血清葡萄糖的測定(GOD-POD法)

1、血清葡萄糖的測定（GOD-POD法）血清測定是臨床生物化學(xué)檢驗中的常規(guī)檢測項目之一。實驗分為以下部分 實驗?zāi)康?實驗原理 實驗試劑 實驗操作 數(shù)據(jù)分析 注意事項 臨床意義2022-3-32實驗?zāi)康恼莆彰阜ㄑ迤咸烟菨舛鹊脑碚莆昭亲兓呐R床意義2022-3-33實驗原理血清葡萄糖是用以過氧化物酶的偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法測定的。葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，同時釋放過氧化氫。過氧化物酶（POD）催化過氧化氫氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反應(yīng)。紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖的含量成正比。葡萄糖GOD紅色醌類化合物POD2022-3-

2、34實驗試劑器材器材 5ml移液管，50或100ul微量可調(diào)式移液管,721E型分光光度計，1比色皿，37度恒溫水 浴鍋。試劑試劑0.1磷酸鹽緩沖液（Ph=7.0）稱取無水磷酸二氫鉀5.3g，溶于蒸餾水800ml中，調(diào)節(jié)pH=7.0,定容至1L酶試劑取過氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，疊氮化鈉100mg，溶入磷酸鹽緩沖液80ml中，調(diào)節(jié)pH值至7.0，用磷酸鹽緩沖液定容至100ml，置于4度保存，可穩(wěn)定存在3個月。酚溶液稱取重蒸餾酚100mg，溶入蒸餾水100ml中，用棕色瓶儲存。酶-酚混合試劑將酶試劑及酚溶液等量混合，4度可放一個月。2022-3-35實驗試劑12mmol苯甲酸

3、鈉溶液稱取苯甲酸鈉1.6g，于800ml蒸餾水中加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至1L。葡萄糖標準儲存液（100mmol/L）稱取已干燥至恒重的無水葡萄糖1.082g，溶入約70ml 12mmol/L苯甲酸鈉溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。葡萄糖標準工作液（5mmol/L）吸取葡萄糖標準儲存液5.00ml，置入100ml容量瓶中，用12mmol/L，苯甲酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻。2022-3-36實驗操作試劑試劑空白管空白管標準管標準管測定管測定管血清/L-0.02葡萄糖標準液/L-0.02-蒸餾水/L0.02-酶酚混合試劑/L3.003.003.00混勻，置于37C水浴中，保溫25mi

4、n，在波長510nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標準管和測定管的吸光度。血清葡萄糖的含量=5mmol/dL參考值：3.89-6.11mmol/L2022-3-37注意事項1. 葡萄糖氧化酶法可直接用于測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾性物質(zhì)濃度過高，可干擾氧化酶反應(yīng)，造成結(jié)果假性偏低。2. 因紅細胞的酵解將導(dǎo)致測定結(jié)果偏低，建議測定樣品以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑以抑制糖酵解。3. 嚴重黃疸，溶血及乳糜樣血清應(yīng)先制備無蛋白血濾液，然后在進行測定。2022-3-38臨床意義生理性高血糖：可見于攝入高糖食物后，或緊張情緒腎上腺素分泌增加時。病理學(xué)高血糖：1.糖尿病:病理性高血糖常見于胰島素絕對或相對不足的糖尿病患者。2.內(nèi)分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進，腎上腺皮質(zhì)功能及髓質(zhì)功能亢進，引起各種對抗胰島素的激素分泌過多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。3.顱內(nèi)壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷，顱內(nèi)出血，腦膜炎等，引起血糖增高。4.脫水引起的高血糖：如嘔吐，腹瀉和高熱等也可