P27蛋白在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)

1、P27蛋白在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá) 作者：毛榮軍，李啟明，房慧琳，王桂芳 【摘要】 目的 探討P27蛋白表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。方法 采用SP法免疫組化分別檢測宮頸鱗狀細(xì)胞癌、癌旁高級別鱗狀上皮病變、癌旁正常鱗狀上皮及非癌旁正常鱗狀上皮組織中P27蛋白的表達(dá)。結(jié)果 宮頸鱗狀細(xì)胞癌、癌旁高級別鱗狀上皮病變、癌旁正常鱗狀上皮及非癌旁正常鱗狀上皮組織中P27陽性表達(dá)率分別為35.00%(21/60)、38.89%（14/36）、77.78%(42/54)、80.00%(8/10)，其中宮頸鱗狀細(xì)胞癌及癌旁高級別鱗狀上皮病變P27陽性表達(dá)率與癌旁及非癌旁正常宮頸鱗狀上皮相比差異均有顯著性

2、(P<0.05或0.01)。P27陽性表達(dá)率下降與組織學(xué)分級、腫瘤大小、腫瘤浸潤及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.01)，與年齡無關(guān)（P>0.05）。結(jié)論 P27在宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要的作用，體現(xiàn)在P27蛋白表達(dá)降低或缺失時易導(dǎo)致宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，因此檢測P27蛋白表達(dá)可作為宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后評估的一個有用指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】 宮頸腫瘤；癌，鱗狀細(xì)胞；P27蛋白Abstract: Objective To investigate the relationship between the expression of P27

3、 protein and the oncogenesis and development of cervical squamous carcinoma (CSC). Methods The expression of P27 was detected by using SP immunohistochemical staining in paraffin sections from cases of CSC, high-grade squamous intraepithelial lesion (HSIL) and corresponding normal squamous tissues (

4、CNST) closely adjacent to carcinoma, and other normal squamous tissues (ONST). Results The positive rates of P27 protein expression in SCS, HSIL, CNST and ONST were 35% (21/60), 38.89% (14/36), 77.78% (42/54) and 80% (8/10), respectively. The comparison of positive rates among SCS, HSIL and CNST, ON

5、ST showed significant differences (P<0.05 or 0.01). The decreased expression of P27 protein was associated with histologic grading, tumor size, invasion and metastasis of SCS (all P<0.01), and it was not associated with age (P>0.05). Conclusion P27 protein might play an importan

6、t suppressing role in the genesis and development of CSC, the down-regulated expression of CSC might easily lead to lymphnode metastasis and tumorous invasion, expression of P27 could be helpful in predictin the biological behavior and prognosis of CSC.Key words: cervical neoplasms; carcinoma, squam

7、ous cell; P27 protein 宮頸鱗狀細(xì)胞癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一，多種因素長期的共同作用促進(jìn)了宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生與發(fā)展，在此過程中涉及多基因、多分子水平的改變，其中包括癌基因的激活和抑癌基因的失活，導(dǎo)致了細(xì)胞無限制地生長，從而引起腫瘤的發(fā)生。在細(xì)胞生長過程中，對G1期的調(diào)控是細(xì)胞周期的關(guān)鍵調(diào)控點(diǎn)。P27是細(xì)胞周期G1 期重要的負(fù)向調(diào)控因子，是近年來發(fā)現(xiàn)被認(rèn)為是一種新的候選抑癌基因。目前，它在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的研究較少，尚無深入研究的文獻(xiàn)報道?；诖耍覀儾捎妹庖呓M化法檢測了宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織及其癌旁高級別鱗狀上皮病變、癌旁正常宮頸鱗狀上皮、非癌旁正常鱗狀上皮中的P27

8、蛋白，以期為研究宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展和評估預(yù)后提供新的理論依據(jù)。1 材料與方法1.1 組織標(biāo)本及處理方法材料選用本院、順德桂洲醫(yī)院及廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心2001年1月2007年1月手術(shù)切除送檢的60例宮頸鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本，其中36例帶有癌旁高級別鱗狀上皮病變，54例帶有癌旁正常鱗狀上皮。60例患者中，年齡2968歲，平均45歲，所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實為宮頸鱗狀細(xì)胞癌，術(shù)前均未作放療和化療處理。另取10例非癌旁正常宮頸組織的鱗狀上皮標(biāo)本作為對照組。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林液固定、取材、常規(guī)脫水、透明和包埋，連續(xù)切片，厚度為5m。組織切片置于預(yù)先涂有多聚賴氨酸的載玻片烤干備用。1.2 免疫

9、組化學(xué)染色法采用鏈菌素親生物素過氧化物酶法(SP法，按說明進(jìn)行操作)，以北京中杉公司提供的已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作為空白對照。1.3 結(jié)果判斷免疫組化染色片，隨機(jī)選擇10個高倍視野，計數(shù)1000個腫瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞百分率，細(xì)胞核和(或)胞漿內(nèi)有棕黃或黃色染色顆粒者為P27蛋白陽性細(xì)胞。無棕色或黃色染色顆粒者為P27陰性細(xì)胞。陽性細(xì)胞>10%定為陽性片，<10%為陰性片。1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用2檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。2 結(jié)果2.1 P27蛋白在非癌旁正常宮頸鱗狀上皮、癌旁正常鱗狀上皮、癌旁高級別鱗狀上皮病變及宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá) 宮頸鱗狀細(xì)胞癌中

10、P27陽性表達(dá)率低于癌旁及非癌旁正常(P<0.05或0.01)，而與癌旁高級別鱗狀上皮病變比較差異無顯著性（P>0.05）；癌旁高級別鱗狀上皮病變P27蛋白陽性表達(dá)率與癌旁及非癌旁正常宮頸鱗狀上皮差異有顯著性(P<0.05或0.01)，見表1。表1 各類宮頸鱗狀上皮病變中P27蛋白的表達(dá)鱗狀上皮病nP27陰性陽性陽性率、（略）2.2 P27蛋白表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理因素的關(guān)系 60例宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者中，年齡45歲與>45歲P27蛋白陽性表達(dá)率比較差異無顯著性（P>0.05）；腫瘤直徑3cm與>3cm P

11、27蛋白陽性表達(dá)率比較差異有高度顯著性(P<0.01)；無宮頸外組織浸潤與有宮頸外浸潤P27蛋白陽性表達(dá)率比較差異有高度顯著性(P<0.01)；在病理組織分級中，宮頸鱗狀細(xì)胞癌級與級、級P27蛋白陽性表達(dá)率比較差異有高度顯著性(P<0.01)；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移P27蛋白陽性表達(dá)率比較差異有高度顯著性(P<0.01)，見表2。表2 宮頸鱗狀細(xì)胞癌的臨床病理因素與P27蛋白的表達(dá)項目nP27陰性陽性陽性率（略）3 討論 Polyak等1在1994年最先發(fā)現(xiàn)了P27，它是一個分子量為27kDa的熱穩(wěn)定蛋白質(zhì)，人的P27-cDNA，長約

12、594bp ，編碼198個氨基酸的蛋白質(zhì)，其主要功能是作為CDK抑制因子參與細(xì)胞周期的調(diào)控，對細(xì)胞周期的調(diào)控要作用在G1/S期，對靶分子的作用發(fā)生于細(xì)胞核內(nèi)。P27在胞漿內(nèi)的異常定位可導(dǎo)致P27失活及降解增加2。由于P27在細(xì)胞周期中起負(fù)性調(diào)控因子的作用，因此被認(rèn)為是一種抑癌基因，具有抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的特性。但是，有關(guān)P27在人類腫瘤的大量研究中卻發(fā)現(xiàn)P27基因的缺失、突變與重排在人類腫瘤細(xì)胞中是罕見現(xiàn)象，P27蛋白水平的調(diào)節(jié)主要發(fā)生于轉(zhuǎn)錄后的翻譯和降解過程3，其與腫瘤的關(guān)系主要體現(xiàn)在其蛋白水平及活性上。有些研究發(fā)現(xiàn)46，P27蛋白在皮膚黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌的表達(dá)水平是反映腫瘤侵襲性的標(biāo)

13、志，其表達(dá)的減少與預(yù)后不良關(guān)系密切，但尚有研究報道7，在膀胱尿路上皮癌中隨著組織學(xué)分級的增加，P27蛋白表達(dá)明顯增高。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，P27在非癌旁及癌旁正常宮頸鱗狀上皮中的陽性表達(dá)率分別為80.00%(8/10)及77.78%(42/54)，而在癌旁高級別鱗狀上皮病變及鱗狀細(xì)胞癌組織中P27蛋白陽性表達(dá)率為38.89%(14/36)及35.00%(21/60)，宮頸鱗狀細(xì)胞癌中P27陽性表達(dá)率明顯低于癌旁及非癌旁正常宮頸鱗狀上皮組織，差異具有顯著性(P<0.05或0.01)，而與癌旁高級別鱗狀上皮病變比較，差異無顯著性（P>0.05）。癌旁高級別鱗狀上皮病變P27

14、蛋白陽性表達(dá)率與癌旁及非癌旁正常宮頸鱗狀上皮差異亦有顯著性（P<0.05或0.01），顯示了P27蛋白表達(dá)水平的下降與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，提示P27在宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生中起重要作用。由此可推出，P27蛋白的表達(dá)越少，P27蛋白功能越受到抑制，由此可能破壞其負(fù)調(diào)控細(xì)胞周期的功能，導(dǎo)致細(xì)胞周期失調(diào)，S期細(xì)胞增多，DNA合成相應(yīng)增多，從而細(xì)胞過度增生，阻止細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖和腫瘤形成。 本實驗還發(fā)現(xiàn)，P27蛋白表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤大小、臨床病理分級、宮頸外浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)（P均<0.01），而與年齡無關(guān)（P>0.05），提示

15、P27蛋白表達(dá)降低的宮頸鱗狀細(xì)胞癌更易使腫瘤快速生長及發(fā)生宮頸外浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此可認(rèn)為，P27高表達(dá)是宮頸鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后良好的一個獨(dú)立指標(biāo)，其原因可能為P27的低表達(dá)，對G1/S期轉(zhuǎn)換的抑制作用減弱，使細(xì)胞更易進(jìn)入S期；低水平的P27使G0期細(xì)胞恢復(fù)進(jìn)入細(xì)胞周期；P27表達(dá)能影響細(xì)胞間接觸，下調(diào)P27能抑制細(xì)胞粘附從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散。 綜上所述，P27蛋白與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系，可成為一個預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)的指標(biāo)。P27基因的發(fā)現(xiàn)為研究腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、診斷治療及預(yù)后評估等提供了一個新的熱點(diǎn)，但是P27的作用機(jī)理尚未徹底清楚。因此，深入研究P27基因?qū)m頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生機(jī)

16、制、發(fā)展過程及其防治都具有重要意義。【參考文獻(xiàn)】 Polyak K, Lee MH, Erdjument-Bromage H,et al. Cloning of P27,a cyclin-dependent kinase inhibitor and a protential mediator of extracellular autimitogenic signals J.Cell,1994,78:59-66.Liang J, Zubovitz J, Petrocelli T, et al. PKBP Akt phosphorylates P27, impairs nuclear import

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