血清葡萄糖的測(cè)定(GOD-POD法)

1、血清葡萄糖的測(cè)定（GOD-POD法）血清測(cè)定是臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)中的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目之一。實(shí)驗(yàn)分為以下部分 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)試劑 實(shí)驗(yàn)操作 數(shù)據(jù)分析 注意事項(xiàng) 臨床意義2022-3-32實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆彰阜ㄑ迤咸烟菨舛鹊脑碚莆昭亲兓呐R床意義2022-3-33實(shí)驗(yàn)原理血清葡萄糖是用以過(guò)氧化物酶的偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法測(cè)定的。葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，同時(shí)釋放過(guò)氧化氫。過(guò)氧化物酶（POD）催化過(guò)氧化氫氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反應(yīng)。紅色醌類(lèi)化合物的生成量與葡萄糖的含量成正比。葡萄糖GOD紅色醌類(lèi)化合物POD2022-3-

2、34實(shí)驗(yàn)試劑器材器材 5ml移液管，50或100ul微量可調(diào)式移液管,721E型分光光度計(jì)，1比色皿，37度恒溫水 浴鍋。試劑試劑0.1磷酸鹽緩沖液（Ph=7.0）稱(chēng)取無(wú)水磷酸二氫鉀5.3g，溶于蒸餾水800ml中，調(diào)節(jié)pH=7.0,定容至1L酶試劑取過(guò)氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，疊氮化鈉100mg，溶入磷酸鹽緩沖液80ml中，調(diào)節(jié)pH值至7.0，用磷酸鹽緩沖液定容至100ml，置于4度保存，可穩(wěn)定存在3個(gè)月。酚溶液稱(chēng)取重蒸餾酚100mg，溶入蒸餾水100ml中，用棕色瓶?jī)?chǔ)存。酶-酚混合試劑將酶試劑及酚溶液等量混合，4度可放一個(gè)月。2022-3-35實(shí)驗(yàn)試劑12mmol苯甲酸

3、鈉溶液稱(chēng)取苯甲酸鈉1.6g，于800ml蒸餾水中加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至1L。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液（100mmol/L）稱(chēng)取已干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖1.082g，溶入約70ml 12mmol/L苯甲酸鈉溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液（5mmol/L）吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液5.00ml，置入100ml容量瓶中，用12mmol/L，苯甲酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻。2022-3-36實(shí)驗(yàn)操作試劑試劑空白管空白管標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管測(cè)定管血清/L-0.02葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/L-0.02-蒸餾水/L0.02-酶酚混合試劑/L3.003.003.00混勻，置于37C水浴中，保溫25mi

4、n，在波長(zhǎng)510nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管的吸光度。血清葡萄糖的含量=5mmol/dL參考值：3.89-6.11mmol/L2022-3-37注意事項(xiàng)1. 葡萄糖氧化酶法可直接用于測(cè)定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測(cè)定尿液葡萄糖含量。因?yàn)槟蛞褐心蛩岬雀蓴_性物質(zhì)濃度過(guò)高，可干擾氧化酶反應(yīng)，造成結(jié)果假性偏低。2. 因紅細(xì)胞的酵解將導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏低，建議測(cè)定樣品以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑以抑制糖酵解。3. 嚴(yán)重黃疸，溶血及乳糜樣血清應(yīng)先制備無(wú)蛋白血濾液，然后在進(jìn)行測(cè)定。2022-3-38臨床意義生理性高血糖：可見(jiàn)于攝入高糖食物后，或緊張情緒腎上腺素分泌增加時(shí)。病理學(xué)高血糖：1.糖尿病:病理性高血糖常見(jiàn)于胰島素絕對(duì)或相對(duì)不足的糖尿病患者。2.內(nèi)分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進(jìn)，腎上腺皮質(zhì)功能及髓質(zhì)功能亢進(jìn)，引起各種對(duì)抗胰島素的激素分泌過(guò)多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。3.顱內(nèi)壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷，顱內(nèi)出血，腦膜炎等，引起血糖增高。4.脫水引起的高血糖：如嘔吐，腹瀉和高熱等也可