申報(bào)國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目申請(qǐng)書樣板.doc

1、申報(bào)國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目申請(qǐng)書樣板申報(bào)國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目申請(qǐng)書樣板各位申請(qǐng)人院科教部從我院申報(bào)國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目中挑選了 一份 嚴(yán)格按照?qǐng)?bào)告正文撰寫提綱要求撰寫，并在撰寫的整體布 局、寫作方法上比較適宜的申請(qǐng)書作為樣板申請(qǐng)書，提供給 其他申請(qǐng)人在撰寫申請(qǐng)書時(shí)參考。注考慮到本項(xiàng)目也將申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金，從技術(shù)保 密方面考慮，涉及核心技術(shù)和關(guān)鍵問(wèn)題之處將以“xxxxxxX 代替。報(bào)告正文 (一)立項(xiàng)依據(jù)與研究?jī)?nèi)容1立項(xiàng)依據(jù) 肝纖維化是嚴(yán)重威脅人類健康的重要疾病之一，迄今沒(méi)有滿意的 治療方法。目前國(guó)內(nèi)外絕大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，肝星狀細(xì)胞( hepatic stellate cell, HSC)激活是

2、肝纖維化的關(guān)鍵，抑制 HSC的激 活對(duì)肝纖維化的防治有重要價(jià)值 1。粉防己堿(tetrandrine,又名漢防己甲素) 是中藥粉防己 (Stephania tetrandra S Moore)的主要有效生物堿成分， 具有 廣泛的藥理作用?？垢卫w維化是Tet的重要應(yīng)用領(lǐng)域之一。我們研究室在過(guò)去的十幾年中，對(duì)Tet抗肝纖維化作用及機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)研究，證實(shí)Tet是抗肝纖維化有效藥物。然而，由于Tet的劑量安全范圍較小， 以往研究發(fā)現(xiàn)的抗肝纖維化有效劑量與中毒劑量比較接近，故成為限制其臨床 應(yīng)用的重要因素。近年國(guó)內(nèi)Tet抗肝纖維化研究也由此逐漸走向低谷。為減少毒副反應(yīng)，拓展該藥物的臨床應(yīng)用，我們近四年

3、 從降低Tet的單藥劑量、聯(lián)合用藥及改造藥物毒性基團(tuán)等方 面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性探索。新近，我們?cè)趪?guó)內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)，低濃度Tet能上調(diào)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 B (transforming growth factor factor , TQF- 抑制 性信號(hào)分子Smad 7表達(dá)，調(diào)控TGF- &Smad信號(hào)通路，抑制 體外培養(yǎng)靜止期 HSC活化，阻斷TGF- B 1促靜止期HSC活 化效應(yīng)，Tet還誘導(dǎo)活化HSC活化逆轉(zhuǎn)。部分最新研究成果已經(jīng)整理成文發(fā)表在本領(lǐng)域有一定影 響力的SCI索引源期刊上，并被SCI收錄收錄號(hào)IDS Number 963XN 2(相關(guān)文章參詳見(jiàn)申請(qǐng)人簡(jiǎn)歷及附件這些全新研究成果進(jìn)一步增

4、強(qiáng)了我們開(kāi)發(fā)這一傳統(tǒng)中藥的信心。TGF- B 1是目前認(rèn)識(shí)的最重要的促肝纖維化因子。抑制TGF- B 1對(duì)HSC的作用一直以來(lái)均是抗肝纖維化重要著眼點(diǎn)3 oSmad 7是HSC TGF- B信號(hào)通路的最主要負(fù)反饋調(diào)節(jié)信號(hào) 分子，上調(diào)Smad 7是抑制TGF- B對(duì)HSC不良生物效應(yīng)的有措施之一 4在肝纖維化過(guò)程中,TGF- B信號(hào)通路還與整合素信號(hào)通 路存在密切聯(lián)系。這表現(xiàn)在三個(gè)方面 XXXXXX 。XXXXXX 。XXXXXXXXX 。綜上所述，XXXXXXX ,如能 XXXXXX ,可進(jìn)一步實(shí) 現(xiàn)XXXXX治療?；谝陨涎芯拷Y(jié)果，我們研究室在國(guó)家自然科學(xué)基金資 助下，過(guò)去三年中應(yīng)用化學(xué)方法

5、合成了RGD和M6P,并將RGD與M6P結(jié)合成一新型復(fù)合分子 RGD-M6P，研究比較了 它們對(duì)HSC靶向性及在抑制其功能中的作用（項(xiàng)目名稱RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究，編號(hào) 30170412）。我們的研究發(fā)現(xiàn)，RGD和RGD-M6P均可抑制HSC活化。RGD在抑制TGF- B激活同時(shí)，還可阻止HSC與ECM結(jié) 合，阻斷整合素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。研究還發(fā)現(xiàn)，M6P能提高RGD作用于HSC的靶向性， 增加其局部濃度，使 RGD-M6P顯示由較RGD更強(qiáng)的抑制 作用14 o我們首次證實(shí)，新型復(fù)合分子RGD-M6P用于抗肝纖維化 治療，無(wú)論在對(duì)HSC靶向的特異性，還是多位點(diǎn)聯(lián)合作用方面，

6、都優(yōu)于單一的含 RGD序列的肽段或 M6P (參見(jiàn)基金結(jié) 題摘要，相關(guān)文章參見(jiàn)申請(qǐng)人簡(jiǎn)歷及附件四)。RGD-M6P新型復(fù)合分子的研制成功及其對(duì)HSC靶向與抑制功能的發(fā)現(xiàn)，有助于我們?nèi)パ芯扛嗟?HSC靶向選擇性 高、局部作用強(qiáng)、系統(tǒng)毒性小的新型藥物和或制劑，從而提 高藥物的療效、減輕毒性反應(yīng)。結(jié)合我們對(duì)Tet藥理作用的分子機(jī)制的研究結(jié)果，不難發(fā)現(xiàn)，XXXXXXXX ?；谝陨舷盗醒芯炕A(chǔ)與設(shè)想，緊跟國(guó)內(nèi)外在制劑學(xué)方 面的進(jìn)展，我們擬設(shè)計(jì) XXXXXXXXXXX o當(dāng)前，受體調(diào)節(jié)藥物靶向(receptor-mediated drug targeting)作為一種新型的給藥系統(tǒng)受到人們的重視16。

7、XXXXXXXXXXXXXXXXX 。迄今為止，尚未見(jiàn)到 XXXXXXXXXXX o結(jié)合國(guó)內(nèi)外同行的研究報(bào)道與我們的研究基礎(chǔ)，不難推 斷，XXXXXXXXXXXXXXXXX 。綜上所述，我們擬在 XXXXXXXXXX 。本研究將為XXXXXXXX 等提供理論與實(shí)踐基礎(chǔ)。XXXXXXXXXX可以設(shè)想，如能取得預(yù)期效果，經(jīng)過(guò)良好設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)研究后，這一 XXXXXX 應(yīng)用于臨床的時(shí)間不 會(huì)太久，前景廣闊。參 考文獻(xiàn) 1 Friedman SL. Mechanisms of disease Mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic implicati

8、ons. Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2004;1298-105. 2 Chen YW, Li DG , Wu JX, et al. Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells stimulated by transforming growth factor-beta in vitro via up-regulation of Smad 7. J Ethnopharmacol 2005;1003299-305. 3 Breitkopf K, Haas S, Wierci

9、nska E, et al. Anti-TGF-beta strategies for the treatment of chronic liver disease. Alcohol Clin Exp Res 2005;2911 Suppl121S-131s. 4 Dooley S, Hamzavi J, Breitkopf K, et al. Smad7 prevents activation of hepatic stellate cells and liver fibrosis in rats. Gastroenterology 2003;1251178-91.5 Ludbrook SB

10、, Barry ST, Delves CJ, et al. The integrin alphavbeta3 is a receptor for the latency-associated peptides of transforming growth factors beta1 and beta3. Biochem J 2003;369Pt 2311-8.6 Annes JP, Chen Y, Munger JS, et al. Integrin alphaVbeta6-mediated activation of latent TGF-beta requires the latent T

11、GF-beta binding protein-1. J Cell Biol 2004;1655723-34.7 XXXXXXXXXXXXXXXXX. 2項(xiàng)目的研究?jī)?nèi)容、研究目 標(biāo)，以及擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題2.1研究?jī)?nèi)容2.2.1 XXXXX化學(xué)合成與鑒定，二硬脂酸磷酯酰胺XXXXXXXXXX 合成與鑒定。2.2.2 不同類型脂質(zhì)體的制備、技術(shù)參數(shù)優(yōu)化、物理性 質(zhì)鑒定和脂質(zhì)體藥物包封率、載藥量、配體結(jié)合率鑒定與提局。2.2.3 大鼠HSC分離培養(yǎng)，XXXXXXX 修飾脂質(zhì)體與 肝星狀細(xì)胞體外結(jié)合活性研究。2.2.4 XXXXX 修飾 XXXXXXXXX對(duì)肝星狀細(xì)胞活化、增殖、XXXXXXX 信號(hào)通

12、路影響。2.2.5 XXXXXXXXX的藥代動(dòng)力學(xué)特征、 組織分布特征和XXXXXXX 研究。2.2.6 XXXXXXXX 對(duì)膽總管結(jié)扎和 CC14大鼠肝纖維化 防治作用。2.2.7 目標(biāo)2.2.1研究構(gòu)建 XXXXXXXX ,為抗肝纖 維化藥物新劑型開(kāi)發(fā)提供新型靶向載體。2.2.8 研究XXXXXX 對(duì)HSC生物活性影響及機(jī)制，為 中西藥結(jié)合肝纖維化雙靶向、多靶點(diǎn)、協(xié)同治療提供理論基 礎(chǔ)。2.2.9 研究XXXXXXXX 體內(nèi)HSC靶向性及防治實(shí)驗(yàn) 性肝纖維化的有效性，為開(kāi)發(fā)中藥新劑型、提高藥物在靶組 織濃度、降低有效劑量、減輕副作用和提高療效提供實(shí)踐基 礎(chǔ)。2.3擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題 2.3.

13、1高藥物包封率、高配體修 飾率的穩(wěn)定 XXXXXXXX 制備。1 .3.2放射性計(jì)數(shù)法測(cè)定 XXXXXX 與HSC結(jié)合活性，有效抑制HSC活化的劑量、時(shí)間參數(shù)等2 .3.3 XXXXXX 體內(nèi)HSC靶向性、抗肝纖維化效果比 較與評(píng)價(jià)。3擬采取的研究方案及可行性分析 3.1研究方案第一 部分 XXXXX 及 XXXXX 合成1 XXXXXX 合成及鑒定 采用我們研究室建立的方法，化學(xué)合成 XXXXXX o應(yīng)用 XXXXXXXXXX 。合成反應(yīng)圖示如下。高效液相（HPLC）、質(zhì)譜等方法鑒定合成產(chǎn)物純度及分 子量。反應(yīng)圖（略） 2 XXXXXXXXXXX采用一步法合成。XXXXXXXXXXXX 。合

14、成反應(yīng)圖示如下。高效液相（HPLC）和質(zhì)譜分析法進(jìn)物產(chǎn)物純化與鑒定。反應(yīng)圖（略） 第二部分 長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體制備、鑒定與技 術(shù)條件優(yōu)化 1脂質(zhì)體制備采用經(jīng)我們改良的逆相蒸發(fā)法 制備。具體方法如下 XXXXXXXXXX 。3 性質(zhì)鑒定 XXXXXXXXXXXXXXXX 。3均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化處方 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及文獻(xiàn)，確定影響 包封率的主要因素。以包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用二項(xiàng)逐步回歸計(jì)算回歸方程, 并進(jìn)行方差分析，優(yōu)化條件。第三部分XXXXX修飾長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體與 HSC體外結(jié)合 活性 采用兩步膠原酶灌注和密度梯度離心法分離大鼠HSC,選擇靜止態(tài)和激活態(tài)的 HSC,接種于6孔板上細(xì)胞密 度為 5.0105/mL。

15、待貼壁后，1胎牛血清DMEM培養(yǎng)過(guò)夜，細(xì)胞同步化。1配體結(jié)合的濃度-效應(yīng)關(guān)系 XXXXXXXXXXX o2配體結(jié)合的時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系 XXXXXXXXXXXX 。3競(jìng)爭(zhēng)抑制 XXXXXXXXXX 。4細(xì)胞熒光定位、配體表面結(jié)合率與內(nèi)吞率測(cè)定 XXXXXXXXXX 。5平衡解離常數(shù)Kd和細(xì)胞最大結(jié)合位點(diǎn)數(shù)BmaxXXXXXXXXXXX 。第四部分 XXXXXXX 對(duì)HSC生物學(xué)特性影響與機(jī)制 采用酶法分離大鼠 HSC o新鮮分離的HSC,體外培養(yǎng)48 h后，作為靜止期HSC用 于下游實(shí)驗(yàn)，或培養(yǎng)1 w后消化傳代，繼續(xù)培養(yǎng) 24 h后，作 為活化的HSC用于下游實(shí)驗(yàn)。4 XXXXXXX 對(duì)HSC活化

16、狀態(tài)影響 XXXXXXXXX 。2XXXXXX 對(duì) TGF- B 1 效應(yīng)影響 XXXXXXXXXXXX 。3XXXXXXXX 大鼠 HSC TGF- B 受體 XXXXXXX 信號(hào) 通路影響 XXXXXXXXXXXXXX 。第五部分 XXXXXXXXXXXX 1 XXXXXXXX 在肝纖 維化大鼠體內(nèi)的器官分布XXXXXXXXXX 。5 XXXXXXX 大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué) 采用 XXXXXXXX 。3XXXXXXX 在肝纖維化大鼠肝臟內(nèi)分布 采用XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX 。第六部分XXXXXXX 防治大鼠肝纖維化 1造模采用 膽總管結(jié)扎和CC14肝纖維化兩種動(dòng)物模型。2 分

17、組及處理 XXXXXXXXXXXXXX 。3 治療效果檢測(cè) 主要比較以下指標(biāo) XXXXXXXXXXXXXXX 。4 .2技術(shù)路線 技術(shù)路線圖（略）o5 .3可行性分析 3.3.1立項(xiàng)依據(jù)有堅(jiān)實(shí)的理論與實(shí)踐基 礎(chǔ)。本研究是參閱大量文獻(xiàn)并結(jié)合自身以往深厚的肝纖維化 防治研究基礎(chǔ)，特別是結(jié)合近四年國(guó)家自然科學(xué)基金資助研 究成果，在XXXX 化學(xué)合成及功能研究、 低劑量XXX抗肝 纖維化作用和機(jī)制的前期工作基礎(chǔ)上，提生的多途徑、互補(bǔ) 協(xié)同與靶向治療肝纖維化的新探索。掌握了國(guó)內(nèi)外在受體調(diào)節(jié)藥物靶向、低毒性高效中藥新 劑型開(kāi)發(fā)和以 HSC的靶標(biāo)的肝纖維化靶向治療中的最新研 究動(dòng)態(tài)，借鑒 雙靶向”干預(yù)的最新

18、研究成果，并與自身實(shí)踐相結(jié)合，在理論上、實(shí)踐上均有可靠基礎(chǔ)。5.2.2 相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信。本研究使用的實(shí)驗(yàn)方法、動(dòng)物模型和生物分子化學(xué)合成 等多為國(guó)內(nèi)外應(yīng)用多年的經(jīng)典方法，并有自身實(shí)踐基礎(chǔ)。本課題組由掌握以上技術(shù)的成員組成，相關(guān)技術(shù)已應(yīng)用 于科研工作。5.2.3 人員配備合理，具有扎實(shí)的相關(guān)工作基礎(chǔ)和完善 的實(shí)驗(yàn)設(shè)備及技術(shù)支持。申請(qǐng)人長(zhǎng)期從事肝纖維化防治研究，先后承擔(dān)包括國(guó)家自然基金在內(nèi)的各類科研項(xiàng)目15項(xiàng)，指導(dǎo)或協(xié)助指導(dǎo)博士后、博士生及碩士生 70余名。近四年主持了國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“ RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究編號(hào)30170412） ”和入卵泡抑素防

19、治肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究編號(hào)30170411 '的研究工作，項(xiàng)目組主要成員參與并完成以上研究工作。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)指導(dǎo)者、熟練技術(shù)人員及輔助人員等各司其職， 可保障研究有條不紊的進(jìn)行。新華醫(yī)院消化內(nèi)科系上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（原上海第二 醫(yī)科大學(xué)）國(guó)家級(jí)重點(diǎn)學(xué)科和 “211工程重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科的組成 單位之一，長(zhǎng)期從事肝纖維化防治研究，先后承擔(dān)包括國(guó)家 自然科學(xué)基金在內(nèi)的各級(jí)各類科研項(xiàng)目20余項(xiàng)。2005年7月，原上海第二醫(yī)科大學(xué)與原上海交通大學(xué)合并，組建新的上海交通大學(xué)作為上海交通大學(xué)的附屬單位，將在科研究設(shè)備和技術(shù) 上更方便的得到比以往更廣泛的支持。4本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處4.1本課題首次嘗試?yán)肵X

20、XXXXX 構(gòu)建HSC特異性受體調(diào)節(jié)藥物靶向載體。將新型配體人工化學(xué)合成、受體調(diào)節(jié)藥物靶向技術(shù)與新 型脂質(zhì)體載藥技術(shù)三者結(jié)合應(yīng)用于肝纖維化防治，有很強(qiáng)的 原始創(chuàng)新性。4.2本課題首次研究 XXXXX 生物小分子通過(guò) XXXXX 與中藥粉防己堿相聯(lián)合，多途徑、互補(bǔ)與協(xié)同防治肝纖維化。本課題是利用分子機(jī)制指導(dǎo)中西藥聯(lián)合應(yīng)用、構(gòu)建中藥靶向制劑提高療效降低副作用和多途徑協(xié)同作用抗肝纖維 化的全新嘗試，是在總結(jié)自身工作基礎(chǔ)上進(jìn)行的大膽設(shè)想與 創(chuàng)新。5年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果5.1年度研究計(jì)劃略2007.01-2007.052007.06-2008.122008.01-2008.052008.06-20

21、09.10 2008.11-2009.03 2009.04-2009.10 5.2 預(yù)期研究成果5.2.1獲得快速、有效和大量合成 XXXXXXX 和 高藥物包封率、高配體修飾率的穩(wěn)定XXXXXXXX 的技參數(shù)，并合成足量研究相關(guān)產(chǎn)物。5.2.2 體外研究證實(shí) XXXXXXXX 。5.2.3 在體內(nèi)XXXXXXXXX ,有效降低有效劑量、 提高療效和降低副作用5.2.4 研究證實(shí)XXXXXXX可成為抗肝纖維化藥物新劑 型開(kāi)發(fā)的有效載體。（二）研究基礎(chǔ)與工作條件1研究基礎(chǔ)1.1既往肝纖維化防治理論和技術(shù)。自1981年以來(lái)，我們研究室長(zhǎng)期從事肝纖維化防治研究， 先后對(duì)鈣拮抗劑、鈣調(diào)蛋白拮抗劑、大黃

22、素、激活素、腎素 -血管緊張素系統(tǒng)及卵泡抑素等在肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作 用進(jìn)行了系列的研究，積累了較豐富的理論，掌握了相關(guān)研 究技術(shù)。承擔(dān)了包括國(guó)家自然科學(xué)基金在內(nèi)的各類科研項(xiàng)目20多項(xiàng)，先后獲省部級(jí)以上科技進(jìn)步獎(jiǎng)10項(xiàng)。1.2粉防己堿抗肝纖維化研究工作積累。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人率先在我國(guó)開(kāi)展鈣拮抗劑尤其是中藥粉防己 堿對(duì)肝纖維化防治研究，取得豐富的粉防己堿抗肝纖維化基 礎(chǔ)和臨床研究成果，在國(guó)內(nèi)外期刊發(fā)表相關(guān)論文50余篇，獲省部級(jí)以上科技進(jìn)步獎(jiǎng) 5項(xiàng)。近兩年，我們?cè)谏虾Ｊ薪涛痦?xiàng)目粉防己堿影響肝星狀細(xì)胞活化信號(hào)分子研究（編號(hào)02BK14） ”資助下完成了小劑量粉防己堿抗肝纖維化效果與機(jī)制的研究，在國(guó)內(nèi)

23、外首次 報(bào)道小劑量粉防己堿可通過(guò)影響TGF- 3Smads信號(hào)通路抑制HSC活化，相關(guān)研究論文被 SCI收錄收錄號(hào)IDS Number963XN該研究為指導(dǎo)粉防己堿在肝纖維化防治中應(yīng)用有重要價(jià) 值。（參見(jiàn)申請(qǐng)人簡(jiǎn)歷及附件二、三）1.3生物小分子化學(xué)合成及脂質(zhì)體構(gòu)建相關(guān)工 作基礎(chǔ)。近四年來(lái)，申請(qǐng)人承擔(dān)并完成了國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“ RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究（編號(hào)30170412） ”，化學(xué)合成了 RGD-M6P ,分子克隆構(gòu) 建pCI-RGD-Smad7并成功通過(guò)脂質(zhì)體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，通過(guò) 體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察了 RGD-M6P和pCI-RGD-Smad7的生物學(xué)效 應(yīng)。細(xì)胞及

24、動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)均證實(shí)pCI-RGD-Smad7和RGD-M6P可減輕ECM沉積，并影響TGF- B 1 和整合素表達(dá)強(qiáng)度和分布。主要研究工作由本項(xiàng)目組成員參與并完成。目前我們正在利用基金很少量結(jié)余款項(xiàng)進(jìn)行合成RGD-M6P修飾SSL的工作。得益于此，他（她）們分別熟練掌握了生物小分子的化 學(xué)合成相關(guān)技術(shù)（多肽合成、固相化反應(yīng)、納米技術(shù)、高效 分離技術(shù)等）、免疫組織與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、RT-PCR和定量PCR、蛋白印跡、高效液相分析、質(zhì)譜分析、肝纖維化動(dòng)物 模型及生物信息學(xué)方法等與本課題相關(guān)的關(guān)鍵技術(shù)與方法（相關(guān)論文參見(jiàn)申請(qǐng)人簡(jiǎn)歷）由于以上的工作基礎(chǔ)，我們擁有豐富的生物分子合成經(jīng) 驗(yàn)，成熟的生物分子構(gòu)建

25、技術(shù)和良好的人員與設(shè)備支持。已經(jīng)構(gòu)建成功的RGD-M6P及相關(guān)技術(shù)要領(lǐng)，可直接用于 本課題。構(gòu)思本課題的重要原因之一是探討解決簡(jiǎn)單單一藥物治 療中發(fā)現(xiàn)的諸多問(wèn)題而開(kāi)展的，密切相關(guān)的細(xì)胞學(xué)、動(dòng)物學(xué) 實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)也是本實(shí)驗(yàn)成功的重要保證。2工作條件 2.1新華醫(yī)院消化內(nèi)科設(shè)有校屬的上海交 通大學(xué)醫(yī)學(xué)院消化系疾病第三研究室。實(shí)驗(yàn)室擁有本項(xiàng)目研究相關(guān)的大部分生化、細(xì)胞生物學(xué) 及分子生物學(xué)等方面的各種儀器設(shè)備，如倒置顯微鏡攝影設(shè) 備、y計(jì)數(shù)儀、CO2培養(yǎng)箱、酶聯(lián)免疫測(cè)定儀、電轉(zhuǎn)膜儀、 低溫冰箱、低溫超速離心機(jī)及其它分子生物學(xué)設(shè)備等。2.2上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（原上海第二醫(yī)科大學(xué)）附屬新華醫(yī)院科研中心與設(shè)立在新

26、華醫(yī)院的“211工程重點(diǎn)建設(shè)單位上海市兒科醫(yī)學(xué)研究所為本項(xiàng)目開(kāi)展提供了儀器、技術(shù) 支持和信息服務(wù)平臺(tái)。我們可免費(fèi)使用相關(guān)設(shè)備如層流無(wú)菌室、質(zhì)譜儀、高效 液相色譜儀、定量 PCR 儀、NICOMP Particle Sizer Model 3700 分析系統(tǒng)、流式細(xì)胞儀和Flous-S MultiImage圖像分析儀等， 新華醫(yī)院和學(xué)院均有 SPF級(jí)的動(dòng)物飼養(yǎng)條件。3申請(qǐng)人簡(jiǎn)歷 李定國(guó)，男，1946年9月由生。主任醫(yī)師、研究員、教授和博士生導(dǎo)師。1981年和1989年分別獲原上海第二醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)碩士和 醫(yī)學(xué)博士學(xué)位。現(xiàn)任上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院消化系疾病第三研究室主任、 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院

27、消化內(nèi)科主任。兼任上海市內(nèi)科學(xué)會(huì)委員和上海市消化病學(xué)會(huì)委員等職。本項(xiàng)目負(fù)責(zé)人長(zhǎng)期從事肝纖維化防治研究，在抗肝纖維 化中藥篩選與機(jī)制研究、生物小分子合成、脂質(zhì)體藥物傳遞 和基因轉(zhuǎn)染、基因重組及基因治療等方面有豐富研究經(jīng)驗(yàn)。率先在我國(guó)開(kāi)展鈣拮抗劑尤其是中藥粉防己堿對(duì)肝纖維 化防治研究，取得豐富的粉防己堿抗肝纖維化基礎(chǔ)和臨床研 究成果，在國(guó)內(nèi)外期刊發(fā)表相關(guān)論文 50余篇。先后承擔(dān)包括國(guó)家自然基金在內(nèi)的各類科研項(xiàng)目15項(xiàng)，指導(dǎo)或協(xié)助指導(dǎo)博士后、博士生及碩士生70余名，獲省部級(jí)以上科技進(jìn)步獎(jiǎng)10項(xiàng)。近四年主持了國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“ RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究編號(hào)30170412

28、） ”和入卵泡抑素防治肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究編號(hào)30170411 '的肝纖維化防治研究工作（以上 2項(xiàng)目均已經(jīng)順利結(jié)題），指導(dǎo) 完成上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目 “Smad百口 uPA雙基因共表達(dá)對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的影響編號(hào)03ZR1405O和上海市教委基金項(xiàng)目 粉防己堿影響肝星狀細(xì)胞活化信號(hào)分子研究（編號(hào)02BK14）近五年發(fā)表的與本課題相關(guān)論文（第一作者或通訊作者），其中一篇與本課題設(shè)計(jì)密切相關(guān)的重要論著2005年發(fā)表于 SCI 索引源期刊 “Journal of Ethnopharmacology 并被 SCI 收錄（收錄號(hào) IDS Number 963XN ）（見(jiàn)附件二、三）1李定國(guó)，陳穎

29、偉。肝纖維化研究現(xiàn)狀及展望。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2005; 252101-6。（述評(píng)）2 Chen YW, Li DG, Wu JX, Chen YW, Lu HM.Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells stimulated by transforming growth factor-beta in vitro via up-regulation of Smad 7. J Ethnopharmacol 2005 ; 1003299-305. （論著 SCI 收錄號(hào) IDS Number 963XN ） 3 C

30、hen YW, Wu JX,Chen YW, Li DG, Lu HM. Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells in vitro via transforming growth factor-beta signaling. World J Gastroenterol 2005 ; 11192922-6.（論著） 4 陳源文，李定國(guó)，吳建新，陳穎偉，陸漢明。粉防己堿對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。中華肝臟病雜志 2005 ; 138609-10 o（論著）5陳源文，李定國(guó)，吳建新，陳穎偉，陸漢明粉防己堿上調(diào)

31、Smad7表達(dá)抑制大鼠肝星狀細(xì)胞活化。中國(guó)藥理學(xué)通報(bào) 2005; 215563-7。（論著）6王志榮，陳錫美，李定國(guó)，魏紅山，黃新，展 玉濤，汪余勤，陸漢明。粉防己堿抑制肝纖維化大鼠肝組織c-fos和c-jun mRNA表達(dá)。上海醫(yī)學(xué) 2003; 265332-6。（論著）7王志榮，李定國(guó)，陳錫美，魏紅山，黃新，展 玉濤，徐芹芳，陸漢明。聯(lián)合應(yīng)用粉防己堿與甘草酸抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究。中華消化雜志 2003 ; 237435-6。（論著）8王連升,陳穎偉，張建華，李定國(guó)，陸漢明。RGD-M6P對(duì)原代肝星狀細(xì)胞的影響。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2005 ; 252112-5。（論著）9杜學(xué)亮，陳穎偉，王

32、連升,徐芹芳，李定國(guó), 吳真。人工合成 RGD小肽對(duì)肝星狀細(xì)胞付泌細(xì)胞外基質(zhì)的影 響。放射免疫學(xué)雜志 2004 ; 176433-5。（論著）10程計(jì)林，周欣，高志剛，霍玉青，徐芹芳，李 定國(guó)。外源性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 B與小鼠月f細(xì)胞Smad7 mRNA及蛋白表達(dá)的關(guān)系。中華醫(yī)學(xué)雜志 2002 ; 822111-3。（論著）11陳源文，吳建新，李定國(guó)，陸漢明。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-B與轉(zhuǎn)基因治療肝纖維化。中華消化雜志 2002; 2210621-3。（綜述）12程計(jì)林，周欣，李定國(guó)，魏紅山，黃新，王志 榮，展玉濤，張晶，徐芹芳，陸漢明。RGDS肽對(duì)TGFB刺激肝星狀細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影 響。臨床肝膽病雜

33、志 2001; 173173-5。（論著）13 Wei FS, Li DG , Lu HM, Zhan YT, Wang ZR,Hang X, Xu QF. The role of enalapril in pathogenesis of CCL4 induced hepatic fibrosis. Journal of Shanghai Second Medical University 2001; 13119-23.（論著）14 程計(jì)林，周欣，李定國(guó)，黃新，魏紅山，徐芹芳。精-甘-天冬-絲氨酸肽對(duì)肝纖維化鼠血清田型膠原水平的 影響。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2001; 213210-2 o（論著

34、）15陳穎偉，李定國(guó)。Smad7和組織器官纖維化。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2005 ; 252132-3。（論著）16陳穎偉，陳源文，王連升,李定國(guó)。Smad7基因過(guò)表達(dá)對(duì)L02肝細(xì)胞株增殖的影響。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2005 ; 252103-6。（論著）17陳穎偉，陳源文，尤漢寧，李定國(guó)。外源Smad7基因?qū)υ涡菭罴?xì)胞活性和基因表達(dá)調(diào) 控的影響。中華消化雜志 2005; 257409-12。（論著）18汪余勤，李定國(guó)，吳建新，宗春華，董國(guó)芳， 瞿春瑩，陸漢明。血管緊張素n對(duì)肝星狀細(xì)胞表達(dá)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子BI、n型受體及其功能的影響。中華消化雜志 2005 ; 257434-5。（論著）19 Z

35、hou X, Li D, Li X, Lu H, Zhang W. Acombination of Ang II and carbon tetrachloride accelerates process of hepatic fibrosis. Chin Med J 2003 ; 116162-5.（論著） 20陳穎偉，衛(wèi)新革，展玉濤，張文竹，徐芹芳，李定國(guó)。大黃與粉防己堿抗實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的對(duì)照研究。中華消化雜志 2003 ; 238476-9。（論著）在本課題中負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)、組織實(shí)施、質(zhì)量控制、數(shù)據(jù)收集整理和統(tǒng)計(jì)分析等。陳源文，男，1976年8月由生，博士。2000年畢業(yè)于江西醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)

36、系，獲學(xué)士學(xué)位，同年考入原上海第二醫(yī)科大學(xué)，2005年獲內(nèi)科學(xué)博士學(xué)位。主要從事肝損傷機(jī)制及肝纖維化防治研究。在中藥（粉防己堿、氧化苦參堿）抗肝纖維化作用、細(xì) 胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)染與基因重組和干細(xì)胞研究方面有較豐 富的理論基礎(chǔ)與研究經(jīng)歷。作為項(xiàng)目負(fù)責(zé)人完成?；痦?xiàng)目氧化苦參堿對(duì) TGF- B信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響及機(jī)制（編號(hào)BXJ0215） ”研究工作，負(fù)責(zé)完成上海市教委基金項(xiàng)目粉防己堿影響肝星狀細(xì)胞活化信號(hào)分子研究（編號(hào)02BK14） ”，并參與國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng) 目“RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究 編號(hào)30170412） ”的細(xì)胞學(xué)部分的研究工作。2005年申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金

37、項(xiàng)目 “IL10或uPA基因 修飾骨髓源性肝干細(xì)胞移植防治肝纖維化的比較研究”獲資助（編號(hào) 30500236）。近期發(fā)表的與本課題相關(guān)論文如下1陳源文，吳建新，李定國(guó)，陸漢明。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-B與轉(zhuǎn)基因治療肝纖維化。中華消化雜志 2002; 2210621-3 o（綜述）2 Chen YW, Li DG, Wu JX, Chen YW, Lu HM.Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells stimulated by transforming growth factor-beta in vitro via up-r

38、egulation of Smad 7. J Ethnopharmacol 2005 ; 1003299-305.（論著）3 Chen YW, Wu JX, Chen YW, Li DG, Lu HM.Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells in vitro via transforming growth factor-beta signaling. World J Gastroenterol 2005; 11192922-6.（論著）4 陳源文，李定國(guó)， 吳建新，陳穎偉，陸漢明。粉防己堿對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞跨膜信

39、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。中華肝臟病雜志 2005 ; 138609-10 o（論著）5陳源文，李定國(guó)，吳建新，陳穎偉，陸漢明。 粉防己堿上調(diào)Smad7表達(dá)抑制大鼠肝星狀細(xì)胞活化。中國(guó)藥理學(xué)通報(bào) 2005; 215563-7 o（論著）6陳穎偉，陳源文，王連升,李定國(guó)。Smad7基因過(guò)表達(dá)對(duì)L02肝細(xì)胞株增殖的影響。 上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2005 ; 252103-6。（論著）7陳穎偉，陳源文，尤漢寧，李定國(guó)。外源Smad7基因?qū)υ涡菭罴?xì)胞活性和基因表達(dá)調(diào)控 的影響。中華消化雜志 2005 ; 257409-412。（論著）在本課題中負(fù)責(zé) HSC分離培養(yǎng)及細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)（主要是配體修飾脂質(zhì)體對(duì)HSC生物學(xué)

40、特性影響等）研究工作。劉清華，女，1971年2月由生。副主任醫(yī)師，副教授。1996年和2003年分別獲上海第二醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)碩士學(xué) 位、醫(yī)學(xué)博士學(xué)位。主要研究方向?yàn)楦螕p傷機(jī)制及肝纖維化防治。在肝纖維化性別差異細(xì)胞分子機(jī)制、生物小分子抗肝星 狀細(xì)胞功能研究等領(lǐng)域有較豐富的研究經(jīng)歷。作為課題負(fù)責(zé)人承擔(dān)院級(jí)基金項(xiàng)目雌激素防治肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究 工參與上海市教委基金項(xiàng)目粉防己堿影響肝星狀細(xì)胞活化信號(hào)分子研究（編號(hào)02BK14） ”以及國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因 的功能研究（編號(hào) 30170412） ”細(xì)胞學(xué)研究工作。近期發(fā)表與本課題相關(guān)的論文有1劉清華，李定國(guó)，黃新，

41、尤漢寧，潘勤，徐雷鳴，徐芹芳，陸漢明。激活素A對(duì)肝星狀細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響。世界華人消化雜志2003; 116 745-8。（論著）2劉清華，李定國(guó)，宗春華，黃新，徐芹芳，陸 漢明。17為雌二醇及代謝產(chǎn)物對(duì)大鼠 HSC功能的影響。中華消化雜志 2004; 245 165-9。（論著） 3 Qing-Hua Liu, Ding-Guo Li, Xin Huang, Chun-Hua Zong, Qin-Fang Xu, Han-Ming Lu. Suppressive effects of 17 -estradiol on hepatic fibrosis in CCl4-induced r

42、at model. World J Gastroenterol 2004; 109 1315-20.（論著）4 劉 清華，李定國(guó)，宗春華，黃新，徐芹芳，陸漢明。雌激素對(duì)雄性大鼠肝纖維化形成的影響。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2005; 251 39-42。（論著）在本課題中參與細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)（主要是配體修飾 脂質(zhì)體對(duì)HSC生物學(xué)特性影響等）研究工作。蘭玲，女，1976年11月由生。碩士。2000年畢業(yè)于河南醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系，獲醫(yī)學(xué)學(xué)士學(xué) 位，2003年畢業(yè)于鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院，獲醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位，碩士 期間主要從事食管癌高發(fā)區(qū)人群食管癌變機(jī)制和防治研究?，F(xiàn)在上海第二醫(yī)科大學(xué)攻讀博士學(xué)位，從事干細(xì)胞研究 工作。近

43、期發(fā)表論文4篇。在本課題中參與受體調(diào)節(jié)載藥脂質(zhì)體構(gòu)建與細(xì)胞學(xué)功 能分析。陳穎偉，女，1974年2月由生。博士，主治醫(yī)師。1999年和2004分別獲原上海第二醫(yī)科大學(xué)獲醫(yī)學(xué)碩士和 醫(yī)學(xué)博士學(xué)位。主要從事肝纖維化防治研究。在中藥（大黃素、粉防己堿）抗肝纖維化機(jī)制、HSC細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、生物小分子化學(xué)合成、純化與鑒定和重組腺病毒構(gòu)建與基因轉(zhuǎn)染等方面有較豐富的理論與研究經(jīng)驗(yàn)積累。在攻讀碩士學(xué)位期間參與大黃素抗肝纖維化作用研究”、“ PDGF在肝纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用研究”等課題研究。攻讀博士學(xué)位及工作期間參與上海市科學(xué)技術(shù)發(fā)展基金 課題 肝星狀細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)新的調(diào)控分子”的研究工作，負(fù)責(zé)完成國(guó)家自然科

44、學(xué)基金“RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究編號(hào)30170412'的關(guān)鍵部分工作，作為項(xiàng)目負(fù)責(zé)人承擔(dān)上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目“Smad7和uPA雙基因共表達(dá)對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的影響編號(hào) 03ZR14050 ”（該項(xiàng)目已經(jīng)順利結(jié)題）。近期發(fā)表的與本課題相關(guān)論文1陳穎偉，衛(wèi)新革，展玉濤，張文竹，徐芹芳，李定國(guó)。大黃與粉防已堿抗實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的對(duì)照研究。中華消化雜志 2003 ; 238476-9。（論著）2陳穎偉，展玉濤，李定國(guó)。單味生大黃對(duì)肝纖維化的影響。中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志 2004 ; 246110-3。（論著）3陳穎偉，胡良凱，陳源文，李定國(guó)。新型Smad7重組腺病毒載體的

45、構(gòu)建。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2004 ; 246417-20。（論著）4陳穎偉，陳源文，尤漢寧，李定國(guó)。外源Smad7基因?qū)υ涡菭罴?xì)胞活性和基因表達(dá)調(diào)控的影響。中華消化雜志 2005; 257409-12。（論著）5陳穎偉，陳源文，王連升,李定國(guó)。Smad7基因過(guò)表達(dá)對(duì)L02肝細(xì)胞株增殖的影響。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2005 ; 252103-6。（論著）6王連升,陳穎偉，張建華，李定國(guó)，陸漢明。RGD-M6P對(duì)原代肝星狀細(xì)胞的影響。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2005 ; 252112-5。（論著）7杜學(xué)亮，陳穎偉，王連升,徐芹芳，李定國(guó), 吳真。人工合成 RGD小肽對(duì)肝星狀細(xì)胞付泌細(xì)胞外基質(zhì)的

46、影 響。放射免疫學(xué)雜志 2004 ; 176433-5。（論著） 在本課題中主要負(fù)責(zé) RGD-M6P及相關(guān)分子合 成、受體調(diào)節(jié)載藥脂質(zhì)體的體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)。王連升，男，1976年8月由生。碩士。2001年畢業(yè)山東醫(yī)科大學(xué)，獲學(xué)士學(xué)位，同年考入原上海第二醫(yī)科大學(xué)，2004年獲碩士學(xué)位。主要從事抗肝纖維化生物小分子化學(xué)合成、純化鑒定和 功能研究。在小肽合成分離與質(zhì)譜分析、糖肽合成、純化、質(zhì)譜與高效液相分析和載藥配體調(diào)節(jié)脂質(zhì)體等方面有較豐富的理 論基礎(chǔ)與研究經(jīng)歷。主要參與了國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“ RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究編號(hào)30170412） ”的RGD相關(guān)綴合分子化學(xué)合成與體

47、內(nèi)、體外功能研究部分工 作。近期發(fā)表的與本課題相關(guān)論文1王連升,李定國(guó)。TGFB及Smad與肝纖維化。國(guó)外醫(yī)學(xué) 消化系疾病分冊(cè)，2003; 23 （4） 222-5。（綜述）2王連升,陳穎偉，張建華，李定國(guó)，陸漢明。RGD-M6P對(duì)原代肝星狀細(xì)胞的影響。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2005 ; 252112-5。（論著）待發(fā)表論著 1 Wang LS, Chen YW, Li DG, LuHM. RGD-M6P Inhibits the activation and proliferation of hepatic stellate cells in vitro. World J Gastroente

48、rol 2006 in press, Ms. NoWjg/2005/002566 在本課題中主要負(fù)責(zé) RGD-M6P及相關(guān)綴合分子合成、純化、質(zhì)譜與高效液相分 析，以及受體調(diào)節(jié)載藥脂質(zhì)體構(gòu)建和物理性質(zhì)檢測(cè)。孫巧玲，女，1976年9月由生。碩士。2000年畢業(yè)于大連醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系，獲學(xué)士學(xué)位， 2003年畢業(yè)于大連醫(yī)科大學(xué)， 獲醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位，碩士期間主 要從事基質(zhì)金屬蛋白酶在食管癌中表達(dá)的研究?，F(xiàn)在上海第二醫(yī)科大學(xué)攻讀博士學(xué)位。近期發(fā)表論文1篇。在本課題中負(fù)責(zé)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與分子生物學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。丁小東，男，1977年7月由生，2000年畢業(yè)于白求恩 醫(yī)科大學(xué)（現(xiàn)吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部）臨床醫(yī)療系，獲

49、醫(yī)學(xué) 學(xué)士學(xué)位。2003年畢業(yè)于復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院內(nèi)科學(xué)專業(yè)，獲臨床 醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位。一直從事慢性肝病，尤其是脂肪性肝病的研究工作，在 肝損傷動(dòng)物模型制作及藥物防治研究方面的較豐富的研究 經(jīng)歷。20002003年參加上海市科技啟明星計(jì)劃課題微血栓在非酒精性脂肪性肝炎發(fā)病中作用”的研究，發(fā)表學(xué)術(shù)論文和專著17篇。近期發(fā)表的與本課題相關(guān)的論文有1 丁曉東，范建高,王國(guó)良，徐正婕，鄭曉英，田麗艷。二甲雙服干預(yù)大鼠非酒精性脂肪性肝炎的療效觀察；肝 臟 2005; 10;379-81。2 丁曉東，范建高，徐正婕，鄭曉英，田麗艷，王國(guó)良。高脂飲食性脂肪性肝炎大鼠肝臟線粒體損傷和ATP儲(chǔ)備改變。世界華人消化雜

50、志 2005; 13131524-8。3范建高、丁曉東、王國(guó)良、徐正婕、鄭曉英、田麗艷。非酒精性脂肪性肝病大鼠肝臟UCP2表達(dá)及其與能量貯備的關(guān)系；中華肝臟病雜志 2005; 135374-7。4范建高、丁曉東、王國(guó)良、徐正婕、鄭曉英、田麗艷。高脂飲食性非酒精性脂肪性肝病大鼠肝臟PPAR-俵達(dá)增強(qiáng)。肝臟 2004; 94225-8。在本課題中負(fù)責(zé)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)（藥代動(dòng)力學(xué)、造模）與分 子生物學(xué)檢測(cè)。張毅，男，1978年11月由生。碩士。2004年畢業(yè)于上海第二醫(yī)科大學(xué)，獲醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位?，F(xiàn)為上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬新華醫(yī)院消化內(nèi)科醫(yī)師，從 事臨床與肝纖維化防治科研工作。發(fā)表論文1篇。在本課題中負(fù)責(zé)動(dòng)物實(shí)

51、驗(yàn)及病理檢測(cè)。徐琴芳，女，1954年2月由生。主管技師，為消化實(shí)驗(yàn)室專職技術(shù)員，從事細(xì)胞、分子 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)工作十余年。在本課題中負(fù)責(zé)生化、病理檢測(cè)。4承擔(dān)科研項(xiàng)目情況 目前在研項(xiàng)目名稱 IL-10或uPA基因修飾骨髓源性肝干細(xì)胞移植防治肝纖維化的比較研究, 編號(hào)30500236,由國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)資助。計(jì)劃2006年1月起至2008年12月止，經(jīng)費(fèi)25.0萬(wàn)元。項(xiàng)目組主要成員陳源文為項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，陳穎偉、張毅等參與部分工作，包括uPA腺病毒感染骨髓源性肝干細(xì)胞效率、 轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞生物學(xué)特性變化的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和轉(zhuǎn)uPA基因干細(xì)胞移植的肝纖維化防治作用的部分動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)等。本項(xiàng)目得益于一定的前

52、期工作基礎(chǔ)和自申請(qǐng)初即開(kāi)始相 關(guān)研究，目前項(xiàng)目進(jìn)展順利，已經(jīng)完成病毒構(gòu)建、uPA腺病毒感染骨髓源性肝干細(xì)胞效率、實(shí)現(xiàn)外源基因在干細(xì)胞中表 達(dá)，正在準(zhǔn)備進(jìn)行轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞移植的動(dòng)物學(xué)研究。5完成自然科學(xué)基金項(xiàng)目情況國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目RGD修飾細(xì)胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究（編號(hào)30170412 ,起止年月 2002年1月-2004年12月）。項(xiàng)目已于2004年12月順利完成和結(jié)題。通過(guò)該項(xiàng)目研究工作，采用化學(xué)法合成了新型生物分子RGD-M6P ,并研究了其抗肝纖維化功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝硬化時(shí)存在 TGF- B、整合素、Smad7信號(hào)分 子分布和功能異常，RGD-M6P可影響TGF- B和整

53、合素表達(dá) 強(qiáng)度和分布，減輕 ECM沉積。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)還 RGD-M6P抗肝纖維化作用優(yōu)于 RGD、 M6P或RGD與M6P簡(jiǎn)單混合，提示RGD-M6P存在良好的靶向性。在此工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步進(jìn)行了干預(yù)TGF-芹Smad7信號(hào) 通路抗肝纖維化的研究成功構(gòu)建攜外源Smad7基因腺病毒、Smad7與uPA共表達(dá)腺病毒，并進(jìn)行了肝纖維化轉(zhuǎn)基因 治療研究；研究了小劑量粉防己堿抗HSC活化與 TGF- 3Smad7信號(hào)通路關(guān)系；目前嘗試開(kāi)展利用 RGD-M6P小分子實(shí)現(xiàn)HSC靶向和與其它藥物協(xié)同多途徑抗 HSC活化和功能的研究。基與以上國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目研究基礎(chǔ)和系列相關(guān) 后續(xù)研究，在提高藥物靶向性、多

54、靶點(diǎn)協(xié)同作用思想指導(dǎo)下， 設(shè)計(jì)了 RGD-M6P小分子介導(dǎo)粉防己堿脂質(zhì)體抗肝纖維化的 研究工作。本研究是建立在以往研究基礎(chǔ)上的又一大膽探索與嘗 試。由于以上的工作基礎(chǔ)，我們擁有豐富的生物分子化學(xué)經(jīng) 驗(yàn)，成熟的分子生物學(xué)技術(shù)、較好的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體構(gòu)建技術(shù) 基礎(chǔ)和良好的人員與設(shè)備支持。已經(jīng)構(gòu)建成功的 RGD-M6P已經(jīng)經(jīng)過(guò)功能檢測(cè)，可直接用 于本課題。密切相關(guān)的細(xì)胞學(xué)、動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)也是本實(shí)驗(yàn)成功的 重要保證。（相關(guān)內(nèi)容參見(jiàn)申請(qǐng)人簡(jiǎn)歷和該項(xiàng)目研究工作總結(jié)摘要） 附該項(xiàng)目研究工作總結(jié)摘要和相關(guān)成果的目錄搞要目的研究RGD經(jīng)M6P修飾或綴合 Smad7基因?qū)SC生物 功能和實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的影響。方法化學(xué)合成 RGD-M6P ;分子克隆構(gòu)建 pCI-RGD-Smad7 ;通過(guò)體 內(nèi)外實(shí) 驗(yàn)觀察 RGD-M6P 和 pCI-RGD-Smad7的生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)果