乙型肝炎表面抗原檢測中的偶然誤差及對策

1、292.13No.32003ChinJNosocomiolVol論著乙型肝炎表面抗原檢測中的偶然誤差及對策肖征1,周薇薇1,徐雅萍1,董立2(1.解放軍總醫(yī)院,北京100853;2.漯河市第一人民醫(yī)院,河南漯河462000)摘要:目的觀察臨床常規(guī)檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)中出現(xiàn)偶然誤差的機(jī)率以及探討相應(yīng)的解決辦法。方法對臨床常規(guī)檢測乙型肝炎表面抗原的血清標(biāo)本,用ELISA首次測定后,對其陽性標(biāo)本再用ELISA方法復(fù)測和用膠體金紙條法檢測,部分標(biāo)本再用另外兩種ELISA試劑檢測,并對其中7例標(biāo)本進(jìn)行了確認(rèn)試驗。結(jié)果共檢測16944例,首次單孔測試陽性883例,復(fù)查后確定其中陽性846例,

2、假陽性率為4.1%,用膠體金法對這846例進(jìn)行測試,假陰性率為8.03%。結(jié)論對ELISA檢測方法,陽性者確有必要進(jìn)行復(fù)孔測試,若用膠體金法復(fù)測可節(jié)約成本和時間,但單獨(dú)的膠體金法只適合于初篩試驗。關(guān)鍵詞:HBsAg;偶然誤差;ELISA中圖分類號:R512.6+2文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:100524529(2003)0320292203ChanceErrorsinClinicalHBsAgDetectionandCountermeasuresXIAOZheng,ZHOUWei2wei,XUYa2ping,DONGLi(1.DeptMicrobiology,GeneralHospitalofPL

3、A,Beijing,100853,China;2.ClinicalLab,theFirstHospitalofLuoheCity,Luohe,Henan462000,China).SomesampleswerecheckedbytwootherELISAkitsgoldstripswereappliedtothoseshowingreactiveresultscanbeusedforretesttosavethetimeandcost.Itsbettertouserapidstripsonlyforscreenpurposeduetoitslowsensitivity.Keywords:HBs

4、Ag;Chanceerror;ELISA目前國內(nèi)對乙型肝炎病毒感染的診斷首要倚重的是對患者血清中HBsAg的檢測。而最多采用的檢測方法是酶免疫試驗(ELISA)。我們實(shí)驗室在臨床檢驗中,注意到ELISA試驗由于本身的一些特點(diǎn),不可避免地出現(xiàn)一些誤差,也就是偶然誤差。如果處理不好,會極大地影響到實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。為此,我們在采取相應(yīng)措施的同時,觀察了一部分標(biāo)本的實(shí)際測定情況,以了解乙肝表面抗原的酶免疫檢測中偶然誤差對實(shí)驗結(jié)果的影響程度,以及可能的解決方法。1材料與方法1.1材料2002年15月間我院住院患者及門診患者送檢的常規(guī)檢測HBsAg的血液標(biāo)本,不抗凝。對需保留的標(biāo)本,分離血清后,-20凍

5、存。試劑:酶免疫法檢測HBsAg,廠家有美國雅培(Murex)、法國生物梅里埃(AKZO)、北京萬泰。HBsAg膠體金紙條法檢測試劑,我們對3家贈送試劑進(jìn)行了測試,選用靈敏度最好的一家試劑作復(fù)測用,其靈敏度約12g L。HBsAg確認(rèn)試劑:廠家為美國雅培公司(Murex),其原理是對標(biāo)本進(jìn)行雙孔檢測,在加入標(biāo)本后將試劑盒所帶的HBsAg中和抗體加入其中的1孔(中和孔)中,而另一孔不加抗體為對照孔。其他步驟與普通的ELISA測試大致相同,測定結(jié)果以中和孔的OD值對照孔的一定比值時為HBsAg陽性。收稿日期:2002205202;修訂日期:2002211217中華醫(yī)院感染學(xué)雜志2003年第13卷第

6、3期1.2觀察方法檢測,其中ELISA陽性者再用膠體金方法測試,若亦為陽性即報告陽性。對膠體金方法檢測結(jié)果為陰性者,再用ELISA法雙孔復(fù)查,以雙孔復(fù)查的結(jié)果為準(zhǔn)出具報告。常規(guī)檢測,共測16944例,其中ELISA初次測定陽性反應(yīng)(reactive)883例。對這883例標(biāo)本用膠體金試劑測定,其中有105例陰性。這105例再用ELISA復(fù)查后有37例為陰性,占初測陽性的4.10%,ELISA法陽性總數(shù)為846例,其中68例膠體金試劑為陰性,假陰性率8.03%。血清總陽性率為4.99%。上述68例膠體金試劑陰性標(biāo)本中用另外兩種ELISA試劑(進(jìn)口、國產(chǎn)各1種)檢測了36例,結(jié)果這36例用進(jìn)口試劑

7、測試均為陽性,國產(chǎn)試劑有1例陰性。37例ELISA初次測定假陽性的OD值分布為:3.000、3.000、3.000、3.000、3.000、3.000、2.997、2.875、1.683、1.145、1.010、0.745、0.711、0.697、0.667、0.552、0.522、0.445、0.435、0.401、0.352、0.344、0.311、0.309、0.301、0.293、0.293、0.231、0.228、0.222、0.211、0.200、0.198、0.192、0.188、0.182、0.152。36例膠體金法假陰性標(biāo)本其ELISA測定的OD值分布為:3.000、2.50

8、1、1.989、1.510、1.345、1.132、1.119、1.038、1.035、0.945、0.844、0.820、0.812、0.799、0.787、0.773、0.770、0.746、0.697、0.634、0.542、0.539、0.531、0.510、0.485、0.462、0.461、0.460、0.324、0.311、0.309、0.272、0.251、0.212、0.209、0.191。7例確認(rèn)測試結(jié)果,有6例陽性,1例陰性。其分布與ELISAOD值分布無關(guān)。3討論自ELISA方法進(jìn)入免疫學(xué)檢測領(lǐng)域以來,大家多注意它對各種標(biāo)本檢測的靈敏度及特異性指標(biāo),這兩個指標(biāo)是由測試本

9、身的系統(tǒng)誤差所決定的。實(shí)驗系統(tǒng)本身的系統(tǒng)誤差是由試劑的制備情況,包括板的包被、單克隆抗體的制備、酶標(biāo)記物的制備以及其他相關(guān)試劑的配置等因素所決定的,這些可能因素導(dǎo)致的測試誤差是可以預(yù)測的,但是不能避免的。293也就是說,一旦試劑成分確定下來,其敏感性、特異性也就確定下來了。在臨床實(shí)踐中,最常遇到的問題卻是偶然誤差。由于ELISA試驗的特點(diǎn),極易受加樣錯誤、孔與孔之間的交叉污染、加試劑的不均一性、實(shí)驗程序以及儀器故障等的影響,尤其是手工或半自動操作時。其中最容易出現(xiàn)的是假陽性。在試劑的評價以及研究工作中,可以通過做雙孔(doublewells)的辦法去除相當(dāng)多的加樣、交叉污染所造成的誤差,再加上

10、嚴(yán)格操作規(guī)程、最優(yōu)化實(shí)驗條件,可以取得最優(yōu)的檢測結(jié)果。但在常規(guī)工作中,由于成本問題,不可能對所有標(biāo)本都采用雙孔檢測的方法;而實(shí)驗人員的水平也會參差不齊,并不是所有的檢測都是在最優(yōu)條件下進(jìn)行的。在一般情況下,可以說對臨床標(biāo)本的檢測結(jié)果,首次測定為陰性的基本可以認(rèn)為是真陰性(truenegative),而陽性反應(yīng)者(reactive)則并不一定為真陽性(truepositive)。這一點(diǎn),從我們的實(shí)驗結(jié)果分析中可以看到。本試驗中ELISA方法首次單孔測定,其總的假陽性(falsereactive)率為4.10%。最簡單的解決辦法,是將此標(biāo)本再作1次重復(fù)性的測定(應(yīng)為雙孔),以為確定。但這個方法的缺

11、點(diǎn)在于,需要增加0.5d出具報告時間,并要增加試劑費(fèi)用。值得注意的是,據(jù)我們的了解,國內(nèi)的實(shí)驗室,尤其是中小型實(shí)驗室,有許多并不做這個重復(fù)測定,初測陽性后即報陽性。國內(nèi)幾本權(quán)威性的操作手冊也沒有對ELISA檢測必須復(fù)測的規(guī)定1,2。如果不做復(fù)測,從本研究所統(tǒng)計的數(shù)據(jù)看,可能會出現(xiàn)4.10%的誤報陽性。從這37例的測定結(jié)果來看,有約一半的OD測定值0.300,對這一部分標(biāo)本,多數(shù)實(shí)驗室是會做重復(fù)測定的,換句話說,對于部分操作稍為嚴(yán)格一些的實(shí)驗室,單孔測定的誤報陽性率會在2.00左右。但有一點(diǎn)要提出的是,根據(jù)我們的經(jīng)驗,如果應(yīng)用全自動系統(tǒng)進(jìn)行試驗,可以大大減少偶然誤差。我們認(rèn)為,重復(fù)測定主要解決的

12、問題是偶然誤差,而膠體金法雖敏感特異性均比ELISA方法要低,但其偶然誤差率卻大大低于ELISA,也就是說它的重復(fù)性好。所以我們選擇將ELISA初測陽性的標(biāo)本用膠體金法復(fù)測,采取兩種方法的優(yōu)勢互補(bǔ),效果很好。首先是縮短出具報告所需時間,即ELISA試驗陽性后加做膠體金試驗只需增加十幾分鐘的實(shí)驗時間;其次膠體金法試劑費(fèi)用要低于ELISA試劑(約1 21 4),更為經(jīng)濟(jì)。在這里,我們不是用膠體金法去確認(rèn)ELISA法,而是增加ELISA法的一個參照指標(biāo),如果這個參照指標(biāo)與ELISA是相符的,即認(rèn)為這個ELISA結(jié)果是可信的。但是,膠體金法294.13No.32003ChinJNosocomiolVo

13、l不應(yīng)作為臨床大中型實(shí)驗室的常規(guī)檢測乙肝表面抗原的方法。本研究所作的膠體金法,假陰性率為8.03%。這些假陰性標(biāo)本的初次ELISA2OD值有70%1.000,屬于膠體金法敏感度不夠,未能測出sAg的陽性率應(yīng)低于就診人群。這已低于前些年普遍認(rèn)為的我國普通人群的HBsAg陽性率在10%左右的數(shù)值。也說明我國對乙肝的防治工作有了很大的進(jìn)展,人民的健康水平有了長足的提高。(本研究中乙肝表面抗原確認(rèn)試驗,承北京市血站質(zhì)檢)科邱燕協(xié)助進(jìn)行,在此表示感謝。所致。對隨機(jī)取的7個膠體金復(fù)測為陰性的標(biāo)本作乙肝表面抗原確認(rèn)試驗,即有6個為陽性,說明ELISA初測陽性標(biāo)本多數(shù)血中確有乙肝表面抗原存在。本研究中膠體金法

14、的假陰性百分率大于已有的一些報道3,4。建議膠體金法只適合于做初篩試驗,如試驗結(jié)果與臨床癥狀不太符合,應(yīng)用其他的方法復(fù)查。本研究只對標(biāo)本是否為HBsAg陽性進(jìn)行了探討,并未對其乙型肝炎病毒感染狀態(tài)作進(jìn)一步的研究,如檢測乙肝病毒核酸等。另外,對ELISA初次測定陰性的標(biāo)本亦未作其是否假陰性的進(jìn)一步測試。從研究的總測定例數(shù)來看,住院及門診患者的HBsAg的總陽性率為4.99%,而普通人群的HB2參考文獻(xiàn):1李影林.臨床醫(yī)學(xué)檢驗手冊M.1987.2仲劍平.醫(yī)療護(hù)理技術(shù)操作常規(guī)M.1998.3FarghalyAM,KotkatAM.Studyofthesensitivityofbloodspotted

15、onfilterpaperinthedetectionofHBsAgandanticoreusingELISAtechniqueJ.1990,65(324):3912400.4任衛(wèi)國,陳虹,王知秋.金標(biāo)試紙法與ELISA法檢測無償獻(xiàn)血JEgyptPublicHealthAssoc,吉林:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,北京:人民軍醫(yī)出版社,者HBsAg結(jié)果比較J.中國輸血雜志,2001,14(1):25.護(hù)理人員醫(yī)院感染認(rèn)知程度調(diào)查分析宋翼(黃石市二醫(yī)院,湖北黃石435002)關(guān)鍵詞:護(hù)理人員;醫(yī)院感染;知識中圖分類號:R471文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B文章編號:100524529(2003)0320294201為了

16、解我院護(hù)理人員醫(yī)院感染認(rèn)知程度,以采取有地放矢的培訓(xùn)方法,2000年8月,筆者對臨床17個科室護(hù)理人員進(jìn)行調(diào)查,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。師醫(yī)院感染診斷及抗生素應(yīng)用、微生物及免疫學(xué)知識欠缺;護(hù)士除有以上缺陷外,衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測掌握不完全;而實(shí)習(xí)護(hù)士除了解消毒隔離知識外,其余均知曉甚少。1材料與方法調(diào)查對象為臨床一線護(hù)理人員,調(diào)查內(nèi)容為消毒隔離基本知識、一次性物品的管理、衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測、醫(yī)院感染診斷,抗生素應(yīng)用、微生物與免疫學(xué)等相關(guān)內(nèi)容。調(diào)查方法采用統(tǒng)一閉卷答題,分別調(diào)查了護(hù)士長21名、主管護(hù)師82名、護(hù)士94名、實(shí)習(xí)護(hù)士42名。3建議由此可看出護(hù)理人員掌握的醫(yī)院感染知識遠(yuǎn)不能適應(yīng)臨床需要,加強(qiáng)和普及醫(yī)院感染知識培訓(xùn)以及拓寬護(hù)理人員知識面已成為當(dāng)務(wù)之急,