安捷倫HPLC1260操作流程

1、儀器的組成操作前準(zhǔn)備開機及關(guān)機工作站使用數(shù)據(jù)分析注意事項主體 安捷倫1260HPLC 流動相瓶、四元泵、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器附件 電腦、顯示器、打印機等安捷倫安捷倫1260HPLC1260HPLC流動相瓶四元泵自動進樣器柱溫箱二極管陣列檢測器四元泵自動進樣器柱溫箱二極管陣列檢測器排氣閥流動相瓶電源開關(guān)指示燈色譜柱色譜柱流動相選擇流動相過濾流動相超聲與脫氣流動相冷卻流動相選擇 分類：組成分-單組分和多組分 極性-極性、弱極性、非極性 常用溶劑：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等 （溶劑最好為HPLC級，水為超純水） 其中多采用二元或多元組合溶劑作為流動相，通過調(diào)節(jié)各組分的

2、比例改變流動相的極性，已達(dá)到最佳的分離效果，對于部分情況還可以加入緩沖鹽，調(diào)節(jié)出峰時間和達(dá)到改善峰型的效果。流動相過濾 為了除去流動相中的雜質(zhì),保護系統(tǒng)和色譜柱，在流動相使用完后，裝入新的溶劑前應(yīng)使用抽濾瓶對溶劑進行過濾。濾膜濾膜：有機膜和水系膜，二者不能混用。一般HPLC流動相過濾使用孔徑為0.45m的濾膜。針對混合溶劑首選有機濾膜過濾。流動相超聲與脫氣 為了除去溶解在流動相中得氣泡,降低基線噪音，在HPLC開機前應(yīng)把各溶劑瓶在超聲機中超聲30min左右。 對于溶解在流動相中的極微氣體，安捷倫1260HPLC四元泵中集合了脫氣機，可以進一步對混合后的流動相進行脫氣處理。流動相冷卻 流動相在超

3、聲機中長時間超聲后，由于水分子振動摩擦，使水溫上升，因此流動相瓶中的溶劑也會被加熱。加熱后的流動相進入液相系統(tǒng)和色譜柱后，會影響基線噪聲的增加，使平穩(wěn)時間延長。1260HPLC及化學(xué)工作站開機使用與關(guān)機打開計算機打開主機電源點擊儀器1聯(lián)機進入工作站排氣（A/B/C/D）調(diào)節(jié)流速與流動相比例關(guān)閉排氣閥打開柱溫箱逐步增大流速檢查壓力穩(wěn)定后打開檢測器跑基線穩(wěn)定后清洗針與管路樣品命名進樣檢測保存數(shù)據(jù)沖洗管路及關(guān)機關(guān)機前，用90%水沖洗柱子和系統(tǒng)0.5-1小時，流量1.0mL/min，再用100%有機溶劑（甲醇）沖0.5小時，然后保存方法和儀器設(shè)置。退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計算機。關(guān)掉液相主機各

4、模塊電源開關(guān)，拔掉電源插頭。做好儀器使用登記。進入工作站主界面方法和各模塊參數(shù)設(shè)置跑基線樣品命名與進樣檢測進入工作站主界面方法和各模塊參數(shù)設(shè)置在各模塊中空白處點擊右鍵，選擇“方法”編輯參數(shù)。1bar14.5psi0.1MPa=100kPa不同儀器單位不同視圖在線信號信號窗口1跑基線至少平穩(wěn)至少平穩(wěn)30min單次樣品：樣品命名序列樣品：命名與序列表設(shè)置進樣檢測樣品色譜圖進入儀器1脫機打開數(shù)據(jù)文件夾打開樣品色譜圖色譜峰編輯色譜峰數(shù)據(jù)打印報告色譜峰實例打開儀器1脫機數(shù)據(jù)文件夾序列樣品數(shù)據(jù)單次樣品數(shù)據(jù)樣品數(shù)據(jù)樣品數(shù)據(jù)色譜圖色譜圖色譜圖編輯色譜峰數(shù)據(jù)色譜峰手動積分報告打印報告主峰數(shù)據(jù)主峰要求：分離度1.

5、50.95對稱因子 1.05塔板數(shù)8000以上min5101520mAU01020304050607080*DAD1 A, Sig=248,4 Ref=off (VPA-TDM-2VPA-SCJ 2015-03-24 11-31-16VPA-20150324001.D)12患者患者丙戊酸鈉血藥濃度檢測丙戊酸鈉血藥濃度檢測色譜圖色譜圖環(huán)己烷羧酸丙戊酸鈉min5101520mAU01020304050607080*DAD1 A, Sig=248,4 Ref=off (VPA-TDM-2VPA-SCJ 2015-04-01 11-36-49VPA-20150401005.D)min05101520mAU01020304050607080*DAD1 A, Sig=248,4 Ref=off (VPA-TDM-2VPA-SCJ 2015-04-01 11-36-49VPA-20150401008.D)12空白標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰實例色譜峰實例氘燈是易耗品，分析前應(yīng)最后開燈，不分析樣品應(yīng)及時關(guān)閉氘燈；流動相不要使用多日存放的蒸餾水，一般不易超過三天（易長菌），影響基線平衡；儀器使用后，應(yīng)用90%水沖洗柱子和系統(tǒng)0.5-1h，流量1.0mL/min，再用100甲醇沖洗0.5h；開機時，打開排氣閥，設(shè)置流動相為100%水，泵流量5.0mL/min，若此時