蘭花組織培養(yǎng)

1、蘭花組織培養(yǎng)蘭花組織培養(yǎng) 蘭花是整個(gè)蘭科植物蘭花是整個(gè)蘭科植物( Orchidaceae)的總稱，是開花植物的總稱，是開花植物中最大的家族之一，是單子葉植物中最高度演化的一科，中最大的家族之一，是單子葉植物中最高度演化的一科，有有6個(gè)亞科個(gè)亞科730多屬多屬25000余種，廣泛分布于全球各地。余種，廣泛分布于全球各地。 蘭花在中國(guó)約有蘭花在中國(guó)約有170個(gè)屬個(gè)屬1200余種，分布較為廣泛，幾乎余種，分布較為廣泛，幾乎全國(guó)各省都有分布。全國(guó)各省都有分布。 蘭花具有極高的觀賞價(jià)值，形成蘭花產(chǎn)業(yè)。蘭花具有極高的觀賞價(jià)值，形成蘭花產(chǎn)業(yè)。 蘭花具有藥用價(jià)值。蘭花具有藥用價(jià)值。蘭花主要繁殖方法 分株繁殖分

2、株繁殖 種子繁殖種子繁殖 組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)原球莖和原球莖和類原球莖類原球莖原球莖原球莖(Protocorm)是指蘭花種子萌發(fā)過(guò)程中的一種形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)：種是指蘭花種子萌發(fā)過(guò)程中的一種形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)：種子的幼胚吸水膨脹，中部的胚細(xì)胞分裂增殖，突破合點(diǎn)端種皮形成球子的幼胚吸水膨脹，中部的胚細(xì)胞分裂增殖，突破合點(diǎn)端種皮形成球形或橢球形形或橢球形 。在蘭科植物的組織培養(yǎng)中，根尖、葉片等適宜外植體也可誘導(dǎo)類似原在蘭科植物的組織培養(yǎng)中，根尖、葉片等適宜外植體也可誘導(dǎo)類似原球莖組織結(jié)構(gòu)，即類原球莖或擬原球莖。球莖組織結(jié)構(gòu)，即類原球莖或擬原球莖。類原球莖類原球莖(Protocorm-like body, PLB)一詞

3、是由一詞是由Morel在在1960年提出的，年提出的，用來(lái)描述蘭科植物組培過(guò)程中產(chǎn)生的類似種子萌發(fā)過(guò)渡形態(tài)用來(lái)描述蘭科植物組培過(guò)程中產(chǎn)生的類似種子萌發(fā)過(guò)渡形態(tài)原球原球莖的一種特殊組織結(jié)構(gòu)莖的一種特殊組織結(jié)構(gòu):在蘭花組織培養(yǎng)中，可由莖尖分生組織等在蘭花組織培養(yǎng)中，可由莖尖分生組織等（而不是種子）誘導(dǎo)形成類似其種子原球莖的組織結(jié)構(gòu)。（而不是種子）誘導(dǎo)形成類似其種子原球莖的組織結(jié)構(gòu)。 蘭花外植體的選擇和類原球莖增殖蘭花外植體的選擇和類原球莖增殖 外植體的選擇直接關(guān)系到類原球莖的誘導(dǎo)。外植體的選擇直接關(guān)系到類原球莖的誘導(dǎo)。 在組織培養(yǎng)中幼嫩部位一般不容易褐化，因此常選取較幼在組織培養(yǎng)中幼嫩部位一般不容

4、易褐化，因此常選取較幼嫩且生長(zhǎng)旺盛的部位誘導(dǎo)類原球莖。嫩且生長(zhǎng)旺盛的部位誘導(dǎo)類原球莖。 莖尖、葉片和種子是誘導(dǎo)類原球莖的理想外植體來(lái)源。莖尖、葉片和種子是誘導(dǎo)類原球莖的理想外植體來(lái)源。 花瓣、萼片、子房、休眠芽、側(cè)芽、花梗節(jié)間段、根尖等花瓣、萼片、子房、休眠芽、側(cè)芽、花梗節(jié)間段、根尖等均可作為外植體誘導(dǎo)出原球莖。均可作為外植體誘導(dǎo)出原球莖。莖尖和側(cè)芽作為外植體莖尖和側(cè)芽作為外植體莖尖和側(cè)芽是最早也是使用頻率最高的蘭花外植體。莖尖和側(cè)芽是最早也是使用頻率最高的蘭花外植體。莖尖和側(cè)芽頂端分生區(qū)細(xì)胞的分裂能力強(qiáng)，容易誘導(dǎo)出類原球莖。莖尖和側(cè)芽頂端分生區(qū)細(xì)胞的分裂能力強(qiáng)，容易誘導(dǎo)出類原球莖。大花蕙蘭（

5、大花蕙蘭（Cymbidium） 、卡特麗亞、卡特麗亞(Cattleya) 、石斛蘭、石斛蘭( Dendrobium )、墨蘭和建蘭等均成功用莖尖誘導(dǎo)出大量類原球莖。、墨蘭和建蘭等均成功用莖尖誘導(dǎo)出大量類原球莖。對(duì)蝴蝶蘭對(duì)蝴蝶蘭( Phalaeanopsis ) 、仙指甲蘭、仙指甲蘭( Aerides) 等用莖尖作為外植體等用莖尖作為外植體有可能影響開花性狀，有可能影響開花性狀， 因此需要尋找其他外植體。因此需要尋找其他外植體。葉片作為外植體葉片作為外植體 葉片作為外植體既可減少對(duì)母株的傷害，取材又不葉片作為外植體既可減少對(duì)母株的傷害，取材又不受季節(jié)的限制，且數(shù)量多，是比較理想的外植體材受季節(jié)的

6、限制，且數(shù)量多，是比較理想的外植體材料來(lái)源。料來(lái)源。 研究表明雖然葉片具有誘導(dǎo)出類原球莖的能力，但研究表明雖然葉片具有誘導(dǎo)出類原球莖的能力，但成熟葉誘導(dǎo)出類原球莖的能力極弱。成熟葉誘導(dǎo)出類原球莖的能力極弱。 幼葉誘導(dǎo)出類原球莖能力較成熟葉強(qiáng)，但誘導(dǎo)率也幼葉誘導(dǎo)出類原球莖能力較成熟葉強(qiáng)，但誘導(dǎo)率也很低對(duì)，于大花蕙蘭僅為很低對(duì)，于大花蕙蘭僅為33%左右左右Plant regeneration through direct somatic embryogenesis from leaf explants of Phalaenopsis amabilis: 種子作為外植體種子作為外植體在自然條件下蘭花

7、種子雖多，但由于其不具有發(fā)育完全的胚，在自然條件下蘭花種子雖多，但由于其不具有發(fā)育完全的胚，且種皮致密、透性差或種皮中含有抑制物使種子很難萌發(fā)。且種皮致密、透性差或種皮中含有抑制物使種子很難萌發(fā)。自自Noel Bernared在在1899年創(chuàng)立了蘭花種子共生萌發(fā)法后，研究年創(chuàng)立了蘭花種子共生萌發(fā)法后，研究者們接著發(fā)現(xiàn)大部分蘭花種子可以通過(guò)無(wú)菌萌發(fā)的方式進(jìn)行，者們接著發(fā)現(xiàn)大部分蘭花種子可以通過(guò)無(wú)菌萌發(fā)的方式進(jìn)行，即非共生萌發(fā)。即非共生萌發(fā)。蘭花種子的非共生萌發(fā)已在蝴蝶蘭、石斛蘭、文心蘭等蘭花中蘭花種子的非共生萌發(fā)已在蝴蝶蘭、石斛蘭、文心蘭等蘭花中取得成功。取得成功。蘭花蒴果消毒及果實(shí)內(nèi)部蘭花蒴果

8、消毒及果實(shí)內(nèi)部 開裂果實(shí)種子消毒方法開裂果實(shí)種子消毒方法過(guò)濾方法過(guò)濾方法1http:/ 一般較少用花梗節(jié)間段作為外植體。一般較少用花梗節(jié)間段作為外植體。 但蝴蝶蘭組織培養(yǎng)中多采用花梗作為外植體，從花梗節(jié)間但蝴蝶蘭組織培養(yǎng)中多采用花梗作為外植體，從花梗節(jié)間段誘導(dǎo)出類原球莖，并且通過(guò)研究表明花梗節(jié)間段形成類段誘導(dǎo)出類原球莖，并且通過(guò)研究表明花梗節(jié)間段形成類原球莖的頻率明顯高于其它外植體（莖尖、根尖）。原球莖的頻率明顯高于其它外植體（莖尖、根尖）。栽培條件下蝴蝶蘭花梗節(jié)間分化幼芽栽培條件下蝴蝶蘭花梗節(jié)間分化幼芽蝴蝶蘭花梗組織培養(yǎng)蝴蝶蘭花梗組織培養(yǎng)根作為外植體根作為外植體 Stewart等用樹蘭等用樹

9、蘭(Epidendrum )的根首次成功地培養(yǎng)出了的根首次成功地培養(yǎng)出了原球莖和從愈傷組織分化出不定芽。原球莖和從愈傷組織分化出不定芽。 之后，根的離體培養(yǎng)相繼在不同蘭花中獲得了成功。之后，根的離體培養(yǎng)相繼在不同蘭花中獲得了成功。 由于蘭花的根部共生菌根，根作為外植體較難徹底消毒，由于蘭花的根部共生菌根，根作為外植體較難徹底消毒， 在組織培養(yǎng)的過(guò)程中較容易污染在組織培養(yǎng)的過(guò)程中較容易污染。蘭花的離體開花蘭花的離體開花組織培養(yǎng)基和添加物組織培養(yǎng)基和添加物培養(yǎng)基培養(yǎng)基蘭花組織培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基為蘭花組織培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基為MS、VW、Knudson C、Kyoto、White和它們的改良型，應(yīng)根據(jù)不同品種而選擇合適的培養(yǎng)基。和它們的改良型，應(yīng)根據(jù)不同品種而選擇合適的培養(yǎng)基。目前，市場(chǎng)中有很多商業(yè)化培養(yǎng)基。目前，市場(chǎng)中有很多商業(yè)化培養(yǎng)基。大花蕙蘭大花蕙蘭 MS、1/2MS、VW、KC均可應(yīng)用于原球莖的增殖，但以均可應(yīng)用于