞量均少于200 mL。    2.2  T淋巴細胞亞群變化：見表1。    經單因

17、素方差分析，各組患者的CD4、CD8、CD4/CD8以及NK變化存在統(tǒng)計學差異（t2.96，P0.05）。    患者、組患者手術TPN后CD4、CD4/CD8、NK水平均較術前有所下降，但經配對t檢驗，下降無統(tǒng)計學差異（t1.50，P0.05）；、組患者手術TPN后CD8水平較術前無明顯變化（t1.24，P0.05）；經配對t檢驗，組患者的CD4水平增加，增加存在統(tǒng)計學差異(t3.06，P0.05)，CD4/CD8比值也較術前明顯升高(t2.32，P0.05)，NK百分比升高未達到統(tǒng)計學意義（t1.12，P0.05）。    與組相

18、比，、以及組的術前CD4和NK水平均降低，經單因素方差分析，存在統(tǒng)計學差異(t2.42，P0.05)；組以及組患者TPN后CD4和NK水平仍低于組結果(t2.65，P0.05)，組患者TPN后CD4和NK水平和組相比，無明顯統(tǒng)計學差異(t1.64，P0.05)。表1  4組患者淋巴細胞亞群變化 注：*和術前相比較，P0.05；*和組及組手術+TPN前后相比較，P0.05    2.3  外周血IL2、IL4以及IFNr水平變化：見表2。    經單因素方差分析，各組患者外周血IL2、IL4以及IFNr水平變化存在統(tǒng)計學差異（t2.59，P0.05）。    患者、組患者外周血IL2、IL4以及IFNr水平在TPN前后比較未發(fā)現明顯變化，經配對t檢驗，變化無統(tǒng)計學差異（t1.15，P0.05）；組患者的外周血IL2與IFNr水平在