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文檔簡介
1、血清葡萄糖的測定(GOD-POD法)血清測定是臨床生物化學檢驗中的常規(guī)檢測項目之一。實驗分為以下部分 實驗目的 實驗原理 實驗試劑 實驗操作 數據分析 注意事項 臨床意義2022-3-32實驗目的掌握酶法血清葡萄糖濃度的原理掌握血糖變化的臨床意義2022-3-33實驗原理血清葡萄糖是用以過氧化物酶的偶聯酶反應定量法測定的。葡萄糖氧化酶(GOD)利用氧將葡萄糖氧化為葡萄糖酸,同時釋放過氧化氫。過氧化物酶(POD)催化過氧化氫氧化色素原(如4-氨基安替比林和苯酚),并使色素原氧化成色素,即Trinder反應。紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖的含量成正比。葡萄糖GOD紅色醌類化合物POD2022-3-
2、34實驗試劑器材器材 5ml移液管,50或100ul微量可調式移液管,721E型分光光度計,1比色皿,37度恒溫水 浴鍋。試劑試劑0.1磷酸鹽緩沖液(Ph=7.0)稱取無水磷酸二氫鉀5.3g,溶于蒸餾水800ml中,調節(jié)pH=7.0,定容至1L酶試劑取過氧化物酶1200U,4-氨基安替比林10mg,疊氮化鈉100mg,溶入磷酸鹽緩沖液80ml中,調節(jié)pH值至7.0,用磷酸鹽緩沖液定容至100ml,置于4度保存,可穩(wěn)定存在3個月。酚溶液稱取重蒸餾酚100mg,溶入蒸餾水100ml中,用棕色瓶儲存。酶-酚混合試劑將酶試劑及酚溶液等量混合,4度可放一個月。2022-3-35實驗試劑12mmol苯甲酸
3、鈉溶液稱取苯甲酸鈉1.6g,于800ml蒸餾水中加溫助溶,冷卻后加蒸餾水定容至1L。葡萄糖標準儲存液(100mmol/L)稱取已干燥至恒重的無水葡萄糖1.082g,溶入約70ml 12mmol/L苯甲酸鈉溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。葡萄糖標準工作液(5mmol/L)吸取葡萄糖標準儲存液5.00ml,置入100ml容量瓶中,用12mmol/L,苯甲酸鈉溶液稀釋至刻度,混勻。2022-3-36實驗操作試劑試劑空白管空白管標準管標準管測定管測定管血清/L-0.02葡萄糖標準液/L-0.02-蒸餾水/L0.02-酶酚混合試劑/L3.003.003.00混勻,置于37C水浴中,保溫25mi
4、n,在波長510nm處比色,以空白管調零,讀取標準管和測定管的吸光度。血清葡萄糖的含量=5mmol/dL參考值:3.89-6.11mmol/L2022-3-37注意事項1. 葡萄糖氧化酶法可直接用于測定腦脊液葡萄糖含量,但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾性物質濃度過高,可干擾氧化酶反應,造成結果假性偏低。2. 因紅細胞的酵解將導致測定結果偏低,建議測定樣品以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑以抑制糖酵解。3. 嚴重黃疸,溶血及乳糜樣血清應先制備無蛋白血濾液,然后在進行測定。2022-3-38臨床意義生理性高血糖:可見于攝入高糖食物后,或緊張情緒腎上腺素分泌增加時。病理學高血糖:1.糖尿病:病理性高血糖常見于胰島素絕對或相對不足的糖尿病患者。2.內分泌腺功能障礙:甲狀腺功能亢進,腎上腺皮質功能及髓質功能亢進,引起各種對抗胰島素的激素分泌過多,或升高血糖的激素增多引起的高血糖,現已歸入特異性糖尿病中。3.顱內壓增高刺激血糖中樞,如顱外傷,顱內出血,腦膜炎等,引起血糖增高。4.脫水引起的高血糖:如嘔吐,腹瀉和高熱等也可
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