【植物組織培養(yǎng)期末復(fù)習(xí)題】必考簡(jiǎn)答題集錦

1、植物組織培養(yǎng)期末復(fù)習(xí)題簡(jiǎn)答題集錦1、培養(yǎng)基一般包括哪些基本成分？答：培養(yǎng)基的成份有：(1)無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)：包括：氧(O)、碳(C)、氫(H)、氮(N)、 鉀(K)、磷(P)、鎂(Mg)、硫(S)和鈣(Ca)等大量元素；鐵(Fe )、銅(Cu)、鋅 (Zn )、鈕(Mn)、鑰(Mo)、硼(B )、碘(I )、鉆(Co)、氯(Cl)、 鈉(Na )等微量元素(2)有機(jī)營(yíng)養(yǎng)：氨基酸、天然提取物、維生素、糖類(lèi)(3) 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)：主要包括生長(zhǎng)素類(lèi)和細(xì)胞分裂素類(lèi)。(4)其他：包括水、活性炭、瓊脂等。2、培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿和植物材料通常怎樣滅菌 ？答：培養(yǎng)基一般采用濕熱滅菌，如果培養(yǎng)基中的有些成分高溫易分解，

2、則可 采用過(guò)濾滅菌.培養(yǎng)器皿可采用濕熱滅菌或干熱滅菌。植物材料一般采用藥劑浸泡滅菌，具體操作如下：(1)外植體的預(yù)處理，對(duì)植物組織進(jìn)行修整，去掉不需要的部分，并將外 植體用流水沖洗干凈。(2)用70%勺酒精浸潤(rùn)材料30s左右。(3)用滅菌劑浸泡滅菌，滅菌時(shí)不時(shí)攪動(dòng)，使植物材料與滅菌劑有良好的 接觸，若滅菌過(guò)程中加入數(shù)滴吐溫，則滅菌效果更好。(4)植物材料用無(wú)菌水沖洗3-5次，以除去滅菌劑。3、提高商品化生產(chǎn)效率1.節(jié)約能源2.減少勞務(wù)開(kāi)支3.擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模4.節(jié)約生產(chǎn)材料補(bǔ)：4.降低商業(yè)化生產(chǎn)成本提高經(jīng)濟(jì)效益針對(duì)試管苗生產(chǎn)所需的費(fèi)用，應(yīng)采取相應(yīng)措施降低生產(chǎn)成本，增強(qiáng)產(chǎn)品競(jìng) 爭(zhēng)力，提高試管苗經(jīng)濟(jì)效

3、益。5、誘導(dǎo)體胚的條件：1 .外植體：產(chǎn)生部位：尤其胚、下胚軸、幼根、花序軸組織、未成熟 的子房等；生理狀態(tài)：采用外植體增殖能力較強(qiáng)時(shí)候的狀態(tài)；基因型。2.培養(yǎng)基：特別重要的是培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)素和 N源。N源：還原態(tài)氮/硝態(tài)氮適 宜比值。3 .生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：生長(zhǎng)素：所有生長(zhǎng)素中，2,4-D被證明是極有效的。體胚發(fā)生2個(gè)階段：胚的分化，胚性細(xì)胞的形成（需2,4-D ）;胚狀體的發(fā)育（低 或去除2,4-D ）。4 ,4-D會(huì)誘導(dǎo)乙烯的產(chǎn)生，導(dǎo)致纖維素酶等活性升高，引起胚性細(xì)胞團(tuán)的破壞。 細(xì)胞分裂素：細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素配合促進(jìn)誘導(dǎo)體胚形成。赤霉素和脫落酸：GA ABA卬制體胚形成，但ABA可促進(jìn)胚狀體的

4、正常發(fā)育， 防止畸形胚的產(chǎn)生，尤其是對(duì)體胚成熟特別重要。細(xì)胞再分化：是指脫分化的分 生細(xì)胞重新恢復(fù)分省能力，沿著正常的發(fā)育途徑形成具有特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞。6、組培實(shí)驗(yàn)室的組成，基本設(shè)備和功能答：組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室基本組成：（1）無(wú)菌操作室（2）化學(xué)實(shí)驗(yàn)室（3）培 養(yǎng)室（4）細(xì)胞學(xué)觀察室 （5）暗室（6）馴化移栽室； 無(wú)菌操作室基本設(shè)備 有超凈工作臺(tái)、紫外燈、小擱架。無(wú)菌操作用的器具，主要進(jìn)行無(wú)菌操作；化學(xué) 實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)備有干燥箱、電子天平、量筒、吸管、燒杯、高壓滅菌裝置等，主 要用于配置好培養(yǎng)基；培養(yǎng)室設(shè)備有固定式培養(yǎng)架、旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)架、轉(zhuǎn)床、搖床、 控溫、控光設(shè)備，是將接種到試管等的培養(yǎng)材料進(jìn)行

5、培養(yǎng)生長(zhǎng)的場(chǎng)所。細(xì)胞學(xué)觀 察室有顯微鏡、解剖鏡、及照相設(shè)備，用于觀察，記錄培養(yǎng)材料的生長(zhǎng)情況及結(jié) 果；暗室用于實(shí)驗(yàn)室材料的攝影記錄，有放大機(jī)、暗箱、上光機(jī)等設(shè)備；馴化移 栽室用于試管苗移栽，有彌霧裝置、遮陰網(wǎng)、移植床等。7、培養(yǎng)基的配制答：配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)做好下列準(zhǔn)備工作：（1）實(shí)驗(yàn)用具的準(zhǔn)備 （2）試劑、 藥品的準(zhǔn)備（3）根據(jù)培養(yǎng)基的配方、母液擴(kuò)大倍數(shù)及需要配制的培養(yǎng)基體積計(jì) 算所需的各種母液及其他附加物的量。具體操作如下：1,取規(guī)定數(shù)量糖原和凝固劑，加熱使之溶解2,根據(jù)計(jì)算所需量依次加入大量元素、微量元素、鐵鹽、 有機(jī)物、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液及其他特殊附加物，攪拌均勻3,加水定容至規(guī)定體 積8、

6、無(wú)菌操作技術(shù)答：無(wú)菌操作技術(shù)分為物理滅菌一干熱、 濕熱、射線處理，物理除菌一過(guò)濾， 化學(xué)方法一消毒劑、抗菌素滅菌。注意事項(xiàng)：（1）瓶口要清洗干凈 （2）培養(yǎng) 瓶上的標(biāo)記要擦凈 （3）冬季用熱水溶解洗衣粉后再洗（4）洗過(guò)玻璃器皿要瀝干或烘干（5）移液管之類(lèi)的量具和計(jì)量?jī)x器不直接烘烤。實(shí)驗(yàn)室一般使用高壓 滅菌鍋，是在0.105mpa壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)到121C,在此水蒸氣溫度下，可 以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽抱。9、熱處理脫毒法答：原理：（1）高于正常溫度的環(huán)境（35C40C）時(shí)，組織內(nèi)部的病毒部 分或全部鈍化 （2）熱處理使病毒失去傳染力。方法：1,適用于離體材料和休 眠器官的處理。在5

7、0c左右溫水浸漬10min至數(shù)小時(shí)2,熱空氣法：盆栽植物移 入溫?zé)岑熓遥?540C,適合莖尖，處理時(shí)間短則幾十分鐘，長(zhǎng)可達(dá)數(shù)月。局限 性：1并非所有的病毒都對(duì)熱處理敏感 2延長(zhǎng)熱處理時(shí)間，也可能會(huì)鈍化，植 物組織中的抗性因子3處理后只有一小部分植株能存活。10、快繁中幾大難題及解決方法答：影響快繁的方法有內(nèi)因有外因。因主要是外植體的選取，應(yīng)該在春夏、早秋 時(shí)根據(jù)外植體基因型和生理、發(fā)育等方面選取0.51cm的。外因，首先是污染，防止污染應(yīng)從以下幾方面考慮：（1）選擇植物材料（2）嚴(yán)格消毒滅菌（3）合 理安排繁殖程序（4）規(guī)范操作2 ,褐變問(wèn)題，克服外植體產(chǎn)生褐變的措施有（1） 選擇適合的外植體

8、和培養(yǎng)條件（2）連續(xù)轉(zhuǎn)移（繼代培養(yǎng)）（3）加入抗氧化劑； 3,玻璃化，控制和克服玻璃化的措施有（1）使用透氣好的封口材料 （2）光照（3）溫度（4）提高瓊脂的量（5）硝態(tài)和氨態(tài)的比例提高 （6）繼代培養(yǎng)時(shí)， 降低ck/IAA ,增加乙烯醇等 （7）抗逆性的鍛煉。11、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用及意義：理論研究（在遺傳、生理、生化、病理等研究上的應(yīng)用）；快繁；脫毒；遺傳 育種（單倍體育種、突變育種、抗性選育、體細(xì)胞雜交）；次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)（主 要用于藥物、食品、調(diào)料、香精、顏料等領(lǐng)域）；種質(zhì)資源保存和交換；人工制 種。13、植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法：1.通過(guò)載體系統(tǒng)：病毒、細(xì)菌質(zhì)粒 2.非載體介導(dǎo)：種質(zhì)系統(tǒng)（

9、自身生殖系 統(tǒng)細(xì)胞，如花粉）、直接轉(zhuǎn)化系統(tǒng)（基因槍、超聲波）。14、原生質(zhì)體融合的原理和方法答：植物原生質(zhì)體最大特性是去掉細(xì)胞壁的裸細(xì)胞無(wú)論來(lái)源如何都具有彼此融合 的能力1.自發(fā)融合2.誘發(fā)融合：a, NaNO處理b,高PH值一高濃度鈣離子處 理c ,聚乙二醇（PEG處理d ,電融合3.化學(xué)融合15、外植體消毒應(yīng)注意的問(wèn)題：1.要考慮藥劑對(duì)各類(lèi)菌類(lèi)的殺滅效果，從中選出最有效的殺菌劑；2.考慮植物材 料對(duì)殺菌劑的忍耐力。17、快繁的基本程序：1.穩(wěn)定無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立時(shí)期；2.穩(wěn)定培養(yǎng)系的增殖、生長(zhǎng)和健壯時(shí)期；3.誘導(dǎo)莖芽生根形成小苗時(shí)期；4.生根小苗移栽和馴化時(shí)期；5.商品苗培育時(shí)期。18、植

10、物離體快繁中常見(jiàn)的問(wèn)題：污染、遺傳穩(wěn)定性、玻璃化、褐化、黃化等19、克服外植體褐變：選取適宜的外植體和培養(yǎng)條件；剪切時(shí)盡量減少傷口面積，剪切口盡量平 整；連續(xù)轉(zhuǎn)移（繼代培養(yǎng)）；加入抗氧化劑。20、玻璃化苗產(chǎn)生原因：乙烯過(guò)飽和，引起解氨酶活性降低，阻礙木質(zhì)化進(jìn)程；細(xì)胞激動(dòng)素或俊離子 的過(guò)剩也是一種原因；植物的磷酸戊糖代謝途徑與玻璃苗產(chǎn)生也有關(guān)。22、控制玻璃化苗的措施：1. 使用透氣性好的封口材料，盡可能降低培養(yǎng)容器中空氣的濕度，改善氧氣的供應(yīng)情況。2.選擇合適的激素種類(lèi)和濃度，注意生長(zhǎng)素和分裂素的配合， 盡量兼顧繁殖系數(shù)。3.采用固體培養(yǎng)基，適當(dāng)增加瓊脂含量，降低培養(yǎng)基中的水 勢(shì)。4.高溫季節(jié)

11、培養(yǎng)室要有降溫措施，避免培養(yǎng)基溫度的突然升高。5.改變供氮 形態(tài)。6.在培養(yǎng)基中適量地添加間苯三酚或根皮甘、青霉素 G鉀、活性炭、聚乙 烯醇均可以有效的抑制玻璃苗的產(chǎn)生。7.適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)光照培養(yǎng)皿的時(shí)間或增加自 然光照，提高光照的強(qiáng)度，有利于克服玻璃化。8.適當(dāng)提高培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)鹽的含 量。23、不定芽與體胚芽比較：1 ）體細(xì)胞胚最根本的特征是具有兩極性 （2）體胚的維管組織與外植 體的該組織無(wú)解剖結(jié)構(gòu)上的聯(lián)系，而不定芽或不定根往往總與愈傷組織的維管組 織聯(lián)系（3）體細(xì)胞胚維管組織的分布是獨(dú)立的“ Y”字形，而不定芽的維管組 織無(wú)此現(xiàn)象。24、莖尖培養(yǎng)脫毒的原理：因?yàn)椴《局饕ㄟ^(guò)維管束和胞間連絲傳

12、播， 在植物莖尖分生組織中無(wú)維管束，且 胞間連絲不發(fā)達(dá)，病毒運(yùn)轉(zhuǎn)速度慢；加之分生組織內(nèi)細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)速度快， 病 毒擴(kuò)散的速度趕不上細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)速度， 所以1.病毒在植物體內(nèi)分布不均勻， 越接近頂端分生組織，病毒濃度越??；2.病毒DN的子與細(xì)胞分裝蛋白質(zhì)合成競(jìng) 爭(zhēng)，在迅速合成的植物細(xì)胞中正常合成的蛋白質(zhì)占優(yōu)勢(shì)；3.病毒的復(fù)制趕不上細(xì)胞分裂的速度。25、在植物組織培養(yǎng)中細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素各有什么作用？答：生長(zhǎng)素能促進(jìn)細(xì)胞的縱向伸長(zhǎng)，它的作用具有兩重性：既促進(jìn)生長(zhǎng)，又 能抑制生長(zhǎng)、甚至殺死植物；既促進(jìn)發(fā)芽，又會(huì)抑制發(fā)芽；既能防止落花落果， 又可疏花疏果。這取決于濃度、細(xì)胞的年齡和器官的種類(lèi)。一般

13、低濃度促進(jìn)生長(zhǎng)，中濃度抑制生長(zhǎng)，高濃度則殺死植物。細(xì)胞分裂素能促進(jìn)細(xì)胞分裂和擴(kuò)大、延遲衰老和保鮮、誘導(dǎo)芽的分化、促進(jìn)側(cè)芽育，防止果樹(shù)生理落果、打破種子的休眠，促使其發(fā)芽等作用。26、什么是看護(hù)培養(yǎng)？其具體的方法是什么？答：看護(hù)培養(yǎng)指用一塊生長(zhǎng)活躍的愈傷組織來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞或其他培養(yǎng)物，使其生長(zhǎng)和增殖的方法。具體方法：1、將生長(zhǎng)活躍的愈傷組織放入滅過(guò)菌的固體培養(yǎng)基上，并在愈傷組織上放一片無(wú)菌濾紙片。2、將該愈傷培養(yǎng)過(guò)夜。3、將單細(xì)胞或其他培養(yǎng)物放于濾紙片上面，移入培 養(yǎng)室培養(yǎng)。27、培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿和植物材料通常怎樣滅菌 ？答：植物材料一般采用藥劑浸泡滅菌，具體操作如下：1、外植體的預(yù)處理，對(duì)植物

14、組織進(jìn)行修整，去掉不需要的部分，并將外植體用流水沖洗干凈。2、用70%勺酒精浸潤(rùn)材料30s左右。3、用滅菌劑浸泡滅 菌，滅菌時(shí)不時(shí)攪動(dòng)，使植物材料與滅菌劑有良好的接觸， 若滅菌過(guò)程中加入數(shù) 滴吐溫，則滅菌效果更好。4、植物材料用無(wú)菌水沖洗3-5次，以除去滅菌劑。 培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿可采用濕熱滅菌， 培養(yǎng)器皿也可采用干熱滅菌，有些培養(yǎng)器械 也可采用灑精燈火焰灼燒。29、NAA的中文名稱(chēng)是什么？有何作用和特點(diǎn)？答：NAA的中文名稱(chēng)是荼乙酸，是植物生長(zhǎng)素的一種。作用和特點(diǎn)為：促進(jìn)植物細(xì)胞縱向伸長(zhǎng)，促進(jìn)植物細(xì)胞脫分化，促進(jìn)根的生 長(zhǎng)。除此以外還具有植物生長(zhǎng)素類(lèi)有一般性質(zhì)：它的作用具有兩重性：既促進(jìn)生 長(zhǎng)

15、，又能抑制生長(zhǎng)、甚至殺死植物；既促進(jìn)發(fā)芽，又會(huì)抑制發(fā)芽；既能防止落花 落果，又可疏花疏果。這取決于濃度、細(xì)胞的年齡和器官的種類(lèi)。一般低濃度促 進(jìn)生長(zhǎng)，中濃度抑制生長(zhǎng)，高濃度則殺死植物。30、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備：1 .恒溫箱、生化培養(yǎng)箱、光照培養(yǎng)箱、人工氣候箱和植物生長(zhǎng)箱2. 烘箱3.空調(diào)、加熱器4.滅菌設(shè)備5.冰箱和冰柜6.振蕩和 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)機(jī)7. 天平8.酸度計(jì)9.顯微鏡10水浴鍋11.蒸儲(chǔ)水制造裝置12. 超凈工作臺(tái)31、無(wú)菌操作技術(shù)：1.常用滅菌方法及其使用范圍（濕熱滅菌、干熱滅菌、過(guò)濾滅菌、射線滅菌、 藥劑滅菌）2.培養(yǎng)基滅菌3.植物材料的滅菌4.接種15、培養(yǎng)基的制備：1.母液的配制與保存2.

16、培養(yǎng)基的配制3.培養(yǎng)基的滅菌 4. 培養(yǎng)基的保存32、培養(yǎng)基的制備：1.母液的配制與保存2.培養(yǎng)基的配制3.培養(yǎng)基的滅菌 4.培養(yǎng)基的保存33、高壓蒸汽滅菌鍋操作程序：將分裝好的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌鍋的消毒桶內(nèi)，滅菌鍋內(nèi)添加適量的水，蓋好滅菌鍋蓋，對(duì)角擰緊螺絲；檢查一下放氣閥有無(wú)故障，然后關(guān)閉放氣閥，打 開(kāi)電源加熱，當(dāng)壓力表指針達(dá)0.05mpa時(shí)，打開(kāi)氣閥，排出鍋內(nèi)空氣，再關(guān)閉氣 閥，此時(shí)鍋內(nèi)取而代之的是水蒸氣，當(dāng)高壓鍋內(nèi)溫度達(dá)121C,壓力為0.105mpa 時(shí)保持此壓力滅菌約1520min,然后切斷電源，緩緩打開(kāi)放氣閥放氣，待高壓 鍋壓力表指針恢復(fù)到零后，開(kāi)啟壓力鍋并取出培養(yǎng)基，室溫下冷

17、卻。34、為什么要有一定的細(xì)胞起始濃度？答：細(xì)胞能夠合成某些對(duì)進(jìn)行分裂所必須的化合物，只有當(dāng)這些化合物的內(nèi)生濃度達(dá)到一個(gè)臨界點(diǎn)以后，細(xì)胞才能進(jìn)行分裂，當(dāng)細(xì)胞密度處于臨界點(diǎn)密度以下是永遠(yuǎn)達(dá)不到這種平衡狀態(tài)，因此細(xì)胞也就不能分裂。22、體細(xì)胞雜交按所用親本原生質(zhì)體的性質(zhì)可分為3 類(lèi)：體細(xì)胞雜交 （ 用雙親體細(xì)胞原生質(zhì)體或其衍生系統(tǒng)進(jìn)行誘導(dǎo)融合） ；配子間細(xì)胞雜交（用雙親的性細(xì)胞原生質(zhì)體作為融合親本進(jìn)行融合、培育、篩選、鑒定等過(guò)程）；配子和體細(xì)胞雜交（一個(gè)融合親本為性細(xì)胞原生質(zhì)體，另一個(gè)為體細(xì)胞原生質(zhì)體間的雜交過(guò)程）。35、體細(xì)胞雜交按所用親本原生質(zhì)體的性質(zhì)可分為3 類(lèi)：體細(xì)胞雜交（ 用雙親體細(xì)胞原

18、生質(zhì)體或其衍生系統(tǒng)進(jìn)行誘導(dǎo)融合） ； 配子間細(xì)胞雜交（用雙親的性細(xì)胞原生質(zhì)體作為融合親本進(jìn)行融合、培育、篩選、鑒定等過(guò)程）；配子和體細(xì)胞雜交（一個(gè)融合親本為性細(xì)胞原生質(zhì)體，另一個(gè)為體細(xì)胞原生質(zhì)體間的雜交過(guò)程）。36 、 固相化細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：1. 有利于次級(jí)代謝產(chǎn)物的積累； 2. 細(xì)胞經(jīng)包埋后， 可以減小剪切力的損傷，有利于產(chǎn)物合成和分泌； 3. 有利于進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)和生物輕化等。37 、簡(jiǎn)述植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)？植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是細(xì)胞全能性學(xué)說(shuō)， 即植物體的每一個(gè)細(xì)胞都攜帶 有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成為完整植株的潛在能力。38、植物組織培養(yǎng)有哪些特點(diǎn)？1 ）培養(yǎng)條件可以人為控制（ 2）生長(zhǎng)周期短，繁殖率高：（ 3）管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制：39、植物組織培養(yǎng)主要應(yīng)用于哪些方面？1）快速繁殖運(yùn)用組織培養(yǎng)的途徑，一個(gè)單株一年可以繁殖幾萬(wàn)到幾百萬(wàn)個(gè)植株；（ 2）種苗脫毒針對(duì)病毒對(duì)農(nóng)作物造成的嚴(yán)重危害，通過(guò)組織培養(yǎng)可以有效地培育出大量的無(wú)病毒種苗；（ 3）培育和創(chuàng)制新品種利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠(yuǎn)緣雜交取得成功，從而育成一些罕見(jiàn)的新物種；（ 4） 大量生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)通過(guò)植物細(xì)胞培養(yǎng)獲得的生物堿、 維生素、 色素、抗生素以及抗腫瘤藥物不下 50 多個(gè)大類(lèi)， 其中已有 30 多種次生物質(zhì)的含量在人工培養(yǎng)時(shí)已達(dá)到或超過(guò)親本植物的水平。