兔實驗技術(shù)操作

1、一、兔的抓取及保定1.準(zhǔn)備的物品、器械：固定器2.簡要：（1）徒手抓取 （2）保定3.解說操作：3.1徒手抓取用一只手將頸部的被毛和皮膚一起抓住提起，另一只手托住臀部。（如圖1）。也可一手抓住兔肩胛部的皮膚，另一手托住其臀部并將兔的頭部放置于臂彎中，再用前臂支撐兔體。3.2 保定3.2.1將兔放在操作臺上，用一只手抓住頸背部皮膚（包括兔耳），另一只手壓住腰部（或后肢）加以保定，可用于肌肉注射、灌胃等操作。3.2.2 將兔放在操作臺上，用左手抓住頸背部皮膚，使兔下半身固定在操作者左臂下方，用右手環(huán)抱兔前肢，適用于孕兔灌胃等操作。如圖2。3.2.3盒式保定法：將兔放入兔保定盒內(nèi)，蓋上蓋，使兔頭露在

2、盒外，便可進(jìn)行采血或注射給藥等操作。3.2.4保定板保定：將兔仰臥或俯臥在保定板上，用布帶保定，四肢和頭部也用布帶保定，即可進(jìn)行心電圖檢查、注射給藥、采血等操作。4.注意事項4.1 蓋兔盒時必須要輕，不能用力壓，否則兔脊椎骨很容易骨折，造成下肢癱瘓。4.2 將家兔放回兔籠時，先將臀部及后肢放入籠內(nèi)。4.3 抓取時禁止抓提兔耳。4.4 抓取要穩(wěn)、準(zhǔn)、柔、快，不可過分用力抓捏腰腹部。二、兔的采血方法1.準(zhǔn)備的物品、器械：注射器、采血管、止血帶、酒精棉球、干棉球、保定架等2.簡要：耳靜脈采血、耳動脈采血、后肢靜脈采血、心臟采血3.解說操作3.1耳緣靜脈或耳動脈采血3.1.1 將兔保定于保定器內(nèi)，用酒

3、精棉球擦拭消毒。3.1.2助手固定兔耳，并壓迫耳緣靜脈根部，使血管充盈；操作者手持注射器，針頭沿耳緣靜脈平行刺入血管，慢慢抽取血液。 助手固定兔耳，操作者手持注射器，在耳中央動脈末端，使針頭沿血管平行方向刺入動脈，血液即可流入注射器內(nèi)。3.1.4 采血完畢后立即用消毒干棉球壓迫止血。3.2后肢靜脈采血3.2.1  兔固定于兔保定架上，剪去脛部被毛，股部扎上止血帶，使脛外側(cè)皮下靜脈充盈。3.2.2 固定靜脈，用左手兩指固定好靜脈，右手取帶有針頭的注射器內(nèi)皮下靜脈平行方向刺入血管，抽一下針?biāo)?，如血進(jìn)入注射器，表示針頭已刺入血管，即可取血。取血后要長時間壓迫止血，一般取血量為25mL。3.

4、2.3 取完后必須用棉球壓迫取血部位止血，時間要略長些，因此處不易止血。如止血不妥，可造成皮下血腫，影響連續(xù)多次取血。3.3心臟采血3.3.1 將兔仰臥保定在保定臺上，胸左側(cè)心臟部位剪毛、酒精棉球或碘伏消毒。3.3.2 在第3、4 肋間胸骨左緣3 mm 處穿刺，針頭刺入心臟后，持針手可感覺到兔心臟有節(jié)律的跳動，血液會自然進(jìn)入注射器。3.3.3 此時如果抽不到血，可以前后進(jìn)退調(diào)節(jié)針頭位置，切不可使針頭在胸腔內(nèi)亂探，以防刺傷兔的心、肺，可以拔出重新穿刺。3.3.4 采血完畢后立即用干棉球按壓止血。4.注意事項4.1采血前應(yīng)充分?jǐn)U張血管，可使用酒精棉球反復(fù)擦拭或使用溫水?dāng)U張或用手指輕彈擴張血管。4.

5、2采血時應(yīng)先從遠(yuǎn)心端開始進(jìn)針，然后逐漸朝近心端推進(jìn)，進(jìn)針角度一般045°。4.3采血時應(yīng)注意血液流出是否順暢，若不順暢可用棉球沿血管輕擦，以擴張血管。4.4 采血結(jié)束后應(yīng)用干棉球按壓進(jìn)針部位進(jìn)行止血。三、兔給藥方法1.準(zhǔn)備的物品、器械：剃毛器、玻璃紙、紗布、膠布或彈性繃帶、酒精棉球、干棉球、生理鹽水、注射器等2.簡要：皮膚給藥、皮下給藥、肌肉給藥、灌胃、靜脈給藥等3.解說操作3.1皮膚給藥3.1.1給藥前準(zhǔn)備相關(guān)物品，包括剃毛器、玻璃紙、紗布、膠布或彈性繃帶、注射器等。3.1.2 核對動物編號及組別，抓取和保定動物。3.1.3 給藥部位：一般選擇脊柱兩側(cè)背部皮膚，試驗有特別要求除外。

6、給藥前去除背部約3cm×3cm 大小的被毛，注意不要損傷皮膚。 取相應(yīng)劑量的受試物均勻涂抹在去毛處約2.5cm×2.5cm 大小的皮膚上，先用一層玻璃紙覆蓋給藥部位，再用紗布覆蓋，然后用無刺激性膠布或彈性繃帶固定。給藥時膠布的固定的松緊程度應(yīng)合理，應(yīng)確保能將藥物固定于兔皮膚而又不導(dǎo)致動物窒息。 固定數(shù)小時后，除去受試物，并用溫水或無刺激性溶劑清潔給藥部位皮膚。4.6 如果實驗需要破損皮膚，則在給藥前，用消毒針在敷藥部位皮膚劃一“井”字，或用砂紙在敷藥部位皮膚摩擦，以皮膚表層損傷為限。4.7 記錄操作時間。若是長期毒性試驗，可記錄每組動物給藥開始時間和結(jié)束時間。4.8 如果受

7、試物為固體/粉劑，敷藥前先用適量水或其它賦形劑調(diào)成糊狀，以保證藥物與皮膚充分接觸。4.9經(jīng)皮給藥前須將動物給藥部位的毛發(fā)去除干凈，根據(jù)實驗的要求可使用剃毛器或脫毛藥品進(jìn)行除毛。3.2皮下給藥3.2.1注射前準(zhǔn)備相關(guān)物品，包括剃毛器、注射器、注射針頭、酒精棉球、干棉球等。3.2.2 核對動物編號及組別，抓取和保定動物。 根據(jù)實驗要求，可選擇肩胛間的頸背部或腹部等部位皮膚注射。注射前除去被毛，再用酒精棉球消毒注射部位皮膚。3.2.4 抽取相應(yīng)量的藥液，排盡針管內(nèi)的空氣；操作者一手提起家兔的注射部位皮膚，使其皺折成三角體，另一手持注射器自皺折下方刺入皮下，平行進(jìn)針一段距離，刺入后針頭可左右擺動，表示

8、已進(jìn)入皮下，便可緩慢推注，根據(jù)試驗需要進(jìn)行下一只動物的給藥操作。 注射給藥完畢，及時記錄給藥時間。若是長期毒性試驗，可記錄每組動物給藥開始時間和結(jié)束時間。 當(dāng)針頭刺入皮下時應(yīng)回抽注射器，避免注射入皮下血管內(nèi)。注射完畢后為避免藥物流出，可用干棉球按壓注射部位數(shù)秒。 給藥量：每個注射點常用給藥體積為1.0 mL/kg，每個注射點最大給藥體積為2.0mL/kg。3.3肌肉給藥3.3.1注射前準(zhǔn)備相關(guān)物品，包括剃毛器、注射器、注射針頭、酒精棉球、干棉球等。 核對動物編號及組別，抓取和保定動物。由助手一手固定兔兩前肢，另一手固定兩后肢?；蛴霉潭ㄆ鞴潭ā?剪去注射部位被毛，用酒精棉球消毒皮膚。 抽取相應(yīng)量

9、的藥液，排盡針管內(nèi)的空氣，一次一側(cè)注入量1 mL/只。3.3.5股四頭肌注射給藥：操作者一手固定給藥部位，另一手持注射器垂直刺入肌肉內(nèi)，回抽無血，即可進(jìn)行注射，如果有回血，應(yīng)拔出針頭，更換部位后重新進(jìn)針，避免誤將藥物注射入血液中。3.3.6臀部肌肉注射給藥：操作者一手繃緊注射部位附近皮膚，另一手持注射器與皮膚表面成約60o 角刺入肌肉，針頭刺入深度約1cm，如果回抽無血，即可緩慢進(jìn)行注射；如果有回血，應(yīng)拔出針頭，更換部位后重新進(jìn)針。 注射完畢，迅速拔出針頭，用干棉球按住注射部位片刻，以防止藥液漏出。 記錄注射時間。若是長期毒性試驗，可記錄每組動物給藥開始時間和結(jié)束時間。 多次肌肉注射給藥時，除

10、試驗特殊要求外，應(yīng)在左右兩側(cè)后肢肌肉輪流注射。應(yīng)注意避免傷及坐骨神經(jīng)。 如果進(jìn)行局部刺激性試驗，注射部位應(yīng)相對固定3.4灌胃3.4.1灌胃前準(zhǔn)備相關(guān)物品，包括注射器、導(dǎo)管、藥液、開口器及裝有清水的燒杯等。 核對動物編號及組別，按SOP-T-Ad-02 抓取和保定動物，使食道伸直。 抽取相應(yīng)量的藥液，排盡針管內(nèi)的空氣。3.4.4操作者將開口器由兔嘴角插入，由前向后旋轉(zhuǎn)，橫放在兔子上下頜之間，固定在舌面上；將導(dǎo)管經(jīng)開口器中央的小孔插入，慢慢沿上腭壁插入食道約15 cm18 cm達(dá)胃內(nèi)；插入過程要隨時觀察兔的反應(yīng)，防止導(dǎo)管插入氣管或盤旋于咽部；導(dǎo)管通過咽部時，兔會有輕微吞咽動作，但不會劇烈掙扎。3.

11、4.5將導(dǎo)管外口端放入清水中片刻，如水中無氣泡逸出，即可套上注射器，開始緩慢注入藥液，觀察兔若無掙扎，可以迅速注入余下藥液；如清水中有氣泡逸出，表明可能插入氣管內(nèi)，應(yīng)拔出重新插入。 注完藥液后，捏住導(dǎo)管外口，拔下注射器，抽3 mL5 mL 純凈水，然后重新套入導(dǎo)管，注入純凈水，將導(dǎo)管內(nèi)殘留的藥液全部沖入胃內(nèi)。 藥液注完后，先迅速拔出導(dǎo)管，然后取出開口器。3.4.8記錄給藥相關(guān)內(nèi)容，根據(jù)試驗需要進(jìn)行下一只動物的給藥。 一次給藥量：最大給藥體積15 mL/ kg。3.4.10 給藥先從溶媒對照組開始，再從低劑量至高劑量，最后再進(jìn)行市售品/陽性對照組。3.5靜脈給藥3.5.1注射前準(zhǔn)備相關(guān)物品，包括保定器、注射器、注射針頭或頭皮針、酒精棉球、干棉球等。 核對動物編號及組別，抓取和保定動物。 抽取相應(yīng)量的藥液，排盡針管內(nèi)的空氣。 后肢小隱靜脈給藥：用酒精棉球消毒注射部位皮膚，左手壓迫后肢注射部位上方近心端血管，使血管充盈；右手持注射器，將針頭插入靜脈，回抽若有回血，左手即放松，緩慢推注藥液。3.5.5耳緣靜脈給藥：用酒精棉球輕輕擦拭耳緣靜脈注射部位，使靜脈清晰可見；一手固定耳廓邊緣部位，另一手持頭皮針或注射器，針頭斜面朝上，將針頭由耳尖部刺入靜脈，見回血后緩慢注入藥液。3.5.6注射進(jìn)針應(yīng)盡可能從耳緣靜脈遠(yuǎn)心端開始，如果推注困難、滴注不暢或注射部位發(fā)白或局部組織腫脹時，表明