卷D201304輸血科技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、文件編號(hào)：CQJY/CBT/SOP A/0重慶市第九人民醫(yī)院用血質(zhì)量管理體系技術(shù)性操作規(guī)程（依據(jù)GB/T19001-2008idt ISO 9001：2008編制）編 制 人： 艾 萬 輝 審 核 人： 徐 育 云 批 準(zhǔn) 人： 發(fā)布日期：2013年4月30日實(shí)施日期：2013年4月30日目 錄CBT-SOP-01-2013試管法鑒定ABO血型標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程3CBT-SOP-02-2013試管法鑒定RhD血型標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程7CBT-SOP-03-2013微柱凝膠卡式法鑒定ABO正反血型及RhD血型標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程9CBT-SOP-04-2013鹽水法交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程13CBT-SOP-05-2

2、013凝聚胺交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程15CBT-SOP-06-2013微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程17CBT-SOP-07-2013新生兒溶血?。℉DN）血型血清學(xué)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程20CBT-SOP-08-2013紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程24CBT-SOP-09-2013孕婦血清中紅細(xì)胞血型抗體效價(jià)測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程27CBT-SOP-10-2013輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程29CBT-SOP-11-2013輸血科室間質(zhì)評(píng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程32CBT-SOP-12-2013輸血科試劑質(zhì)量管理操作規(guī)程35CBT-SOP-13-2013輸血科配制自備試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程40CBT-

3、SOP-14-2013重慶市第九人民醫(yī)院臨床輸血操作規(guī)程43CBT-SOP-15-2013細(xì)胞洗滌離心機(jī)（XTL4.7型）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程46CBT-SOP-16-2013臺(tái)式低速離心機(jī)（XKA-2200型）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程48CBT-SOP-17-2013SANYO的MBR-304DR型冰箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程51CBT-SOP-18-2013XL-200臥式血液速凍箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程53CBT-SOP-19-2013DiaMed-ID-Incubator 37 S型孵育器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程55CBT-SOP-20-2013ID-Centrifuge 12 S卡式離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程56CBT-SOP-21-2013X

4、J-8血液解凍機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程57CBT-SOP-22-2013Haier的HXC-358型血庫專用血液儲(chǔ)存冰箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程58CBT-SOP-23-2013FYQ型免疫微柱孵育器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程60CBT-SOP-24-2013TD-3A血型血清學(xué)專用離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程62CBT-SOP-25-2013封管熱合器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程64試管法鑒定ABO血型標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科ABO血型鑒定的技術(shù)操作，確保鑒定結(jié)果準(zhǔn)確及臨床輸血安全有效，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科ABO血型鑒定的操作過程的規(guī)范化管理。3、方法及原理3.1方法：試管凝集法3.2原

5、理：根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或/和B抗原；所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗-A或/和抗-B。4、試劑4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）；4.2 5%A、B及0型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液；4.3受檢者血清或血漿；4.4受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液;5、樣本采集及處理用一次性EDTA-K2真空采血管抽取靜脈血1ml，將標(biāo)示有患者姓名、性別、年齡、住院號(hào)、病室/門急診、床號(hào)等

6、信息的標(biāo)簽貼在標(biāo)本管上，由醫(yī)護(hù)人員或?qū)ｉT人員將患者標(biāo)本送交輸血科。6、操作步驟6.1正定型：取潔凈小試管3支，分別標(biāo)明抗A，抗B和抗A+B，用滴管分別加抗A，抗B和抗A+B。分型血清各1滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混合。6.2反定型：另取潔凈小試管3支，分別標(biāo)明A，B和O細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A，B和O型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混合。立即以1000r/min離心1min。6.3將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。7、結(jié)果判斷：凝集

7、為陽性（+），不凝集為陰性（-），ABO定型結(jié)果如下表ABO正反定型結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)血清+被檢者紅細(xì)胞血檢者血型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞+被檢者血清抗A抗B抗A+BA細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞+-+A-+-+B+-O+-+AB-8、干擾：8.1分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應(yīng)放冰箱保存，以免細(xì)菌污染。 8.2試劑紅細(xì)胞以3個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌1次，以除去存在于紅細(xì)胞中的抗體及可溶性抗原。8.3試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。8.4操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。8.5按理IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的

8、干擾，一般仍在室溫（2024）內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37可使反應(yīng)減弱。8.6離心時(shí)間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防止假陽性或假陰性結(jié)果。8.7觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。8.8判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄，避免筆誤。9、凝強(qiáng)度判斷:觀察結(jié)果應(yīng)仔細(xì)，首先注意有無凝集，再按下述情況說明凝集強(qiáng)度：9.1 4：紅細(xì)胞凝聚成一大塊，血清透明清晰。9.2 3：紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。9.32：紅細(xì)胞凝集分散成多個(gè)小塊，可見游離紅細(xì)胞。9.41：肉眼可見大顆粒，周圍有較多紅細(xì)胞。9.5 ±：鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多紅細(xì)胞。9.6混合凝集視場

9、（MF,mixedfield）：鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集，大多數(shù)紅細(xì)胞分散分布為MF。陰性（）：鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。10、質(zhì)量控制：單克隆抗-A（B）試劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用，每批次在使用前應(yīng)檢測特異性及效價(jià)，試劑紅細(xì)胞的質(zhì)控執(zhí)行輸血科試劑質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，每天常規(guī)血型鑒定前先做室內(nèi)質(zhì)控（具體執(zhí)行輸血科室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程），結(jié)果在控后方可將常規(guī)檢查的報(bào)告發(fā)出。11、醫(yī)學(xué)解釋：11.1 血以成為臨床上必不可少的治療手段。輸血必須輸入ABO同型血，否則輸入的紅細(xì)胞可能迅速被破壞，導(dǎo)致嚴(yán)重的溶血反應(yīng)，常常威脅生命甚至造成死亡。所以在臨床工作中必須杜絕ABO血型不合的血液輸入人體，這以顯得

10、十分重要。11.2 腎、皮膚等器官或組織移植時(shí)，必須保證供體與受體之間ABO血型符合，否則將發(fā)生排斥反應(yīng)，造成移植術(shù)失敗。11.3 ABO血型不合所致的新生兒溶血病，可導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎或因出生后搶救不及時(shí)而致死等。目前早期診斷仍依賴于ABO血型血清學(xué)檢查。11.4 ABO血型在人群中的分布，可用作遺傳距離和聚類的分析，現(xiàn)以知道中國人氛圍北方、南方兩大群，前者以較高B基因，后者以較高O基因?yàn)樘卣鳌?1.5 其他：如親子鑒定，法醫(yī)學(xué)上對可疑血跡、精斑、毛發(fā)等ABO血型鑒定。12、最常見的誤差來源：12.1自制分型血清抗體效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)，造成定型不準(zhǔn)。12.2患者纖維蛋白原升高或異常蛋白質(zhì)血癥（

11、如多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血癥），可產(chǎn)生緡錢狀假凝集。新生兒臍帶血中喊有華頓膠（Wharton jally）或操作中使用了質(zhì)量差的玻璃管（瓶），誤認(rèn)其脫下的膠狀硅酸鹽為串錢狀凝集。12.3病人輸入了高分子血漿代用品或靜脈注射造影劑等藥物，可引起紅細(xì)胞聚集，易誤認(rèn)為凝集。12.4 血清中存在不規(guī)則抗體，如A2和A2B型患者血清內(nèi)有A1抗體，能凝集A1紅細(xì)胞。此外還有I抗體等。有些癌癥患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物質(zhì)可中和抗體血清的抗體，從而抑制反應(yīng)，造成假的不凝集。12.5嬰兒尚未產(chǎn)生自己的抗體（出生36個(gè)月后方逐漸產(chǎn)生），或有從母親獲得的血型抗體，故新生兒不宜用血清作反向定型。

12、12.6老年人血型抗體水平會(huì)下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴細(xì)胞白血病、遺傳性無丙種球蛋白血癥以及有些用了免疫抑制劑的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗體也下降甚至缺如?？沙霈F(xiàn)反向定性錯(cuò)誤。12.7用近期內(nèi)輸過血的患者血液做對照紅細(xì)胞，其紅細(xì)胞是多種紅細(xì)胞的混合物。12.8病人紅細(xì)胞已經(jīng)被大量抗體包被（如某些自身免疫疾病或新生兒溶血病患者的紅細(xì)胞），或紅細(xì)胞懸浮于含高濃度蛋白的介質(zhì)中，紅細(xì)胞都回自發(fā)地發(fā)生凝集。12.9有些人紅細(xì)胞膜有遺傳或獲得性異常，易發(fā)生多凝集（較罕見）。12.10 A或B的弱抗原易判斷為不凝集（假陰性），而由細(xì)菌引起的獲得性類B抗原易誤判為陽性。12.11由于患白血病或某些

13、惡性腫瘤（如Hodgkin?。┦笰或B抗原變?nèi)?。嬰兒及老年人的紅細(xì)胞抗原較青壯年弱，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保存過久的紅細(xì)胞及部分衰老的紅細(xì)胞抗原性也會(huì)減弱。11.12 當(dāng)用血清配制紅細(xì)胞懸液時(shí)，若血清中有高濃度血型物質(zhì)則會(huì)中和分型血清中的抗體，而不再與紅細(xì)胞抗原起反應(yīng)。11.13紅細(xì)胞被細(xì)菌污染。12.14嵌合體（chimera）現(xiàn)象，此處指混和細(xì)胞群，見于異卵雙生子。如有98%O型紅細(xì)胞，2%B型紅細(xì)胞會(huì)定為O型，但血清中只有抗A抗體。12.15 用了不潔的玻璃器皿或使用了嚴(yán)重污染的血清、紅細(xì)胞可出現(xiàn)假陽性。試管沾染了洗滌劑會(huì)造成假陰性。12.16紅細(xì)胞與血清的比例不當(dāng)、過度離心或離心不足可引起假陽性或

14、假陰性。12.17將出現(xiàn)的溶血現(xiàn)象（陽性）誤認(rèn)為陰性結(jié)果。12.18溫度過高會(huì)造成假陰性。因?yàn)锳BO血型系統(tǒng)的IgM抗體最適溫度為422，如達(dá)37凝集力即下降。12.19 弄錯(cuò)標(biāo)本、試劑、標(biāo)簽，或出現(xiàn)記錄錯(cuò)誤。13、相關(guān)文件13.1全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版；13.2試劑盒說明書。13.3輸血科輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序。13.4臨床輸血質(zhì)量管理指南田兆嵩主編。試管法鑒定RhD血型標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科RhD血型鑒定的技術(shù)操作，確保鑒定結(jié)果準(zhǔn)確及臨床輸血安全有效，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科RhD血型鑒定的操作過程的規(guī)范化管理。3、方法及原理

15、3.1方法：試管凝集法3.2原理：Rh 血型抗體多系不完全抗體，屬IgG 型。因分子短小，與紅細(xì)胞上的抗原作用后，不能使紅細(xì)胞靠攏凝集。木瓜酶能破壞紅細(xì)胞表面上的唾液酸，降低其表面電荷，減少紅細(xì)胞之間的排斥力，紅細(xì)胞得以靠攏，在不完全抗體的作用下，紅細(xì)胞便出現(xiàn)凝集。4、試劑市售IgG型抗D標(biāo)準(zhǔn)血清；受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液。5、標(biāo)本采集及處理同ABO血型檢查。6、操作步驟6.1取小試管1支，用蠟筆標(biāo)記，加入抗D血清1滴，再加5%受檢者紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻，立即以1000r/min離心1min。6.2將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，

16、應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。7、結(jié)果判斷：受檢管凝集，表示受檢紅細(xì)胞上有D抗原；受檢管不凝集，即表示受檢紅細(xì)胞上沒有D抗原，Rh（D）陰性。8、臨床意義8.1 Rh 血型與輸血。Rh 陰性患者如輸入Rh 陽性血液，可刺激患者產(chǎn)生免疫性抗體，當(dāng)?shù)诙卧俳邮躌h 陽性血液時(shí)，即發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)。Rh 陰性婦女如孕育過Rh 陽性胎兒，當(dāng)輸入Rh 陽性血液時(shí)亦可產(chǎn)生溶血性反應(yīng)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。8.2 Rh 血型與妊娠。Rh 陰性母親孕育了Rh 陽性胎兒后，在胎盤有小的滲漏時(shí)，胎兒血液可滲入母體血循環(huán)中，母體受到胎兒紅細(xì)胞的刺激可產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。此種免疫性抗體能通過胎盤而破壞胎兒紅細(xì)胞，如

17、果第一胎所產(chǎn)生抗D 抗體效價(jià)較低，一般對胎兒無明顯影響。如再次妊娠Rh 陽性胎兒時(shí)，抗D 效價(jià)很快升高。此抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)而發(fā)生新生兒溶血病。9、質(zhì)量控制：單克隆抗-D試劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用，每批次在使用前應(yīng)檢測特異性及效價(jià)，具體執(zhí)行輸血科試劑質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，每天常規(guī)血型鑒定前先做室內(nèi)質(zhì)控（具體執(zhí)行輸血科室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程），結(jié)果在控后方可將常規(guī)檢查的報(bào)告發(fā)出。10、注意事項(xiàng)Rh血型系統(tǒng)的抗體多由獲得性免疫產(chǎn)生，血清中很少有天然抗體，故不需要做反定型。Rh血型鑒定嚴(yán)格控制溫度與時(shí)間，因Rh抗原、抗體凝集反應(yīng)凝塊比較脆弱，觀察反應(yīng)結(jié)果時(shí)，應(yīng)輕輕彈動(dòng)試管，不可用力搖動(dòng)。11、相關(guān)文

18、件11.1全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版；11.2試劑盒說明書。11.3輸血科輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序11.4臨床輸血質(zhì)量管理指南田兆嵩主編。微柱凝膠卡式法鑒定ABO正反血型及RhD血型標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科ABO和RhD血型鑒定的技術(shù)操作，確保鑒定結(jié)果準(zhǔn)確及臨床輸血安全有效，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科ABO正反血型和RhD血型鑒定的操作過程的規(guī)范化管理。3、職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)操作。4、試驗(yàn)方法及原理4.1試驗(yàn)方法：微柱凝膠免疫測試法4.2原理：本微量定型系統(tǒng)凝膠測試法基于生物化學(xué)凝膠過濾技術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異

19、反應(yīng)。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)，則紅細(xì)胞發(fā)生凝集形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物。離心時(shí)凝集塊不能通過凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心時(shí)可通過凝膠間隙而沉積在凝膠管底部，呈陰性反應(yīng)。4.2.1 ABO血型基礎(chǔ)血型抗原與抗血清反應(yīng)與A1，B細(xì)胞反應(yīng)抗-A抗-B抗-A,BA1BAA+0+0+/+BB0+/+0ABAB+00OH000+/+/+4.2.2 Rh血型Rh血型系統(tǒng)包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D Cde=R1 Cde=R2 CcDdee=R1r與抗-D陽性反應(yīng)的紅細(xì)胞為Rh陽性。5、樣本采集和處理：受血者血樣為EDTA-K2抗凝血。抽取受血者靜脈血12ml于專用管（紫色頭管）內(nèi)，離心分

20、離出血漿。將細(xì)胞配成0.8%的懸液備用。 6、試劑：%的生理鹽水；6.2長春博迅公司的血型定型試劑卡；6.3長春博迅公司的0.8%的A、B型試劑紅細(xì)胞懸液；7、儀器：7.1XTL-4.7細(xì)胞洗滌離心機(jī)；7.2長春博迅公司的FYQ型免疫微柱孵育器；7.3長春博迅公司的TD-3A型血型血清學(xué)專用離心機(jī)；8、操作程序：8.1工作準(zhǔn)備：將0.8%A、B型試劑紅細(xì)胞懸液室溫平衡。準(zhǔn)備樣本，標(biāo)記卡。8.1.2 0.8%樣本紅細(xì)胞制備：將8l壓積紅細(xì)胞加到1ml生理鹽水中充分混勻。 將50lA1、B標(biāo)準(zhǔn)反定細(xì)胞加入血型卡的第5-6管中，將待檢者血漿或血清50l加到血型卡的第5-6管中。將0.8%樣本紅細(xì)胞分

21、別加入到血型卡的第1-4管中，各50l。將血型卡放入TD-3A型血型血清學(xué)專用離心機(jī)離心5分鐘后，判斷結(jié)果，并作好記錄。9、結(jié)果判斷： 100%的紅細(xì)胞沉在微管的底部+/-100%的紅細(xì)胞沉在微管的下端1/3之內(nèi)1+80%的紅細(xì)胞沉在微管的下端2/3之內(nèi)2+80%的紅細(xì)胞沉在微管的上端2/3之內(nèi)3+80%的紅細(xì)胞沉在微管的上端1/3之內(nèi)4+凝集的細(xì)胞全部處于微管的頂部d.p.雙群Hemo.溶血 4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血 雙群10、方法確認(rèn)：10.1ABO系統(tǒng)抗體以外其他血型抗體可通過抗體篩查來檢查。用O型細(xì)胞可檢查血漿、血清樣本有無其他血型抗體。方法簡便，快速準(zhǔn)確檢出臨床意義抗

22、體。10.2結(jié)果清楚明確，凝集在上層為陽性，沉積在下層為陰性，血型配血結(jié)果清晰明了，結(jié)果易判定。10.3結(jié)果穩(wěn)定、可保存、可拍照、可存入計(jì)算機(jī)?？蓮?fù)檢。10.4操作簡明，凝膠卡中已有抗血清，加入樣本細(xì)胞即可定型。避免因忘記加抗血清引起的錯(cuò)誤。10.5可檢出不完全抗體。避免了ABO以外血型抗體引起的輸血反應(yīng)。同時(shí)本卡不存在抗人球被中和問題，避免了費(fèi)時(shí)費(fèi)力的洗滌過程和假陰性。10.6樣本用量少，有利于新生兒及少血液量樣本的檢測。10.7結(jié)果重現(xiàn)性好，血型配血操作可實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化，血型配血可自動(dòng)化。11、質(zhì)量控制:每批血型鑒定卡和試劑紅細(xì)胞使用前進(jìn)行質(zhì)量確認(rèn)，具體執(zhí)行輸血科試劑質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，每天常規(guī)

23、血型鑒定前先做室內(nèi)質(zhì)控（具體執(zhí)行輸血科室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程），結(jié)果在控后方可將常規(guī)檢查的報(bào)告發(fā)出。12、注意事項(xiàng)：12.1每日實(shí)驗(yàn)前，先取出標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞和微柱凝膠卡，放置一段時(shí)間到室溫，以防冷凝集。12.2實(shí)驗(yàn)前將卡離心3-4分鐘。必須標(biāo)注血型卡。12.3血型卡封口已損壞時(shí)，管中干涸，或有氣泡時(shí)，卡不可使用。12.4紅細(xì)胞濃度要在 0.8%左右，不可太濃或太稀。12.5纖維蛋白可吸附部分紅細(xì)胞，應(yīng)將血樣充分離心。12.6反定管先加樣，以便標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞與血清或血漿反應(yīng)。先加細(xì)胞后加血漿。12.7正反定型對照，確定結(jié)果及A亞型。正定型結(jié)果若為弱陽性，應(yīng)懷疑為ABO亞型，可重做完全測試，正反

24、結(jié)果不符時(shí)，請?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)分析。12.8質(zhì)控（ctl）為陽性時(shí)，請先用生理鹽水洗細(xì)胞，再做血型。12.9嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)程序操作可檢出弱抗原，血型亞型。12.10某些藥物，疾病可導(dǎo)致弱陽性及正反定型不符。12.11細(xì)菌及異常血清蛋白可影響結(jié)果。12.12禁用嚴(yán)重溶血標(biāo)本，它會(huì)強(qiáng)烈干擾結(jié)果的判讀。嚴(yán)禁使用非抗凝血標(biāo)本配制紅細(xì)胞懸液，以免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。12.13被酶處理過的紅細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生非特異性凝集，禁用被污染的標(biāo)本和材料。12.14卡配套的專用離心機(jī)，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確。13、醫(yī)學(xué)解釋：13.1輸血已成為臨床上必不可少的治療手段。輸血必須輸入ABO同型血，否則輸入的紅細(xì)胞可能迅速被破壞，導(dǎo)致嚴(yán)重的溶血反應(yīng)，

25、常常威脅生命甚至造成死亡。所以在臨床工作中必須杜絕ABO血型不合的血液輸入人體，這以顯得十分重要。13.2腎、皮膚等器官或組織移植時(shí)，必須保證供體與受體之間ABO血型符合，否則將發(fā)生排斥反應(yīng)，造成移植術(shù)失敗。13.3ABO血型不合所致的新生兒溶血病，可導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎或因出生后搶救不及時(shí)而致死等。目前早期診斷仍依賴于ABO血型血清學(xué)檢查。13.4 ABO血型在人群中的分布，可用作遺傳距離和聚類的分析，現(xiàn)以知道中國人氛圍北方、南方兩大群，前者以較高B基因，后者以較高O基因?yàn)樘卣鳌?3.5其他：如親子鑒定，法醫(yī)學(xué)上對可疑血跡、精斑、毛發(fā)等ABO血型鑒定。14、相關(guān)文件14.1.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第

26、三版；14.2試劑盒說明書。14.3 輸血科輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序。14.4臨床輸血質(zhì)量管理指南田兆嵩主編。鹽水法交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科交叉配血試驗(yàn)的技術(shù)操作，確保鑒定結(jié)果準(zhǔn)確及臨床輸血安全有效，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科進(jìn)行交叉配血的操作技術(shù)的規(guī)范化管理。3、職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)操作。4、試驗(yàn)方法及原理：4.1試驗(yàn)方法：鹽水介質(zhì)配血法4.2原理：天然類血型抗體與對應(yīng)紅細(xì)胞抗原相遇，在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)。通過離心，觀察受血者血清與供血者紅細(xì)胞以及受血者紅細(xì)胞與供血者清之間有無凝集現(xiàn)象，判斷供血、受

27、血者之間有無ABO血型不合的情況。5、樣本采集及處理 血樣本為血漿（EDTA-K2抗凝）。抽取受血者靜脈血34ml，3000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘，分離出血漿，并將紅細(xì)胞配成2%鹽水懸液。將供血者血樣以同樣方法分離血清（血漿），并配制2%紅細(xì)胞懸液。配血所用受血者血樣必需是輸血前3天內(nèi)的。6、操作步驟：6.1 取潔凈小試管2支，1支標(biāo)明受血者血清（PS）+供血者細(xì)胞（DC）；另1支標(biāo)明供血清（DS）+受血者細(xì)胞（PC）。6.2 按標(biāo)記主側(cè)管放受血者血清1滴，加供血者紅細(xì)胞懸液1滴。次側(cè)管放供血者血清1滴，加受血者紅細(xì)胞懸液1滴，混勻，以1000r/min離心1min，輕輕側(cè)動(dòng)試管，觀察結(jié)果。6.3觀

28、察結(jié)果：先觀察試管上層液有無溶血，再斜持試管輕輕側(cè)動(dòng)或輕輕彈動(dòng)，觀察管底反應(yīng)物有無凝集（必要時(shí)用顯微鏡觀察）。冬季室溫較低，應(yīng)將試管保溫，以防冷凝集素引起的凝集反應(yīng)。7、結(jié)果判斷：ABO同型配血，主側(cè)和次側(cè)均無溶血、無凝集表示無輸血禁忌，可以輸血。異型配血時(shí)，主測無凝集，次測凝集，無溶血，可以輸給少量。輸異型血時(shí)，如次測不凝集，不可以輸血，應(yīng)重新復(fù)查血型或追查其原因。8、質(zhì)量控制：每天常規(guī)實(shí)驗(yàn)前先做室內(nèi)質(zhì)控（具體執(zhí)行輸血科室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程），結(jié)果在控后方可將常規(guī)檢查的報(bào)告發(fā)出。9、注意事項(xiàng)：9.1季室溫較低，應(yīng)將試管保溫，以防冷凝集素引起的凝集反應(yīng)。9.2 復(fù)核血型：配血時(shí)應(yīng)復(fù)核受血

29、者和供血者血型，必要時(shí)要查對以前配血記錄。9.3 同型之間交叉配血不合的處理：與個(gè)別同型供血者不能配合，可另選同型供血者進(jìn)行配血。當(dāng)受血者與多個(gè)同型獻(xiàn)血員配血不合時(shí)，首先要想到受血者血型鑒定有無差錯(cuò)，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的抗A 、B 、O型人的血清和標(biāo)準(zhǔn)A 、B 、O型紅細(xì)胞進(jìn)行復(fù)查。其次，要注意是否為非特異性凝集，并進(jìn)行確定。如果血型鑒定無誤，又不能證明假陽性，則應(yīng)進(jìn)行ABO亞型的鑒定，選擇同型的人進(jìn)行輸血。如為免疫性抗體造成的配血不合，要用不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞和（或）譜細(xì)胞檢查病人的血清，確定免疫抗體的性質(zhì)，選擇不含與此抗體相應(yīng)的抗原的紅細(xì)胞進(jìn)行輸注。當(dāng)獻(xiàn)血者標(biāo)本與多個(gè)同型受血者血標(biāo)本配血不合時(shí)，主側(cè)

30、不合應(yīng)考慮獻(xiàn)血紅細(xì)胞的直接抗人球蛋白試驗(yàn)是否為陽性，若次側(cè)不合應(yīng)考慮獻(xiàn)血者血漿中是否含有紅細(xì)胞不規(guī)則抗體。10、相關(guān)文件10.1.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版；10.2試劑盒說明書。10.3 輸血科輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序。10.4臨床輸血質(zhì)量管理指南田兆嵩主編。凝聚胺交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科交叉配血試驗(yàn)的技術(shù)操作，確保鑒定結(jié)果準(zhǔn)確及臨床輸血安全有效，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科進(jìn)行交叉配血的操作技術(shù)的規(guī)范化管理。3、職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)操作。4、試驗(yàn)方法及原理4.1試驗(yàn)方法：凝聚胺介質(zhì)配血法4.2原理：針對不規(guī)則抗

31、體的檢出及鑒定多采用紅細(xì)胞的凝聚反應(yīng)試驗(yàn)，而凝聚反應(yīng)試驗(yàn)的成效則與分布紅細(xì)胞表面之電荷以及抗體的親和性息息相關(guān)。凝聚胺法是利用低離子介質(zhì)（LIM）來降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，進(jìn)而減少紅細(xì)胞之間距，以促進(jìn)紅細(xì)胞和血清（血漿）中的抗體發(fā)生特異性結(jié)合；接著加入凝聚胺（polybrene）此種多價(jià)陽離子聚合物來中和紅細(xì)胞上的陰性電荷，使細(xì)胞間發(fā)生非特異性凝聚；最后加入重懸液，使之中和由凝聚胺所引起之非特異凝聚，倘若沒有凝聚發(fā)生，則判定為陰性；若有凝集，則得知存在特殊性之抗原抗體反應(yīng)，則判定為陽性。5、樣本采集和處理同鹽水交叉配血試驗(yàn)。6、試劑： 貝索的試劑盒：1) 低離子溶液（LIM）2) 聚凝胺溶液（PO

32、LYBRENE）3) 懸浮液（RESUSPENDING）7、操作步驟7.1 取試管兩支,分別標(biāo)明主次側(cè)管,主側(cè)管加入受血者血清兩滴,再加入25%獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液1滴,次側(cè)管反之。7.2每支試管中加入0.7mlLIM液,混勻;再各加入2滴POLYBRENE液,混勻。7.3 3400轉(zhuǎn)離心10秒，棄上清液，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。7.4輕搖試管，目測紅細(xì)胞有無凝集，若無凝集則必須重作。7.5加2滴resuspeneing液，輕搖試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。8、結(jié)果判斷立即目測并鏡檢觀察凝集狀態(tài)。如果30秒內(nèi)凝集散開，代表是由polybrene引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合。若凝集不散開

33、，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性凝集，配血結(jié)果不相合。若反應(yīng)可疑，可進(jìn)一步用顯微鏡觀察。9、質(zhì)量控制：每天常規(guī)實(shí)驗(yàn)前先做室內(nèi)質(zhì)控（具體執(zhí)行輸血科室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程），結(jié)果在控后方可將常規(guī)檢查的報(bào)告發(fā)出。10、注意事項(xiàng)10.1可以用含EDTA之血漿代替血清使用。10.2 若病人血清含肝素多，如洗腎患者，則應(yīng)加入雙倍量的Polybrene液和肝素。10.3試劑使用前，應(yīng)恢復(fù)室溫再做。10.4在冬天氣溫極低的情況下，操作交叉配血試驗(yàn)，由于某些病人血清可能含有冷凝集素等因素而導(dǎo)致假陽性結(jié)果出現(xiàn)。若有懷疑，建議在最后滴加RESUSPENDING液時(shí)將試管立即置于370C水浴中,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合,

34、并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。11、相關(guān)文件11.1.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版；11.2試劑盒說明書。11.3 輸血科輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序。11.4臨床輸血質(zhì)量管理指南田兆嵩主編。微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科交叉配血試驗(yàn)的技術(shù)操作，確保鑒定結(jié)果準(zhǔn)確及臨床輸血安全有效，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科進(jìn)行交叉配血的操作技術(shù)的規(guī)范化管理。3、職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)操作。4、試驗(yàn)方法及原理4.1試驗(yàn)方法：凝膠測試法4.2原理：本微量定型系統(tǒng)凝膠測試法基于生物化學(xué)凝膠過濾技術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)。當(dāng)抗原抗

35、體反應(yīng)，抗人球試驗(yàn)時(shí)，血細(xì)胞發(fā)生凝集。離心時(shí)凝集塊不能通過凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心時(shí)可通過凝膠間隙而沉積在凝膠管底部，呈陰性反應(yīng)。5、樣本采集和處理受血者血樣為EDTA-K2抗凝血。抽取受血者靜脈血34ml于專用管（紫色頭管）內(nèi)，分離出血漿。紅細(xì)胞配成0.8%的懸液，供血者血樣以同樣方法分離血漿，并配制0.8%紅細(xì)胞懸液。配血所用受血者血樣必需是輸血前3天內(nèi)的。 6、試劑：6.1 0.9%的生理鹽水；6.2戴安娜合血卡；7、儀器：7.1XTL-4.7細(xì)胞洗滌離心機(jī)；7.2DiaMed-ID Incubator 37 S 溫育器；7.3DiaMed-ID Centrif

36、uge 12 S8、操作程序：8.1工作準(zhǔn)備：生理鹽水室溫平衡。準(zhǔn)備樣本。標(biāo)記合血卡。8.1.2 0.8%-1%樣本紅細(xì)胞制備：加25l樣本壓積紅細(xì)胞懸浮液于2ml戴安娜2號(hào)稀釋液中。于1號(hào)管中（主側(cè)）加入50l獻(xiàn)血者紅細(xì)胞（0.8%）。25l受血者血漿或血清。8.1.4 2號(hào)管中（次側(cè)）加入50l受血者紅細(xì)胞（0.8%）。25l獻(xiàn)血者血漿或血清。8.1.5 37孵育15分鐘。 離心10分鐘。判斷結(jié)果，并作好記錄。9、結(jié)果判斷：1+至4+為抗人球配血不相容；（0）為配血相容，可以輸注。10、醫(yī)學(xué)解釋：ABO交叉配血試驗(yàn)是檢查供、受血者血液中是否含有不相合的抗原和抗體成分的試驗(yàn)。其目的是發(fā)現(xiàn)AB

37、O血型的不規(guī)則抗體；發(fā)現(xiàn)ABO血型以外的配血不和合，防止因錯(cuò)誤定型所致的輸血事故。是安全輸血的根本保證。11、質(zhì)量控制：每天常規(guī)實(shí)驗(yàn)前先做室內(nèi)質(zhì)控（具體執(zhí)行輸血科室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程），結(jié)果在控后方可將常規(guī)檢查的報(bào)告發(fā)出。12、注意事項(xiàng)：12.1含抗體的新鮮血清，如補(bǔ)體尚有活性，遇相應(yīng)紅細(xì)胞抗原，可發(fā)生溶血現(xiàn)象，其意義與凝集相同。12.2可以用含EDTA的血漿代替血清使用。 12.3每日實(shí)驗(yàn)前，先取出2號(hào)稀釋液及標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞，放置一段時(shí)間到室溫，以防冷凝集。12.4實(shí)驗(yàn)前將卡離心3-4分鐘。必須標(biāo)記合血卡。12.5合血卡封口已損壞時(shí)，管中干涸，或有氣泡時(shí)，卡不可使用。12.6必須用2號(hào)稀釋液

38、保證反應(yīng)結(jié)果可靠，細(xì)胞濃度要在 0.8%左右，不可太濃或太稀。12.7纖維蛋白可吸附部分紅細(xì)胞，應(yīng)將血樣離心。12.8液體應(yīng)加在反應(yīng)卡反應(yīng)室中。12.9嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)程序操作可檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集。12.10某些藥物、疾病可導(dǎo)致血液不配合。12.11細(xì)菌及異常血清蛋白可影響結(jié)果。13、最常見的誤差來源：13.1自制分型血清抗體效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)，造成定型不準(zhǔn)。13.2患者纖維蛋白原升高或異常蛋白質(zhì)血癥（如多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血癥），可產(chǎn)生緡錢狀假凝集。新生兒臍帶血中含有華頓膠（Wharton jally）或操作中使用了質(zhì)量差的玻璃管（瓶），誤認(rèn)其脫下的膠狀硅酸鹽為串錢狀凝集。1

39、3.3病人輸入了高分子血漿代用品或靜脈注射造影劑等藥物，可引起紅細(xì)胞聚集，易誤認(rèn)為凝集。13.4血清中存在不規(guī)則抗體，如A2和A2B型患者血清內(nèi)有A1抗體，能凝集A1紅細(xì)胞。此外還有I抗體等。有些癌癥患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物質(zhì)可中和抗體血清的抗體，從而抑制反應(yīng)，造成假的不凝集。13.5嬰兒尚未產(chǎn)生自己的抗體（出生36個(gè)月后方逐漸產(chǎn)生），或有從母親獲得的血型抗體，故新生兒不宜用血清作反向定型。13.6老年人血型抗體水平回下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴細(xì)胞白血病、遺傳性無丙種球蛋白血癥以及有些用了免疫抑制劑的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗體也下降甚至缺如?？沙霈F(xiàn)反向定性

40、錯(cuò)誤。13.7用近期內(nèi)輸過血的患者血液做對照紅細(xì)胞，其紅細(xì)胞是多種紅細(xì)胞的混合物。13.8病人紅細(xì)胞已經(jīng)被大量抗體包被（如某些自身免疫疾病或新生兒溶血病患者的紅細(xì)胞），或紅細(xì)胞懸浮于含高濃度蛋白的介質(zhì)中，紅細(xì)胞都回自發(fā)地發(fā)生凝集。13.9有些人紅細(xì)胞膜有遺傳或獲得性異常，易發(fā)生多凝集（較罕見）。13.10A或B的弱抗原易判斷為不凝集（假陰性），而由細(xì)菌引起的獲得性類B抗原易誤判為陽性。13.11由于患白血病或某些惡性腫瘤（如Hodgkin病）使A或B抗原變?nèi)?。嬰兒及老年人的紅細(xì)胞抗原較青壯年弱，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保存過久的紅細(xì)胞及部分衰老的紅細(xì)胞抗原性也會(huì)減弱。13.12當(dāng)用血清配制紅細(xì)胞懸液時(shí)，若血

41、清中有高濃度血型物質(zhì)則會(huì)中和分型血清中的抗體，而不再與紅細(xì)胞抗原起反應(yīng)。13.13紅細(xì)胞被細(xì)菌污染。13.14嵌合體（chimera）現(xiàn)象，此處指混和細(xì)胞群，見于異卵雙生子。如有98%O型紅細(xì)胞，2%B型紅細(xì)胞會(huì)定為O型，但血清中只有抗A抗體。13.15用了不潔的玻璃器皿或使用了嚴(yán)重污染的血清、紅細(xì)胞可出現(xiàn)假陽性。試管沾染了洗滌劑會(huì)造成假陰性。13.16紅細(xì)胞與血清的比例不當(dāng)、過度離心或離心不足可引起假陽性或假陰性。13.17將出現(xiàn)的溶血現(xiàn)象（陽性）誤認(rèn)為陰性結(jié)果。13.18溫度過高會(huì)造成假陰性。因?yàn)锳BO血型系統(tǒng)的IgM抗體最適溫度為422，如達(dá)37凝集力即下降。13.19弄錯(cuò)標(biāo)本、試劑、標(biāo)

42、簽，或出現(xiàn)記錄錯(cuò)誤。14、相關(guān)文件14.1.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版；14.2試劑盒說明書。14.3 輸血科輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序。14.4臨床輸血質(zhì)量管理指南田兆嵩主編。新生兒溶血?。℉DN）血型血清學(xué)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科HDN血型血清實(shí)驗(yàn)診斷的技術(shù)操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確，明確HDN診斷及其原因，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科對HDN進(jìn)行血型血清學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷及其實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)的規(guī)范化管理。3、職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)操作。4、試驗(yàn)方法及原理4.1試驗(yàn)方法：微柱凝膠卡式法4.2原理：本微量定型系統(tǒng)凝膠測試法基于生物化學(xué)凝膠過

43、濾技術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)，抗人球試驗(yàn)時(shí)，血細(xì)胞發(fā)生凝集。離心時(shí)凝集塊不能通過凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心時(shí)可通過凝膠間隙而沉積在凝膠管底部，呈陰性反應(yīng)。5、樣本采集和處理取患兒不抗凝血1-2ml及EDTA-K 2抗凝血34ml,24小時(shí)內(nèi)送檢。將不抗凝血離心分離出血清備用。6、試劑：5.1 0.9%的生理鹽水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D標(biāo)準(zhǔn)血清；5.4 5%A、B及0型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液；5.5長春博迅公司的血型定型試劑卡；7、儀器：1) XTL-4.7細(xì)胞洗滌離心機(jī)；2)

44、DiaMed-ID Incubator 37 S 溫育器；3) DiaMed-ID Centrifuge 12 S7.5操作程序：嬰兒及母親ABO血型鑒定是檢查第一步，以便考慮以后進(jìn)一步檢查程序。如母子ABO不合（母O子A、B，母A子B、AB，母B子A、AB）則按下列步驟進(jìn)行患兒血液三項(xiàng)試驗(yàn)：直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）（微柱凝膠卡式法）1) 取患兒不抗凝血離心后，用0.9%的生理鹽水配成0.8%的紅細(xì)胞懸液。2) 在戴安娜LISS/Coombs卡上標(biāo)明患兒的姓名或編號(hào)，撕開卡上的鋁箔，加入配好的患兒紅細(xì)胞懸液50l。3) 將卡放入戴安娜離心機(jī)離心10分鐘后判讀結(jié)果。4) 結(jié)果觀察：5) 陽性

45、：紅細(xì)胞凝集，在凝膠柱中或表面形成紅線。6) 陰性：在微管底部形成密集的細(xì)胞扣。 患兒紅細(xì)胞抗體放散試驗(yàn)7) 患兒紅細(xì)胞用大量生理鹽水洗滌三次，取壓積紅細(xì)胞1ml左右，加等量的生理鹽水混勻。8) 將上面?zhèn)浜玫募t細(xì)胞懸液置57的水浴箱中振蕩10分鐘后取出，立刻以2000轉(zhuǎn)/分離心2-3分鐘。9) 吸上層紅色液體（即放射液）于清潔試管中備用。10) 分別取標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞用稀釋液配成0.8%的懸液，然后在戴安娜LISS/Coombs卡上標(biāo)明患兒的姓名或編號(hào)，撕開卡上的鋁箔，分別加入50l備好的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，并于各孔均加入25l放散液。11) 在戴安娜孵育器上孵育15分鐘后于戴安娜離心機(jī)上離心10分鐘后

46、觀察結(jié)果。12) 結(jié)果判定陽性：紅細(xì)胞凝集，在凝膠柱中或表面形成紅線。陰性：在微管底部形成密集的細(xì)胞扣。紅細(xì)胞放散液抗體檢測結(jié)果判讀試劑紅細(xì)胞意義OAB-+-放散出IgG抗A-+放散出IgG抗B-+放散出交叉反應(yīng)性抗體或IgG抗A和抗B（或抗AB抗體）-未放散出抗體+/-+/-放散出不規(guī)則抗體（ABO以外抗體）患兒血清中游離抗體測定13) 取患兒不抗凝血離心，吸取血清血備用。14) 分別取標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞用稀釋液配成0.8%的懸液，然后在戴安娜LISS/Coombs卡上標(biāo)明患兒的姓名或編號(hào)，撕開卡上的鋁箔，分別加入50l備好的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，并于各孔均加入25l患兒血清。15) 在戴安娜孵育器上孵育

47、15分鐘后于戴安娜離心機(jī)上離心10分鐘后觀察結(jié)果。16) 結(jié)果判定：血漿游離抗體檢測結(jié)果判讀試劑紅細(xì)胞意義ABO+-游離的IgG抗A-+-游離的IgG抗B+-游離的IgG抗AB（交叉反應(yīng)性抗體）-無游離IgG抗體-/+-/+游離的不規(guī)則抗體（ABO以外抗體）8、結(jié)果分析：根據(jù)三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合判斷ABO新生兒溶血?。ㄅ懦齇細(xì)胞陽性情況）直抗試驗(yàn)游離試驗(yàn)放散試驗(yàn)結(jié) 論-不能證實(shí)為由血型免疫性抗體引起的HDN+-可以證實(shí)為HDN-+-可疑為HDN-+可以證實(shí)為ABO HDN+-+可以證實(shí)為ABO HDN+-可以證實(shí)為ABO HDN-+可以證實(shí)為ABO HDN+可以證實(shí)為ABO HDN9、注意事項(xiàng)：9

48、.1母親檢出的IgG類紅細(xì)胞血型抗體，如在新生兒紅細(xì)胞上缺乏相應(yīng)的抗原，則與HDN無關(guān)。9.2患兒血清及紅細(xì)胞放散液中檢出了IgG類紅細(xì)胞血型同種抗體，且患兒紅細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的紅細(xì)胞血型抗原、抗體特異性與母體血清中紅細(xì)胞血型抗體特異性一致，可明確診斷為HDN。9.3當(dāng)母親患有IgG抗體自身免疫溶血性疾病時(shí)，IgG抗體可進(jìn)入胎兒體內(nèi)引起貧血，患兒DAT也可為陽性，檢測母親DAT為陽性有助于鑒別。9.4鑒定患兒血型時(shí)應(yīng)注意“遮斷現(xiàn)象”影響鑒定結(jié)果，如患兒為RhD陽性且紅細(xì)胞D抗原已完全被來自母體的IgG抗-D飽和，DAT呈陽性，用IgM抗-D鑒定RhD血型可出現(xiàn)假陰性，此時(shí)可用溫和的熱洗脫法解決Rh

49、D血型鑒定困難問題。9.5當(dāng)新生兒ABO血型鑒定有困難時(shí)，可以根據(jù)其父母的血型推測新生兒血型（作為參考）。9.6使用臍血標(biāo)本檢測ABO血型不合HDN陽性率較高，部分陽性患兒并不出現(xiàn)明顯的溶血表現(xiàn)。9.7一旦懷疑為HDN時(shí)，宜盡早采集血標(biāo)本檢測。7天后采集的血標(biāo)本陽性率明顯降低，也有部分HDN患兒出生2周后仍可檢出陽性結(jié)果。10、相關(guān)文件10.1.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版；10.2試劑盒說明書。10.3 輸血科輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序。10.4臨床輸血質(zhì)量管理指南田兆嵩主編。紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科紅細(xì)胞規(guī)則抗體篩選的技術(shù)操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確及臨床輸血安全有效，依據(jù)輸血

50、實(shí)驗(yàn)室管理程序條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科紅細(xì)胞規(guī)則抗體篩選的操作技術(shù)的規(guī)范化管理。3、職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)操作。4、試驗(yàn)方法及原理：不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landsteiner法則的血型抗體，多數(shù)為免疫性抗體（IG性質(zhì)），輸血前受血者體內(nèi)若發(fā)現(xiàn)此類抗體，應(yīng)輸入無對應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，以避免抗原抗體反應(yīng)，引起溶血性輸血反應(yīng)。若產(chǎn)婦體內(nèi)發(fā)現(xiàn)此類抗體，則應(yīng)確定其效價(jià)并觀察其效價(jià)變化，以避免其引起新生兒溶血病的發(fā)生。目前不規(guī)則抗體篩查是采用已知抗原表型的O型試劑紅細(xì)胞，在不同溫度下、采用不同介質(zhì)篩查被檢血清中有無有臨床意義的不規(guī)則抗體。常用的方法有

51、鹽水凝集試驗(yàn)、聚凝胺試驗(yàn)、抗人球蛋白試驗(yàn)、酶試驗(yàn)等。本科根據(jù)本科實(shí)際情況采用鹽水凝集試驗(yàn)、聚凝胺試驗(yàn)、抗人球蛋白試驗(yàn)篩查不規(guī)則抗體。其反應(yīng)原理同配血試驗(yàn)。5、樣本采集和處理取受檢者不抗凝血3ml（若不知受檢者血型，應(yīng)同時(shí)抽 EDTA-K 2抗凝血1ml）及時(shí)送檢。6、實(shí)驗(yàn)程序：6.1鹽水介質(zhì)法篩選紅細(xì)胞不規(guī)則抗體試劑：生理鹽水，、號(hào)不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞（0.5-0.8%的濃度）儀器：XTL-4.7細(xì)胞洗滌離心機(jī)，電熱恒溫水浴箱。操作程序：取小試管4支，分別加入受檢者血清2滴（100L），然后在前三管中分別加入、號(hào)篩選細(xì)胞試劑各1滴，在第四管中加入3%的自身對照紅細(xì)胞1滴，混勻后，根據(jù)需要（4，室

52、溫，37）放置數(shù)分鐘，用血型專用離心機(jī)以1000rpm離心1分鐘，輕輕側(cè)動(dòng)試管，觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：凝集強(qiáng)度觀察同鹽水配血試驗(yàn)，自身對照及、管均無凝集者表明未檢出紅細(xì)胞不規(guī)則抗體；四管均凝集表明受檢者血清（血漿）中含自身抗體或同時(shí)伴有同種免疫性紅細(xì)胞不規(guī)則抗體；若自身對照無凝集而、管中至少有1管凝集出現(xiàn)表明受檢者血清（血漿）中含有同種免疫性紅細(xì)胞不規(guī)則抗體。本實(shí)驗(yàn)的鹽水法若出現(xiàn)凝集表示受檢者體內(nèi)有IgM型的不規(guī)則抗體存在。6.2凝聚胺法篩選紅細(xì)胞不規(guī)則抗體試劑：生理鹽水；、號(hào)不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞（0.5-0.8%的濃度）；貝索的試劑盒：低離子溶液（LIM），聚凝胺溶液（POLYBRENE），懸浮

53、液（RESUSPENDING）。儀器：XTL-4.7細(xì)胞洗滌離心機(jī)；普通離心機(jī)。操作步驟：鹽水介質(zhì)法篩查紅細(xì)胞不規(guī)則抗體結(jié)束后可轉(zhuǎn)做凝聚胺試驗(yàn)，具體方法如凝聚胺配血法。結(jié)果判斷：凝集強(qiáng)度觀察同凝聚胺配血試驗(yàn)，自身對照及、管均無凝集者表明未檢出紅細(xì)胞不規(guī)則抗體；四管均凝集表明受檢者血清（血漿）中含IgG自身抗體或同時(shí)伴有IgG同種免疫性紅細(xì)胞不規(guī)則抗體；若自身對照無凝集而、管中至少有1管凝集出現(xiàn)表明受檢者血清（血漿）中含有IgG型的同種免疫性紅細(xì)胞不規(guī)則抗體。6.3微柱凝膠抗人球蛋白法篩選紅細(xì)胞不規(guī)則抗體試劑：生理鹽水，、號(hào)不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞（0.5-0.8%的濃度），博迅的不規(guī)則抗體篩查卡。儀器：XTL-4.7細(xì)胞洗滌離心機(jī)，博研微術(shù)凝膠卡專用孵育器及離心機(jī)。操作程序：微柱凝膠抗人球蛋白法篩選紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的具體方法如微術(shù)凝膠配血法，具體操作如下：1）將準(zhǔn)備好的檢測卡做好標(biāo)記；2）將0.5-0.8%、篩檢紅細(xì)胞各50µl分別加入對應(yīng)的微管中; 3）將待檢者血清各50µl分別加入、微管中；4）37孵育15分鐘；5）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）。6.3.4結(jié)果判斷：凝集強(qiáng)度觀察同微柱凝膠配血試驗(yàn)，結(jié)果判斷同凝聚胺法。7、質(zhì)量控制