實(shí)驗(yàn)五-放線菌與真菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察

1、實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱：環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)類型：綜合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱：放線菌與真菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察學(xué)生姓名： 專業(yè)：環(huán)境工程學(xué)號(hào)： 同組學(xué)生姓名： 指導(dǎo)老師： 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)： 實(shí)驗(yàn)日期：2018年 10月16日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?. 學(xué)習(xí)并掌握放線菌(鏈霉菌)，真菌(酵母、霉菌)形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法，認(rèn)識(shí)并理解它們的形態(tài)特征。2. 熟練掌握顯微鏡的使用。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理1. 放線菌放線菌，是一類主要呈菌絲狀生長(zhǎng)和以孢子繁殖的陸生性較強(qiáng)大的原核生物。因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長(zhǎng)而得名。大多數(shù)有發(fā)達(dá)的分枝菌絲。菌絲纖細(xì)，寬度近于桿狀細(xì)菌，約0.51微米。可分為：營養(yǎng)菌絲，又稱基內(nèi)菌絲，主要功能是吸收營養(yǎng)物質(zhì)

2、，有的可產(chǎn)生不同的色素，是菌種鑒定的重要依據(jù)；氣生菌絲，疊生于營養(yǎng)菌絲上，又稱二級(jí)菌絲。2. 真菌1 酵母菌：為單細(xì)胞真核生物。呈圓形、卵形、橢圓形或檸檬型。各體直徑比細(xì)菌大幾倍到幾十倍。菌落大而厚，濕潤光華，顏色多為乳白色、灰白色、似細(xì)菌落。繁殖方式包含無性繁殖(芽殖或裂殖)與有性繁殖(形成子囊與子囊孢子)。2 酵母菌的出芽生殖：在細(xì)胞的一端初生小突起，如芽狀，逐漸增大。細(xì)胞核一分為二，其中一個(gè)進(jìn)入小突起，經(jīng)細(xì)胞壁縊縮。芽體與母細(xì)胞脫離，形成新個(gè)體。若芽體不脫離母體而有繼續(xù)生出新芽，而芽細(xì)胞聚集形成芽簇，芽簇細(xì)胞伸長(zhǎng)呈絲狀或藕節(jié)狀，稱做假菌絲。3 美蘭染色法：美蘭是一種無毒性染料，氧化型呈藍(lán)

3、色，還原型呈無色?；罴?xì)胞具有較強(qiáng)還原能力，使美蘭由藍(lán)色變成無色。染色后，酵母活細(xì)胞無色，死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞呈藍(lán)色或淡藍(lán)色。4 酵母菌肝糖粒碘液染色：肝糖粒是酵母細(xì)胞的內(nèi)含物，屬于碳源及能源性貯藏物。用碘液染色，菌體呈淡黃色，肝糖粒呈紅褐色。5 霉菌：由菌絲體構(gòu)成，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲。由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。菌絲和孢子的寬度比細(xì)菌和放線菌大幾倍到幾十倍。制片時(shí)滴加乳酚油，防止干燥，可保持菌絲體原形。6 黃曲霉：唯一種常見的腐生真菌，多見于發(fā)霉的糧食、蔬菜及水果。形態(tài)上有明顯的分生孢子結(jié)構(gòu)，分生孢子梗從足細(xì)胞上生長(zhǎng)出來，往上延伸膨大呈頂囊，頂部有一

4、至二層結(jié)構(gòu)，分別為出生小梗及次生小梗。回曲霉在成熟時(shí)還可以產(chǎn)生黃曲霉毒素，為黃曲霉的劇毒代謝產(chǎn)物，為強(qiáng)致癌物。7 青霉：唯一種常見的腐生植物，多見于發(fā)霉的糧食、蔬果。形態(tài)上具有帚狀的分生孢子(包含包生孢子梗、?；⑿」?、分生孢子)。青霉常被應(yīng)用于有機(jī)酸及抗生素的生產(chǎn)。8 黑根霉：亦稱面包需或匐枝根霉，常出現(xiàn)于發(fā)霉的面包、米飯等食物上，瓜果腐爛。出現(xiàn)黑斑與具有關(guān)。具有匍匐菌絲、假根、包囊梗、孢了囊、包囊孢子。黑根霉常用于果膠酶、淀粉酶的生產(chǎn)。黑根霉的接合孢子是黑根霉的一種有性孢子，使由兩條不同性別的菌絲特化后形成配子囊，配子囊接合后形成接合孢子。三、主要儀器試劑（必填）1. 菌種：鏈霉菌5天板培

5、養(yǎng)物、黃曲霉45天平板培養(yǎng)物、青霉45天平板培養(yǎng)物、黑根霉7天平板培養(yǎng)物、啤酒酵母2天培養(yǎng)物2. 示范片:黑根霉及其接合孢子3. 儀器及相關(guān)用品:乳酚油、碘液、0.1%美蘭、50%酒精、蒸餾水、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、解剖刀、酒精燈、顯微鏡、鏡頭油、擦鏡紙、吸水紙、鏡頭洗液。四、操作方法和實(shí)驗(yàn)步驟1. 放線菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察：個(gè)體形態(tài)直接觀察法:觀察青色鏈霉菌菌絲和孢子絲自然生長(zhǎng)的性狀，包括氣生菌絲(粗、亮)，基內(nèi)菌絲(細(xì)、暗)和孢子絲的形狀，如分枝狀況及孢子絲卷曲等。印片染色法:微熱載玻片印片過火固定石炭酸復(fù)紅染色lmin水洗干燥鏡檢(高倍鏡和油鏡) 繪圖說明。2. 酵母菌形態(tài)觀察:美蘭

6、染色法：(1)先在載玻片上加一小滴美蘭染色液，用接種環(huán)挑取一環(huán)酵母菌液，與載玻片， 上的美蘭染色液充分混勻，蓋上蓋玻片。(2)將制片放置約3 min，先低倍鏡然后用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽情況，并根據(jù)顏色來區(qū)別死活細(xì)胞。肝糖染色法；(1)先在載玻片，上加一小滴碘液，用接種環(huán)挑取一環(huán)酵母菌液，與載玻片上的碘液充分混勻，蓋上蓋玻片后鏡檢。(2)在高倍鏡下觀察菌體形態(tài)、出芽、芽簇、肝糖粒，通常菌體呈淡黃色，肝糖粒呈紅褐色，并繪圖。3. 黃曲霉的形態(tài)觀察:觀察黃曲霉菌絲分隔情況和分生孢子著生情況，著重辨認(rèn)分生孢子梗、頂囊、小梗、分生孢子、足細(xì)胞等。(1)無菌操作用解剖針挑取或鑷子夾取少許黃曲霉培養(yǎng)物

7、(菌絲并略帶少量培養(yǎng)基)，置于潔凈的載玻片上，加酒精和蒸餾水各一滴，重復(fù)一次，使分生孢子分散，便于觀察。(2)傾去酒精和蒸餾水，加一滴乳酚油，防止細(xì)胞變形或干燥，蓋上蓋玻片(適當(dāng)用手指壓實(shí)、除氣泡) 低、中、高倍鏡觀察，繪圖。4. 青霉的形態(tài)觀察:制作青霉標(biāo)本片，著重辨認(rèn)帚狀體(分生孢了梗、小梗、分生跑了)，并繪圖。5. 黑根霉的形態(tài)觀察:觀察黑根霉示范鏡。辨認(rèn)包囊胞子、孢子囊、孢囊梗、匍匐菌絲假恨，并繪圖。6. 黑根霉接合抱了的形態(tài)觀察：觀察黑根霉接合孢了示范片，并繪圖。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析觀察結(jié)果鏈霉菌放大100*10(油鏡)酵母菌(美蘭染色)放大100*10酵母菌(碘液染色)放大100*1

8、0觀察到的為鏈霉菌的氣生菌絲形成長(zhǎng)鏈狀的孢子絲，經(jīng)復(fù)紅染色后呈粉紫色，其長(zhǎng)鏈?zhǔn)怯啥鄠€(gè)桿狀的孢子相連構(gòu)成。經(jīng)美藍(lán)染色后有少部份的酵母菌呈深藍(lán)色，為死亡或代謝功能較弱的細(xì)胞，呈無色透明的則是代謝正常的活細(xì)胞，使美藍(lán)染液還原成無色。觀察活細(xì)胞可以看到其細(xì)胞內(nèi)有一小區(qū)顏色較淺，推測(cè)應(yīng)為其細(xì)胞代謝旺盛的區(qū)域。經(jīng)碘液染色后酵母菌細(xì)胞呈淡黃色，其中有些細(xì)胞內(nèi)有深褐色的結(jié)構(gòu)，為酵母菌中的肝糖粒。同時(shí)經(jīng)過染色后可以觀察到酵母菌的芽殖，與芽簇結(jié)構(gòu)。青霉放大100*10黃曲霉放大100*10黑根霉放大100*10青霉菌在高倍鏡下可以在其邊緣部份找到呈帚狀的分生孢子(帚狀體)，其分生孢子梗上分叉出多個(gè)梗基，上接分生小

9、梗，頂部為分生孢子。黃曲霉菌在高倍鏡下可以看到其向爆炸頭一樣的分生孢子結(jié)構(gòu)，其分生孢子頂端膨大呈頂囊，上頭有12層分生孢子結(jié)構(gòu)，一層的為初生小梗，兩層的為初生小梗加次生小梗。黑根霉的孢子梗為立體構(gòu)型，用顯為鏡觀察時(shí)需不斷調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)輪，最頂部的為黑色球形的孢子囊，下接孢囊梗，最底部可以看到爪狀的假根。黑根霉接合孢子放大100*10黃曲霉(足細(xì)胞)放大100*10可以看到結(jié)合孢子由兩根粗細(xì)相仿的菌絲結(jié)合而成，接何處膨大呈球狀。黃曲霉的足細(xì)胞呈倒T字型，細(xì)胞無橫隔，上接分生孢子梗。鏈霉菌放大100*10(油鏡)酵母菌(美蘭染色)放大100*10酵母菌(碘液染色)放大100*10青霉放大100*10黃

10、曲霉放大100*10黑根霉放大40*10黑根霉接合孢子放大100*10黃曲霉(足細(xì)胞)放大100*10六、討論、心得這次的實(shí)驗(yàn)分別觀察了屬于放線菌的鏈霉菌與屬于真菌的酵母菌、黃曲霉菌、青霉菌與黑根霉菌。并著重觀察其生殖結(jié)構(gòu)，如用于無性生殖的酵母菌進(jìn)行芽殖產(chǎn)生的芽胞子、黃曲霉與青霉的分生孢子，與用于有性生殖的結(jié)合胞子與孢囊孢子對(duì)我們了解真菌與放線菌的生殖構(gòu)造十分有用。同時(shí)透過觀察我們也可以知道個(gè)已知道個(gè)結(jié)構(gòu)的比例，并了解了各種微生物的觀察方法。七、思考題1. 放線菌、酵母菌、細(xì)菌在細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別?在細(xì)胞形態(tài)上細(xì)菌的形態(tài)簡(jiǎn)單，基本有球狀，桿狀，螺旋狀三類，僅少數(shù)為其他形狀，如絲狀，三角形

11、，方形，圓盤形等，度量細(xì)菌的單位為微米(0.55微米)，而度量其亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)要用納米，細(xì)菌包括細(xì)胞壁，細(xì)胞膜，細(xì)胞質(zhì)和核有的區(qū)，有的含有特殊構(gòu)造，如鞭毛，菌毛等。而酵母菌的細(xì)胞直徑約為細(xì)菌的10倍，細(xì)胞形態(tài)通常有球狀，卵圓狀，橢圓狀，柱狀 。酵母菌的細(xì)胞膜由三層結(jié)構(gòu)組成，主要成分為蛋白質(zhì)，類脂，和少量糖類，酵母菌有由多孔核膜包裹起來的定形細(xì)胞核。放線菌是絲狀細(xì)菌，寬度大致等同于桿狀細(xì)菌之寬，約0.51微米需要油鏡(100倍物鏡)，才能看清楚輪廓，看不到細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。在菌落特征上，細(xì)菌菌落一般呈現(xiàn)濕潤、較光滑、較透明、較粘稠、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位的顏色一致等。放線菌與細(xì)菌

12、有明顯差別在于菌落干燥、不透明、表面呈致密的絲絨狀，上有一層彩色的“干粉”；酵母菌菌落與細(xì)菌相仿，呈現(xiàn)濕潤、較透明，表面較光滑、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位的顏色一致等特點(diǎn)。2. 制取霉菌水浸片時(shí)為什么用乳酚油?可以霉使霉菌干燥，并保持其構(gòu)型。3. 真菌絲和假菌絲有什么區(qū)別?假菌絲 (pseudohypha)是指酵母菌菌種進(jìn)行一連串的芽殖后，長(zhǎng)大的子細(xì)胞仍不脫落分離，并繼續(xù)出芽，細(xì)胞成串排列，在分隔處縊縮， 這種菌絲狀的細(xì)胞串就稱為假菌絲。 假菌絲的各細(xì)胞間僅以狹小的面積相連，呈藕節(jié)狀。真菌絲 (true hypha)是指菌絲頂端連續(xù)生長(zhǎng)產(chǎn)生隔膜形成的菌絲，隔膜處不縊縮。即相

13、連細(xì)胞間的橫隔面積與細(xì)胞直徑一致，呈竹節(jié)狀的細(xì)胞串。而假菌絲與真菌絲明顯不同處在于其兩細(xì)胞間有一細(xì)腰，而不象真正菌絲橫隔處兩細(xì)胞寬度一致。4. 霉菌的無性孢子和有性孢子各有幾種?它們是怎樣形成的?霉菌的無性孢子直接由生殖菌絲的分化而形成，常見的有芽孢子、節(jié)孢子、厚垣孢子、孢囊孢子和分生孢子。（1）芽孢子：芽孢子和酵母菌的出芽一樣，是由母細(xì)胞生芽而形成的。當(dāng)芽長(zhǎng)到正常大小時(shí)，脫離母細(xì)胞，或仍連在母細(xì)胞上，如玉蜀黑粉菌能產(chǎn)生芽孢子。某些毛霉或根霉在液體培養(yǎng)基中形成的“酵母型細(xì)胞”，也屬芽孢子。（2）節(jié)孢子：某些真菌生長(zhǎng)到一定階段，菌絲中間形成許多隔膜，接著從隔膜處斷裂成許多竹節(jié)似的無性孢子，稱為節(jié)

14、孢子，也稱為粉孢子。最典型的例子是白地霉。（3）厚垣孢子：厚垣孢子又稱厚壁孢子或厚膜孢子。某些真菌生長(zhǎng)到一定階段，在菌絲的頂端或中間有部分細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)密集在一起，變圓，然后在其四周生出厚壁，或原細(xì)胞壁加厚，形成圓形、紡錘形的無性休眠體，來抵抗外界不良的環(huán)境條件，如總狀毛霉常在菌絲中間形成許多厚垣孢子。（4）孢囊孢子：無性繁殖產(chǎn)生的孢子在孢子囊內(nèi)，稱為孢囊孢子。孢子囊一般生在氣生菌絲的頂端或生在孢囊梗的頂端。在形成孢子囊前，首先有多核的原生質(zhì)密集于此處，使其膨大，并在下方生出橫隔，形成圓形的囊狀物，然后其中原生質(zhì)體割裂成許多小塊，每一塊發(fā)育成為一個(gè)孢囊孢子。因而每一個(gè)孢子囊所含有的孢囊孢子的數(shù)目

15、一般都相當(dāng)多。就孢囊孢子而言，一般有兩種類型。一種具有一根或二根鞭毛，能夠游動(dòng)，所以稱游動(dòng)孢子，如腐霉。另一種無鞭毛，不能游動(dòng)，又稱靜止孢子，毛霉目的孢囊孢子即屬此類（5）分生孢子：分生孢子是真菌中最常見的一類無性孢子。有的生在氣生菌絲或分支的頂端，有的生在分生孢子梗的頂端或側(cè)面。其形成方式有兩種：一種是在分生孢子梗的頂端突出，發(fā)育成第一個(gè)孢子。梗再伸長(zhǎng)形成第二個(gè)孢子，如此重復(fù)，形成一串孢子。這樣形成的分生孢子，頂端的最老。曲霉屬和青霉屬的分生孢子形成，即屬于此類型。另一種是在第一個(gè)分生孢子形成時(shí)，柄的長(zhǎng)度已達(dá)到最高，由第一個(gè)分生孢子頂端生長(zhǎng)出第二個(gè)分生孢子，如此重復(fù)形成一串孢子。這樣形成的分生孢子，下部的最老，如枝孢霉屬的分生孢子形成即屬于此類型。有些霉菌，兩條菌絲可直接結(jié)合，多數(shù)霉菌則由配子囊（由菌絲分化形成的性細(xì)胞）或配子（由配子囊產(chǎn)生）相互交配，形成有性孢子，主要類型有：接合孢子、卵孢子、子囊孢子。（1）接合孢子：接合孢子是由菌絲生出的結(jié)構(gòu)基本相似,形態(tài)相同或略有不同的兩個(gè)配子囊接合而成。首先，兩個(gè)菌體各自向?qū)Ψ缴斐鰳O短的特殊菌絲，稱為接合子梗。性質(zhì)協(xié)調(diào)的兩個(gè)接合子梗成對(duì)地相互吸引，并在它們的頂部融合形成融合膜。兩個(gè)接合子梗的頂端膨大，形成